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032 热应激蛋白70用于环境监测的研究现状
热应激蛋白(HSP)是一组有核细胞内高度保守的由热应激基因编码的产物.其中以热应激蛋白70(HSP70)家族为突出,该家族在正常细胞中含量较低,当机体受到外界化学或物理刺激时,其合成量反而增加.本文就HSP70表达与重金属、杀虫剂、二硫化碳、多环芳烃、磁场、职业噪声及激光等环境有害因素的关系进行综述,为环境有害因素的监测及暴露人群的保护提供依据.
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预热对K562细胞肿瘤坏死因子α敏感性的影响
为探讨预热对肿瘤细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)敏感性的影响及其机理,将白血病患者胸腔渗出细胞系(K562细胞)在40℃预热不同时间(0、30、60、90、120、150和180min),使细胞热应激蛋白70(HSP70)高表达;然后将预热60min细胞和未预热细胞分别暴露于50、100、200和400U/ml的TNF-α16小时,用MTT比色法检测细胞活力.保持TNF-α浓度为100U/ml不变,观察预热时间对细胞TNF-α敏感性的影响,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定细胞HSP70的含量.结果:40℃预热后细胞的HSP70含量升高,在预热120min达到高,以后缓慢下降;预热细胞对相同浓度TNF-α的敏感性明显低于未预热细胞;对于相同浓度的TNF-α,预热120min的细胞对TNF-α敏感性低.结果提示,预热可以引起细胞HSP70表达增高,降低细胞对TNF-α的敏感性.
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苯并[a]芘对内皮细胞增殖活性的影响及与热应激蛋白70表达关系的研究
为探讨苯并[a]芘(BaP)对猪主动脉内皮细胞增殖活性的影响以及与热应激蛋白70(HSP70)表达的关系.采用离体培养猪主动脉内皮细胞,不同浓度BaP(0、0.5、1、10、20μmol/L)染毒24h,以MTT法分析不同浓度BaP对内皮细胞增殖活性的影响并以Western-blot 法检测内皮细胞HSP70表达的改变.结果发现,BaP染毒24h后,主动脉内皮细胞增殖活性随染毒剂量的增加而逐渐降低;低剂量(0.5μmol/L)染毒组HSP70的表达与对照组相比无明显差异,而中、高剂量(1、10、20μmol/L)抑制HSP70的表达.结果提示BaP抑制主动脉内皮细胞增殖生长活性;一定浓度的BaP能抑制主动脉内皮细胞HSP70的表达.
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微波辐射对人胰腺癌JF305细胞增殖的抑制作用及其机制
目的 探讨不同强度,频率为2450 MHz微波辐射对人胰腺癌JF305细胞增殖的抑制作用及其机制.方法 分别以强度为2.5、5.0、10.0、15.0和20.0 mW/cm2的微波处理JF305细胞20 min,24 h后采用MTT法检测微波辐射后对细胞增殖的抑制情况,Annexin V-FITC和PI双染检测细胞凋亡,Caspase-3活性检测试剂盒检测辐射后细胞Caspase-3活性;Western blotting法检测细胞内Caspase-3和HSP 70蛋白表达量.结果 微波辐射作用JF305细胞后,细胞增殖活性明显受到抑制,细胞发生凋亡,随着辐射强度的提高,细胞凋亡率明显增加.随着辐射强度的增加,细胞内Caspase-3活性同对照组细胞相比呈上升趋势,差异具有统计学意义;细胞内Caspase-3和HSP 70蛋白表达水平也随着辐射强度的增加呈上升趋势.结论 微波辐射对人胰腺癌JF305细胞增殖具有抑制作用,其可能机制是通过改变细胞内的应激水平而引起细胞凋亡.
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宁夏回、汉民族血清热应激蛋白70水平与2型糖尿病的相关性研究
目的 探讨宁夏回、汉民族血清热应激蛋白70(HSP70)表达水平与T2DM发病的关系.方法 应用病例对照研究法收集T2DM患者(T2DM组)201例,另选健康体检者(NC组)201名,采用ELISA检测两组血清HSP70的表达水平. 结果 T2DM组血清HSP70蛋白表达水平明显高于NC组[(0.147±0.126)vs(0.110±0.113) ng/ml](t=3.066,P=0.002).血清HSP70高表达者患T2DM风险是低表达者的2.307倍.回族人群血清HSP70表达水平高于汉族人群[(0.145±0.130) vs (0.114±0.111)ng/ml](t=2.591,P=0.010);回族人群HSP70高表达风险是汉族人群的1.760倍.腹型肥胖、非腹型肥胖T2DM组与NC组血清HSP70表达水平[(0.152±0.128)vs(0.128±0.119)vs(0.111±0.121) ng/ml]差异有统计学意义(F=5.335,P=0.005). 结论 T2DM患者中血清HSP70表达水平明显高于健康人群,高表达者患T2DM的风险高于低表达者.回族人群血清HSP70表达水平高于汉族,HSP70高表达的风险亦高于汉族.腹型肥胖T2DM患者血清HSP70表达水平高于正常人群.血清HSP70水平可能是影响T2DM患病的重要因素之一.
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空降兵跳伞后血浆的生化变化:初步调查与分析
目的探讨跳伞期间空降兵经历的生理和心理应激是否会改变空降兵血浆的生化指标.方法调查了对照组(未跳伞组)和跳伞组空降兵血浆和血清中激素水平(皮质醇、生长激素、胰岛素、胰高血糖素、类皮素、血管紧张素I和 II、醛固酮)、酶活性(超氧化物岐化酶、谷胱甘肽过氧化氢酶和谷胱甘肽硫转移酶)、自由基损伤指标水平(丙二醛,)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和主要热应激蛋白(HSP70)的差异性.结果跳伞组血清中生长激素、胰岛素、血管紧张素I、肾素活性和血浆中丙二醛、TNF-α、HSP70等的水平比对照值显著高.结论这些变化有可能作为评估空降兵是否经历异常应激、评价他们的健康状况和选择空降兵的有用生物标志物,但需进一步研究.
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正常中老年人外周血淋巴细胞HSP70的研究
目的研究正常中老年人外周血淋巴细胞热应激蛋白70(HSP70)的基础表达,分析HSP70表达水平与性别、年龄的关系,建立该年龄段、相关疾病人群的警戒参考值.方法选择102例正常中老年人,男性52例,女性50例;按年龄分为中年人组(40岁,35例)、老年前期组(50岁,33例)及老年人组(60岁,34例),分别抽取其外周血各5ml,分离淋巴细胞,采用免疫印迹法(Western blot)检测其淋巴细胞中HSP70,用多元线性回归、多元逐步回归及方差分析进行统计学处理.结果仅年龄因素与HSP70存在显著性相关关系,中年组,老年前期组及老年组HSP70的含量分别为198.11±77.72、125.46±60.09、86.08±34.12恢度值.并建立了"优"回归方程为Y(HSP70)=364.81-4.06X2(年龄),即随年龄的增加HSP70表达逐渐降低.结论测定正常中老年人外周血HSP70的表达水平可作为该年龄段正常人应激程度、应激能力、健康状况的评价指标,用于评估人体在各种应激状态下对抗不良环境、疾病的能力.
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热休克蛋白70在乳腺癌中的表达
目的 探讨乳腺癌组织中热休克蛋白70(HSP70)表达水平及其临床意义.方法 用免疫印迹法检测47例乳腺癌组织和43例良性乳腺病变组织中HSP70的表达.结果 HSP70在乳腺癌组织中的表达水平(142 582)升高.与良性乳腺病变组织(40 449)相比,差异有统计学意义(P<0.01);乳腺癌HSP70的表达与临床分期、淋巴结是否转移及肿瘤直径有关(P<0.05),而与年龄、月经状况及组织学分型无关(P>0.05).结论 HSP70在乳腺癌组织中存在一定程度的异常表达.提示,在乳腺癌的发病机制中可能发挥一定作用.
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热应激蛋白70在苯致小鼠骨髓细胞凋亡中的作用
目的探讨苯是否可导致细胞凋亡和热应激蛋白70(HSP70)在这一过程中的作用.方法取小鼠骨髓细胞,体外33 ℃,5%CO2孵箱中孵育过夜后,随机分为:普通组,以不同浓度(0,2,10 mmol/L)的苯染毒2 h;热应激组,细胞40 ℃受热1 h,33 ℃恢复1 h,再以不同浓度(0,2,10 mmol/L)的苯染毒2 h.同时分别设立不染毒细胞组用以观察HSP70表达.采用Western blot和流式细胞术检测HSP70表达水平和小鼠骨髓细胞凋亡程度.结果热应激后HSP70表达增加;热应激组细胞除0剂量染毒组外,其他剂量组细胞发生凋亡百分比均高于普通组.结论热应激后细胞HSP70的增加不能抑制苯所致小鼠骨髓细胞凋亡的发生.
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热应激蛋白70对苯致小鼠骨髓干细胞毒作用的影响
目的探讨热应激蛋白70(HSP70)在苯致小鼠骨髓干细胞毒性中的作用.方法取小鼠骨髓干细胞,体外33 ℃,5%CO2孵箱中孵育过夜.将细胞于40 ℃水浴受热0～90 min,于33 ℃恢复1 h,用Western blot 方法检测细胞HSP70表达水平.另取细胞分组为:不接触热应激组(非热应激组), 以不同浓度(0,2,10,50 mmol/L)的苯染毒2 h;热应激组,细胞经40 ℃受热1 h,33 ℃恢复1 h,再以不同浓度(0,2,10,50 mmol/L)苯染毒2 h.应用MTT比色试验检测细胞活性.结果小鼠骨髓干细胞受热应激30 min 后,HSP70轻度增加,而应激60,90 min 后,HSP70明显升高;热应激组细胞用2,10 mmol/L苯染毒2 h 后,其细胞活性较非热应激组高.而在0,50 mmol/L苯作用下其细胞活性又低于非热应激组.结论 HSP70的增加可以提供一定程度的毒物耐受能力或细胞保护功能.
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视屏作业人员职业紧张与热应激蛋白70表达关系的研究
目的 通过检测视屏作业人员外周血淋巴细胞中热应激蛋白70(HSP70)表达水平,结合职业紧张测试结果进行综合分析,探讨HSP70表达水平作为职业紧张监测生物标志物的可能性.方法 采用职业紧张量表(OSI)对宁夏某银行工龄＞1 a的108名视屏作业人员进行同卷调查,并按照职业紧张因素得分的四分位数间距法将其分为低、中、高3个紧张组,同时应用免疫印迹法(western bolt)测定外周血淋巴细胞中HSP70表达量.结果 低、中、高紧张组HSP70表达水平分别为6.20±0.78、5.83±0.62、5.62±0.48,3组间比较,差异有统计学意义(P＜0.01);相关分析结果也表明,随着紧张程度的增高,外周血淋巴细胞中HSP70表达水平降低(r=-0.376,P＜0.01),且有多个职业紧张因素与外周血淋巴细胞中HSP70水平关系密切.结论 外周血淋巴细胞中HSP70表达水平可作为评价慢性职业应激的直接、客观的指标.
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HSP70高表达对K562细胞化疗敏感性研究
目的研究化学因素引起的热应激蛋白70(HSP70)升高对K562细胞化疗药物体外敏感性的影响.方法用氯化镉诱导K562细胞使其HSP70高表达,在高表达细胞中分别加入甲氨蝶呤(MTX)、丝裂霉素C(Mitomycin C)、顺氯氨铂(PDD)、平阳霉素(Bleomycin)等4种化疗药物,药物浓度以临床一次用量的1/250为中剂量,中剂量的1/10、10倍分别为低剂量和高剂量,作用16h后用MTT比色法检测细胞活力;HSP70用RT-PCR检测.结果氯化镉可诱导细胞HSP70高表达,其中作用4h后表达高;HSP70高表达可以降低细胞对化疗药物的敏感性,HSP70表达水平越高,细胞对化疗药物的敏感性越低.结论非热诱导的HSP70高表达可以降低肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,其结果与热诱导的作用相似.
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HSP70高表达对K562细胞热耐力的影响
为探讨HSP70高表达与细胞热耐力的关系,用硫酸镉诱导细胞HSP70高表达;RT-PCR检测HSP70mRNA水平;观察HSP70水平对细胞热耐力的影响.结果:硫酸镉作用于细胞1h后,细胞的HSP70水平显著增高,HSP70水平高的细胞其热耐力明显强于HSP70水平低的细胞组;HSP70水平于细胞热耐力间正相关.结论:化学因素诱导的HSP70表达增高可以保护热暴露细胞,提高细胞热耐力.
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高温中暑病人血浆中热应激蛋白70与细胞因子关系的研究
目的探讨神经内分泌激素、热应激蛋白70(HSP70)水平与细胞因子在高温中暑发生的病理过程中的作用和相互关系.方法将74例高温中暑患者再分为轻症中暑组(16例)和重症中暑组(58例),另设置30例正常对照组,用RIA法测定皮质醇(Cor)、醛固酮(ALD)和垂体泌乳素(PRL);用ELISA法测定IL-2、sIL-2R、IL-6水平;用Western blot法测定血浆HSP70水平.结果 HSP70在高温中暑组、轻症中暑组和重症中暑组分别为4 211.2±1 286.2,4 550.1±1 838.1和4 137.8±1 207.5 pg/ml,均比正常对照组6 043.5±1 354.8 pg/ml为低,P值均＜0.01.IL-2水平分别为64.3±32.3、57.3±45.6、71.6±31.4 pg/ml,均较正常对照200.0±50.0 pg/ml为低.sIL-2R分别为54.9±33.3、48.7±37.2、55.7±35.0 U/ml,与正常对照组有统计学差异.IL-6水平各组均无差异.Cor分别为254.5±161.6、247.8±138.6、306.3±163.3 ng/ml,ALD为112.4±61.5、79.4±43.3、127.2±69.4 pg/ml,PRL为19.2±11.3、14.8±5.7、21.3±12.6 ng/ml,均比正常对照组为高(轻症中暑组ALD与正常对照组无差异).结论高温环境使神经内分泌-细胞因子-热应激蛋白之间网络的平衡失调,特别是IL-2水平下降可能是HSP70表达下降的重要因素之一,也可能是导致中暑发生的主要原因.
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南北方武警战士外周血淋巴细胞热、冷损伤时热应激蛋白70表达的差异
[目的]分析祖籍在宁夏、江苏、广东三个地区的武警士兵外周血淋巴细胞热、冷损伤时热应激蛋白70(HSP70)表达水平的差异性及其可能的意义.[方法]用流式细胞仪检测淋巴细胞中HSP70表达水平.[结果]不同地区比较发现,宁夏籍士兵基础和热损伤时(45℃,0.5 h)HSP70表达水平分别为(809.93±58.37)、(959.23±90.28)荧光道数,均比广东籍士兵分别为(754.34±60.82)、(887.29±72.85)荧光道数显著升高(P＜0.05);冷损伤条件下(10℃,1 h),三地区士兵HSP70表达水平差异未见显著性.[结论]南北方武警战士淋巴细胞基础和热损伤条件下HSP70表达水平存在差异性;冷损伤条件下,三地区士兵HSP70表达水平差异无显著性.
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蛋白激酶C在苯并(a)芘致内皮细胞HSP70基因表达改变中的作用
[目的]研究蛋白激酶C(PKC)信号途径在苯并(a)芘(BaP)影响热休克蛋白70(HSP70)基因表达中的作用.[方法]离体培养猪主动脉内皮细胞,不同浓度BaP(0、0.1、0.5、1、5、10 μmol/L)染毒24h,并以12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐(PMA)和抑制剂Staurosporine于不同时间点进行干预,以Westem-blot法检测各组细胞HSP70表达的变化.[结果]BaP抑制HSP70表达;PKC的激动剂(PMA)可完全或部分消除BaP对HSP70的抑制作用,而这种作用可迅速被PKC的抑制剂(Staurospone,STP)所阻断.[结论]BaP可能通过抑制内皮细胞PKC活性而抑制HSP70的表达.
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同步扫雷通磁作业前后艇员血浆热应激蛋白70的变化
目的:探讨某部队同步扫雷通磁作业前后艇员血浆热应激蛋白70的变化.方法:对参加同步扫雷实验的艇员在实验前和实验后进行血浆热应激蛋白70检测.结果:实验累计通磁63h10min～71h17min,通磁作业后艇员血浆热应激蛋白70明显升高.结论:实验条件对艇员血浆热应激蛋白70有一定程度的影响.
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人淋巴细胞HSP70蛋白多态性双向电泳-Western blot分析
目的:将双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DE)技术用于HSP70蛋白多态性分析.方法:分离5名志愿者淋巴细胞中的蛋白质组成分,使用2种蛋白酶抑制剂Leupeptin和PMSF进行处理,进行双向电泳,其中第一次等电聚焦电泳时间延长至24 h,电泳完毕,一面胶用于银染,另一面胶采用Western blot方法特异性鉴定其中的HSP70成分.结果:运用2-DE和Western blot,至少可以检测到5种以上HSP70亚型成员.结论:该方法可将HSP70各亚型充分分离.
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不同海拔高度体育专业新生冷热应激水平差异比较
目的比较山区与平原体育专业新生对冷、热应激的热应激蛋白70(HSP70)表达水平的差异.方法选取不同生源地体育专业新生,抽取外周血液,将其分为3个不同处理组,用流式细胞仪测定淋巴细胞中HSP70表达水平.结果山区学生HSP70基准水平和热应激处理后HSP70表达水平均与平原地区学生相比有差异(P＜0.05),冷应激时,两生源地学生没有差别;受到热应激和冷应激时,其HSP70表达水平均比其基准水平高,有显著性差异(P＜0.05).结论热应激时来自于山区学生与来自于平原地区学生HSP70表达水平存在差异.
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不同苯接触水平工人血浆热应激蛋白70抗体滴度与健康状况的关系研究
目的找出不同苯接触水平工人血浆热应激蛋白70抗体滴度与工人健康状况之间的关系.方法在某两厂选择高暴露工人30名、36名分别作为高暴露组和低暴露组,另选择不接触苯的工人40名作为对照组,采用酶联免疫吸附法测定其血浆热应激蛋白70抗体滴度,分析与其它健康指标之间的关系.结果高暴露组血浆热应激蛋白70抗体1∶ 20阳性率(26.7%)明显高于对照组(7.5%),并且高暴露组中血浆抗体阳性者不良症状发生率、阳性体征检出率、脂质过氧化水平均明显高于抗体阴性者.结论不同苯接触水平工人健康状况与其血浆热应激蛋白70抗体滴度有密切关系.
