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马尔堡病毒的流行病学及检测方法概述
马尔堡病毒病是由马尔堡病毒引起的一种致死率极高的烈性传染病.马尔堡病毒(marburg virus,MARV),也称绿猴病毒,形状象长丝,有时候盘绕成奇怪形状的粒子,是人类发现的第一种丝状病毒属病毒,与1976年发现的埃博拉病毒同属于丝状病毒科,是人类为致命的病原体之一.马尔堡病毒死亡率非常高,2005年非洲暴发的马尔堡病毒致死率高达90％,给人类社会带来了沉重的灾难.对于马尔堡病毒目前尚无特异性治疗措施,但是及早地检测和预防对防治马尔堡病毒病具有重要的意义.
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马尔堡病毒的实时荧光RT-PCR检测方法研究
目的 建立马尔堡病毒的实时荧光RT-PCR检测方法.方法 人工合成马尔堡病毒特异性核酸序列作为阳性对照模板,设计实时荧光RT-PCR引物、探针并构建反应体系,对反应条件进行优化,验证该方法的特异性、灵敏度.结果 建立的马尔堡病毒实时荧光RT-PCR检测方法对马尔堡病毒核酸检测有高度特异性,与1型～4型登革病毒、日本脑炎病毒和基孔肯雅病毒均无交叉反应,检测灵敏度为102拷贝/反应.结论 该方法灵敏度高、特异性强,适用于对马尔堡病毒的快速检验.
关键词： 马尔堡病毒 实时荧光RT-PCR 检测 -
两种出血热病毒新型液相芯片检测体系的建立
目的 建立两种出血热生物恐怖病毒(马尔堡病毒、埃博拉病毒)的新型液相芯片检测方法.方法针对马尔堡病毒、扎伊尔埃博拉病毒的特异性基因序列设计2对引物和相应的TSPE引物.经多重PCR扩增之后、加入连有TAG的TSPE引物特异性识别靶目标,标记有生物素的dCTP加入到延伸序列中,TAG与微球上的anti-TAG互补,SAPE与生物素反应,SAPE发射荧光信号,信号由液相芯片仪器检测.结果液相芯片检测体系能够正确的鉴定和检测两种出血热病毒,特异性强、灵敏度高,可用于病毒的高通量筛查.结论建立了多重PCR基因液相芯片快速检测两种出血热病毒的新方法.
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马尔堡病毒形态特征研究
马尔堡病毒(Marburg virus)和埃博拉病毒(Ebola virus)属于丝状病毒科(Filoviridae)成员.该科病毒可导致严重的丝状病毒出血热(Filovirus hemorrhagic fever,FHF),具有成为生物恐怖武器和生物战剂的潜能.为对马尔堡病毒的形态特征进行总结,以期为我国丝状病毒的电镜鉴定提供信息.本研究通过透射电子显微镜技术对马尔堡病毒形态进行观察,以明确其病毒形态特征.研究结果表明,负染后的马尔堡病毒呈现多形性(Pleomorphism),病毒颗粒呈直径均一、长度不等的棒状或丝状及眼镜蛇样、球形、分支状.我国至今尚无分离到丝状病毒的报道,对该病毒的监测、预警具有重要意义.透射电子显微镜技术是鉴定丝状病毒的重要方法之一,明确丝状病毒的形态特征有助于该类病毒的电镜鉴定.
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马尔堡病毒LAMP可视化快速检测方法的建立
目的 建立马尔堡病毒的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)可视化快速检测方法. 方法 人工合成马尔堡病毒保守的核蛋白(Nucleoprotein,NP)编码基因作为阳性标准品,设计LAMP扩增引物,以HNB作为可视化指示剂,通过LAMP浊度仪测定方法的灵敏度和特异性.并与常规PCR、实时荧光定量PCR作比较. 结果 建立的LAMP方法的灵敏度为100拷贝/μl,高于常规PCR及实时荧光定量PCR的灵敏度103拷贝/μl和102拷贝/μl,方法的特异性好,仅马尔堡病毒有扩增曲线且HNB指示剂颜色发生阳性改变,其他病毒扩增均为阴性.体系的扩增效率较高,试验仅需30 min. 结论 建立的HNB-LAMP检测方法简便、快速、灵敏、特异,适用于马尔堡病毒的可视化快速检测.
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马尔堡病毒G蛋白相关抗体和疫苗的研究进展
马尔堡病毒(Marburg virus,MARV)是一种可引起致命性出血热的病毒.它与埃博拉病毒同属丝状病毒科.二者的病毒结构、感染机制及引起的临床症状极为相似.然而相对埃博拉病毒而言,对于马尔堡病毒的研究较少.本文将对马尔堡病毒的病毒结构,特别是决定病毒侵染宿主的关键蛋白G蛋白(glycoprotein,GP)的结构、功能、针对G蛋白的保护性抗体和疫苗等新研究进展进行综述.
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马尔堡病毒GP蛋白高抗原性片段筛选及免疫性研究
目的 从马尔堡病毒GP蛋白上寻找与GP免疫原性相当的小片段用于疫苗设计,以克服全长蛋白缺陷.方法 基于GP(aa:1～681)结构及功能分区,构建3个片段[GP1△(aa:25～239)、GPM(aa:250～520)、GP2△(aa:436～648)],经原核表达后免疫小鼠,不同时间检测血清特异抗体滴度,检测脾淋巴细胞增殖指数及测定细胞因子浓度.结果 ELISA检测结果显示,GP2△组与GP混合组(GP1△+ GPM+GP2△)产生体液免疫能力相当,明显高于GP1△与GPM组(P<0.05);ConA非特异刺激后,GP2△组脾淋巴细胞的SI值高于GP混合组(P<0.05),GP混合组特异刺激后,GP2△组脾淋巴细胞的刺激指数(SI)值低于GP混合组(P<0.05);细胞因子检测中,GP2△组的白细胞介素2(IL-2)及干扰素γ(IFN-γ)浓度均高于对照组,低于GP混合组(P<0.05).结论 马尔堡病毒GP2△片段免疫小鼠能诱导与完整GP蛋白相当的体液免疫,同时也能诱导一定的细胞免疫, 可用来替代完整GP用于疫苗设计.
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马尔堡病毒疫苗研究进展
马尔堡病毒属丝状病毒科，为单股不分节段负链RNA病毒。1967年发现后已在非洲等地暴发14次，感染588人，死亡482人，总死亡率约为82％。该病毒进入人体后会造成患者多脏器感染，导致严重出血热，终致感染者死亡。目前临床上缺乏有效的预防性疫苗和感染后治疗药物，但一些疫苗在动物实验上显示有效。该文对马尔堡病毒结构、致病机制及疫苗研究进展进行了简要综述。
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含5种烈性出血热病毒的假病毒阳性参考品的制备
目的：利用慢病毒载体系统制备含有马尔堡病毒（Marburg virus）、扎伊尔型埃博拉病毒（Zaire Ebola virus）、苏丹型埃博拉病毒（Sudan Ebola virus）、拉沙热病毒（Lassa fever virus）和黄热病毒（Yellow fever virus）5种烈性病毒核酸片段的假病毒，为其核酸检测提供一种通用的阳性参考品。方法体外合成该5种病毒的目的基因片段，通过融合 PCR 技术将5个片段连接成一条基因，然后克隆到慢病毒表达载体上，并与其辅助载体共转染293T细胞；转染后分别于48、72 h 收集培养上清，用 DNase 和 RNase 进行消化处理及纯化浓缩，后提取核酸，利用普通PCR 和实时荧光定量 PCR 鉴定假病毒是否包装成功。结果测序结果表明，体外合成的该5种病毒的目的基因片段已正确连接并插入慢病毒载体中；载体转染293T 细胞后收集上清中的假病毒，提取核酸经上述两种 PCR 鉴定均可特异性检测到靶基因，表明已成功包装出含该5种出血热病毒靶基因的假病毒颗粒。结论该研究获得的假病毒颗粒可作为上述5种出血热相关烈性病毒核酸检测的通用阳性参考品。
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21世纪初期的传染性疾病的暴露
传染性疾病的出现包括许多相关的因素.全球旅行和贸易相互往来的增加,经济、政治和文化传播的相互作用,人类对人类、动物对人类的相互联系,这些都可使微生物在不经意间传播.21世纪初期新的因素已经被发现并且引发新的疾病爆发.控制传染性疾病传播的解决办法是要求全世界多学科、多方面合作.本文指出了出现的传染性疾病,概述了其发生的历史背景,探讨了出现这种疾病的因素.在21世纪初期已经出现了7种重要的病原体,主要包括:埃博拉和马尔堡出血热、猴痘、牛海绵状脑病、严重急性呼吸道征候群、西尼罗河病毒和禽流感.介绍了对每一种病原体的发生背景、病例分析及健康保健指导.
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生物防御用DNA疫苗
近年的生物防御疫苗研究集中于DNA疫苗.DNA疫苗对人以及环境相对安全、经济,并且多价联合DNA疫苗还可以提供多重保护,因此有良好的研发前景和潜在的实用价值,但也存在免疫原性不强和接种方式有待改进等问题.此文就炭疽杆菌、埃博拉病毒、马尔堡病毒、猴痘病毒、天花病毒和委内瑞拉马脑炎病毒等几种被美国NIH和CDC列为重要生物战剂的DNA疫苗研发现状作一综述.
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马尔堡出血热
1 引言目前全球已发现病毒性出血热的病原体有4个病毒科,即丝状病毒科(Filoviridae family)、沙粒病毒科(Arenaviruses family)、布尼亚病毒科(Bunyaviruses family)和黄病毒科(Flaviviruses family).
