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张家口地区汉族人MBL基因多态性及其血浆含量相关性分析
目的 建立检测MBL基因ExonⅠ54位密码子点突变的方法,初步调查健康汉族人MBL基因54位密码子点突变的情况,检测其血浆含量,探讨两者的相关性.方法 根据MBL基因序列设计引物,建立MBL基因点突变检测方法(即PCR-RFLP);用MBL Oligomer ELISA试剂盒测定其血浆浓度.结果 建立特异、敏感的检测MBL基因54位密码子点突变的方法,测得基因突变频率为0.23;血浆MBL含量平均值(1.99±1.51)mg/L;两者呈负相关(r=-0.62).结论 所建立的测定MBL的PCR-RFLP方法,特异性高,重复性好,较为灵敏(低检出量为160pg DNA);测定健康汉族人MBL基因点突变频率与其血浆含量,并证明两者呈负相关.
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中国和泰国人群DNA修复基因XRCC1多态性研究
目的 获得DNA修复基因X线修复交叉互补基因1 Arg399Gln基因型频率及基因频率在中国汉族及泰国人群中的分布特点.方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法结合核苷酸序列分析检测150例中国汉族及140例泰国人群XRCC1Arg399Gln等位基因及基因型分布频率.结果 基因型Arg/Arg,Arg/G1n,Gln/Gln在中国汉族人群中的频率分别为50.00%,44.67%,5.30%;在泰国人群中的频率分别为62.86%,31.43%,5.71%,基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡定律,中国汉族人群基因型频率分布和泰国、日本、韩国、瑞典人群相近(P＞0.05),与美国白人、美国黑人、葡萄牙、印度人群差异有显著性(P＜0.05).结论 XRCC1 Arg399Gln基因型在中国汉族和泰国人群中分布差异无显著性,该基因多态性存在种族和地域差异.
关键词： X线修复交叉互补基因1 PCR-RFLP Arg399Gln 多态性 -
PCR-RFLP和PCR-SSCP在食源性感染致病菌检验中的应用
目的 探讨PCR-RFLP和PCR-SSCP在食源性感染致病菌检验中的应用.方法 将鉴别靶基因设定为食源性感染14种常见致病菌的23S rRNA基因,扩增时运用通用引物PCR(UP-PCR),并运用单链构象多态性分析(SSCP)和限制性酶切片段长度多态性分析(RFLP)分析PCR产物的酶切片段.结果 针对23S rRNA基因片段的Hpa Ⅱ酶切产物的RFLP分析表明,不同种属的致病菌表现的RFLP图谱相似;SSCP分析显示,SSCP图谱具有较大的变异性,能够为细菌鉴定提供有效依据.结论 PCR-SSCP技术能够快速鉴定食源性感染致病菌,值得在临床推广应用.
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甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与阿尔茨海默病相关性探讨
目的探讨阿尔茨海默病(Alzheimer di sesse,AD)患者中甲基四氢叶酸还原酶基因的多态性及其与AD的相关性.方法利用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术对48例AD患者及86例对照者的甲基四氢叶酸还原酶基因基因进行分型,从而进行AD与甲基四氢叶酸还原酶基因多态性的相关分析.结果(1)AD病人甲基四氢叶酸还原酶基因中,基因型C/T占56.06%,明显高于对照组的34.97%(P＜0.01,RR=0.355),C/C占39.39%,明显低于对照组的62.94%(P＜0.01,RR=2.567),T/T占4.25%,与对照组2.09%有显著性差异(P＞0.05,RR=1.086).AD病人中甲基四氢叶酸还原酶基因等位基因C的频率为67.43%、相对危险率(RR)为0,594,T的频率为32.57%、RR为1.68 3与对照组的C为8 0.42%、T为19.58无显著性差异(P＞0.05).结论AD病人中甲基四氢叶酸还原酶基因基因型T/T(MTHFR*T/T)频率明显高于正常人,与AD存在正关联;而MTHER*C/T频率则明显低于正常人,与AD存在负关联.
关键词： Alzheimer病 甲基四氢叶酸还原酶基因 多态性 PCR-RFLP -
缺氧诱导因子-1α基因多态性与鼻咽癌的关系
目的 检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)C2028T多态性在鼻咽癌中的分布,初步探讨其在鼻咽癌发生发展中的作用和意义.方法 采用PCR-RFLP法对90例鼻咽癌患者外周全血中HIF-1αC2028T多态性进行检测,分析与病理分型、UICC分期、T分期、N分期的关系.结果 ①发现了C/C和C/T两种基因型,HIF-1α基因C2028T多态性分布为C/C纯合子频率87.8%(79/90),C/T杂合子频率12.2%(11/90),C等位基因频率93.9%(169/180),T等位基因频率6.1%(11/180).②鼻咽癌中HIF-1α因子C2028T基因型频率已达到遗传平衡,具有群体代表性(P＞0.05).③HIF-1α C/T基因型频率与N分期呈正相关(rs=0.39,P=0.00),与UICC分期可能存在正相关(rs=0.21,P=0.05),与病理分型(P=0.98)及T分期(P=0.88)无相关性.结论 HIF-1α C/T基因型可能促进了鼻咽癌的局部进展及淋巴结转移,其确切机制有待进一步研究.
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海南汉族人群HLA-DM基因多态性与结核病的相关性
目的 探讨HLA-DM基因多态性与海南汉族人群结核病的相关性.方法 用多聚酶链反应-限制性片段长度多态性(Polymemse chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)技术分析90例结核病人和96例汉族健康人群的HLA-DM等位基因及基因型.结果 结核病人组与健康对照组间HLA-DM等位基因频率及基因型频率无显著性差异(P>0.05).结论 HLA-DM基因多态性与结核病易感性之间无显著相关关系.
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贵州水族人群细胞色素P450 2C19基因多态性分析
目的 研究贵州水族人群细胞色素P450 2C19(CYP 2C19)的遗传多态性. 方法 应用PCR技术对贵州水族人群细胞色素P450 2C19基因进行扩增.并以SmaⅠ进行限制性酶切图谱分析. 结果 96份贵州水族人群血样中47份为CYP 2C19野生型纯合子(wt/wt),36份为CYP 2C19杂合子(ml/wt),13份为CYP 2C19突变型纯合子(ml/ml);结论贵州水族人群中的CYP 2C19基因多态性与其他民族相比具有一定的差异性.
关键词： 细胞色素P450 2C19 基因 PCR-RFLP -
三个封闭群小鼠线粒体DNAPCR-RFLP分析
目的:分析KM等3个封闭群小鼠线粒体DNA(mtDNA)的多态性,探讨实验小鼠的遗传监测方法.方法:PCR-RFLP技术,即PCR技术结合限制性内切酶片段长度多态分析(Restriction fragment length polymorphism,RFLP).结果:mtDNAD-Loop、tRNA1基因、ND3基因片段经HaeⅢ、HinfⅠ、EcoRV、HindⅢ、HpaⅠ、BamHⅠ、ApaⅠ、NdeⅡ、XhoⅠ、XbaⅠ、AluⅠ、RsaⅠ、StuⅠ、DraⅠ、AvaⅠ、HaeⅡ16种内切酶分别消化后,KM、NIH、ICR等小鼠品系内、品系间均表现出相同的酶切图谱,且与近交系小鼠BALB/C完全相同,未发现多态性.结论:KM、NIH、ICR小鼠与绝大多数实验小鼠一样,遗传背景较为狭窄,不同品系小鼠间遗传背景的差异远远低于动物种属间的差异.
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6个近交系小鼠线粒体DNA D-Loop区PCR-RFLP分析
目的:分析T739等6个近交系小鼠线粒体DNA D-Loop区的多态性,探讨近交系小鼠的遗传监测方法.方法:PCR-RFLP技术,即PCR技术结合限制性片段长度多态分析(Restriction fragment length polymorphism,RFLP).结果:D-Loop片段经Hae Ⅲ、HinfⅠ、EcoRⅤ、HindⅢ、HpaⅠ、BamHⅠ、ApaⅠ、NdeⅡ、XhoⅠ、XbaⅠ内切酶消化后,T739、TA2、615、BALB/C、C3H、C57BL/6J小鼠表现出完全相同的酶切格局,未发现多态性.结论:T739等6种近交系小鼠有较近的亲缘关系,遗传背景相对近似.
关键词： 近交系小鼠 mtDNA D-loop PCR-RFLP 多态性 -
CYP 17基因多态性与复发性流产易感性研究
目的 探讨CYP17 A2基因型与复发性流产(RPL)的遗传易感性的关系,为预防和治疗该病提供新的思路.方法 采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性方法(PCR-RFLP),针对CYP17基因MspA1 Ⅰ酶切位点,检测81例患有原因不明RPL病例组和98例有生育史的健康女性对照组间的差异.结果 RPL组和对照组CYP17 MspA1 Ⅰ位点的3种基因型A1/A1、A1/A2、A2/A2分布频率差异有统计学意义(x2=7.287,P=0.026).纯合突变基因型A2/A2、杂合基因型A1/A2与野生基因型A1/A1相比,RPL发生的危险度分别提高了2.188 (1.095～4.413)倍和3.095(1.240～7.722)倍.结论 CYP17 MspA1 Ⅰ多态位点3种基因型的分布与大同地区RPL发病风险有一定关联,突变基因型A2增加了RPL的发病风险,可能为RPL的遗传易感因素之一.
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转化生长因子β1基因多态性对煤工尘肺遗传易感性的影响
目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)基因-509位点多态性对煤工尘肺遗传易感性的影响.方法:以110例汉族煤工尘肺患者和110例汉族煤尘接触者为研究对象,进行问卷调查,采集其外周静脉血提取DNA并应用PCR-RFLP技术检测其TGF-β1基因-509位点多态性.结果:煤工尘肺患者中TGF-β1基因-509位点为C/T及T/T基因型的占81.8%,C/C基因型占18.2%;而煤尘接触者中则分别为53.6%和46.4%,两组之间差异有统计学意义(P＜0.05).调整接尘工龄后,C/T及T/T基因型罹患煤工尘肺危险度是C/C基因型的3.308倍(P＜0.05).logistic回归分析结果显示TGF-β1基因-509位点基因型、接尘工龄、吸烟3个因素均对罹患煤工尘肺有影响.结论:TGF-β1基因-509位点C/T及T/T基因型可能比C/C基因型者易于罹患煤工尘肺,接尘工龄、吸烟亦是煤工尘肺重要的影响因素.
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四川省两株脊髓灰质炎Ⅰ型野病毒的核酸序列分析
目的:探索脊髓灰质炎(脊灰)流行与野毒株性状的关系 .方法:选择了1991年安岳县和1992年会东县各一例临床诊断为脊灰的患者,从其粪便标本中各分离出一株病毒, 用微量中和试验进行血清学鉴定,PCR-RFLP法进行型内鉴定,对VP1区300个核苷酸进行测序.结果:血清学定型均为脊灰Ⅰ型病毒,经PCR-RFLP法检测,判为野病毒.核酸序列分析证实两株病毒与Sabin Ⅰ有明显差异为野病毒.两毒株间核酸序列不完全一致,有20个核苷酸的差异.结论:不同年份、不同地方流行株间的序列有差异.四川省脊灰流行与毒株间核酸序列的差异有关.但我国现行疫苗OPV能有效预防我省脊灰,基础免疫和强化免疫是预防和消灭脊灰的有力武器.
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PCR-RFLP方法对江苏省110株产志贺毒素大肠埃希菌O157分型研究
目的 优化PCR-RFLP方法,对不同年份不同来源的志贺毒素大肠埃希菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)O157进行分子流行病学探索.方法 应用多聚酶链反应(PCR) 一限制性片段长度多态性(restriction fragment length Polymorphism,RFLP)分析技术比较病人来源菌株的EcoRV和BglI 2种酶酶切图谱,对江苏省110株STEC O157菌株进行分型分析和聚类分析.结果:BglI酶切图谱条带少,图谱清晰明确.110株STEC O157菌株呈现遗传多态性,可分为15个RFLP型别,其中优势型别在不同年份、不同来源标本中都能检出.结论 STEC O157的PCR-RFLP分型推荐用限制性内切酶BglI,江苏省分离的STEC O157菌株具有遗传多样性.
关键词： 产志贺毒素大肠埃希菌O157 分子分型 PCR-RFLP -
ABO血型A201等位基因表达A抗原活性的分析
目的 了解ABO血型系统中A201等位基因表达的A抗原活性.方法 采用血型血清学方法检测1个家系2代3人血液和唾液各1份标本的ABO血型表型；应用Identifiler法医基因分析试剂盒作亲缘关系鉴定；PCR扩增ABO基因所有外显子区后作DNA测序分析,PCR-RFLP法同步检测A201等位基因中的序列变异.结果 亲缘关系鉴定显示在Identifiler的15个遗传标记系统中,父母均能够提供全部相应的等位基因给孩子,确定存在亲缘关系；然而采用不同来源的3份抗体作ABO血型检验时,出现其中之一的正定型试验否定母-子关系、反定型不能排除母子关系的矛盾现象.3个标本ABO基因的测序:父、母、子的基因型分别为O01/O01、A201/B101和A201/O01,支持反定型结果,提示A201等位基因在AB和A表型中所表达的A抗原活性存在明显的差异.PCR-RFLP法成功地同步鉴定出A201等位基因中的2个主要变异点467C/T和1059-1061 delC.结论 ABO血型A201基因在AB和A表型中表达A抗原活性可能因检测抗体不同表现出一定的差异；基因测序与PCR-RFLP法同步分析可简便快速地鉴定A201等位基因中的467C/T和1059-1061 delC.
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孕妇血浆中胎儿游离DNA在胎儿ABO血型鉴定中的应用
目的 探索1种新的胎儿ABO血型的检测方法,为预防ABO血型系统新生儿溶血病提供可靠依据.方法 收集医院2009年1～12月送检的O型孕妇34名,提取孕妇外周血血浆中胎儿游离DNA,利用聚合酶链反应——限制性片段长度多态性分型(PCR-RFLP)检测胎儿ABO血型.结果 在34例标本中,32例实验成功,且与胎儿出生后的ABO血型一致,其中A型11例、B型15例、O型6例,2份标本扩增失败.结论 利用孕妇外周血中胎儿游离DNA来检测胎儿ABO血型的方法,准确性高,安全性好,值得临床推广.
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现代生物技术在分子微生物生态学中的应用
微生物生态学研究中采用的分子生物学方法主要有标记核酸探针技术、基于PCR的分析方法、梯度凝胶电泳方法、磷脂脂肪酸谱图分析方法、rRNA序列同源性分析方法以及质粒、编码特殊蛋白质和低分子量RNA基因分析等.这些技术方法的采用在微生物生态学研究中取得了重大的突破,使得对某些微生物的研究成为可能,并在分子水平上阐述了其生态机制.
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煤工尘肺患者血清转化生长因子β1水平与其基因多态性的关系研究
目的探讨煤工尘肺患者血清转化生长因子β1(TGF-β1)与其-509位点基因多态性的关系.方法选择101例汉族煤工尘肺患者,采集外周静脉血,应用TGF-β1 ELISA 试剂盒检测其血清TGF-β1,应用PCR-RFLP技术检测其TGF-β1基因-509位点基因型. 结果血清TGF-β1在T/T突变型、C/T杂合型和C/C野生型三组煤工尘肺患者中分别为(90.029±17.774) ng/ml、(60.988±26.475) ng/ml、(55.960±28.833) ng/ml,差异有统计学意义(P<0.05);不同年龄、不同工龄、不同期别煤工尘肺患者间的差异无统计学意义(P>0.05). 结论煤工尘肺患者血清TGF-β1水平可能与TGF-β1基因-509位点多态性有关,尚未观察到不同年龄、工龄、期别的煤工尘肺患者血清TGF-β1水平差异有统计学意义.
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中国人Ⅱb型高脂蛋白血症apoE基因多态性的研究
目的探讨中国人Ⅱb型高脂蛋白血症患者载脂蛋白E（apoE）基因多态性及其与血脂和载脂蛋白水平的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性酶切片段长度多态性法（PCR-RFLP），分别对74例Ⅱb型高脂血症患者及230例血脂正常者的apoE基因型、空腹血脂及载脂蛋白AⅠ、AⅡ、B100、CⅡ、CⅢ、E进行了全面分析。结果Ⅱb型高脂血症患者的体重指数（BMI），血清甘油三酯（TG），总胆固醇（TC），低密度脂蛋白胆固醇（LDLC），非高密度脂蛋白胆固醇（nHDLC），载脂蛋白AⅡ、B100、CⅡ、CⅢ、E水平及TG/HDLC比值均较对照组显著升高（P<0.001）；血清高密度脂蛋白胆固醇（HDLC）水平及apoE/apoCⅢ比值显著降低(P<0.05)。Ⅱb型高脂血症组与对照组apoE基因型及等位基因频率分布均以E3/3和ε3高，Ⅱb型高脂血症组的ε2等位基因有增高的趋势，而ε4等位基因有降低的趋势(P>0.05)。携带ε2等位基因组血清TG、apoCⅡ、apoE水平及apoE/apoCⅢ比值较E3/3基因型组显著升高，而携带ε4等位基因组血清TC、nHDLC及apoE水平较E3/3基因型组显著升高(P<0.001))。结论ε2及ε4等位基因与Ⅱb型高脂蛋白血症患者的血清TG、TC、nHDLC、apoCⅡ及apoE水平升高有关。
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载脂蛋白E基因多态性及其与Ⅳ型高脂血症的关系
目的探讨载脂蛋白apoE的基因多态性,并寻求其多态性是否与Ⅳ型高脂血症有关联.方法采用多聚酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法,对206例Ⅳ型高脂血症患者(HTG组),250例正常对照者进行基因分型,同时用全自动生化仪测定其血脂和血apoE水平,后对其作分组比较.结果人群中存在有6种apoE基因型,分别为E2/2、E2/3、E3/3、E3/4、E2/4、E4/4.E2/2为91bp、83bp、61bp;E3/3为91bp、61bp、48bp、35bp;E4/4为72bp、61bp、48bp、35bp;E2/3为91bp、83bp、61bp、48bp、35bp;E2/4为91bp、83bp、72bp、61bp、48bp、35bp;E3/4为91bp、72bp、61bp、48bp、35bp.E3/3型是人群中分布多的一种基因型,HTG组与正常对照组均以E3/3基因型为主,其频率分别为72.8%和65.7%.ApoE的基因型和等位基因频率在Ⅳ型高脂血症患者和正常人之间存在差异,Ⅳ型高脂血症患者组等位基因ε2较正常对照组有所增高,分别为7.4%和16.4%(P＜0.01).同时研究还表明携带有等位基因ε2的Ⅳ型高脂血症患者的血清TG(2.58±1.98)、apoE(67.1±30.1)水平较含有等位基因ε3、ε4者高(P＜0.01),血清LDLC(3.11±0.80)水平则较其他两组低(P＜0.01),而ε3和ε4组在血脂含量上无显著性差异.结论等位基因ε2与Ⅳ型高脂血症存在有一定的关联.
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维生素D受体基因多态性与汉族散发性乳腺癌的相关研究
目的 探讨VDR基因多态性与云南汉族散发性乳腺癌的关联.方法 用聚合酶链反应-限制性长度多态性(PCR-RFLP)试验方法,对80例乳腺癌患者和80例正常人的VDR的TaqI多态位点进行检测,确定出VDR三种基因型,即TT、Tt、tt,用卡方、秩和检验对实验组和对照组进行统计分析.结果 VDR基因型TT、Tt和tt三种基因型的分布频率,乳腺癌患者组中分别是36.3%、48.6%、15.0%,对照组中分别是38.6%、46.3%和15.0%;乳腺癌患者组中T、t等位基因频率分别为60.6%、39.4%,对照组为61.8%、38.2%,VDR基因型及等位基因在两组间分布频率的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 VDR基因中TaqI酶切位点导致的基因多态性与云南散发性乳腺癌无关联,但由于VDR基因的酶切位点较多,具体了解此基因多态性与乳腺癌易感性的关联,需要对BsmI、ApaI、FokI等酶切位点进一步实验,才能对其有一个更客观的认识.
