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孕早期绒毛膜细胞原位培养和染色体制备方法的初步研究
目的:摸索建立一种快速简便的孕早期绒毛膜细胞原位培养和染色体制备方法.方法:对55例孕早期绒毛膜细胞酶消化解离后,进行原位培养和原位染色体制备.结果:建立了一种快速简便的孕早期绒毛膜原位培养和染色体制备方法,在55例孕早期绒毛膜细胞中,除3例因污染培养失败外,其余均获得成功,成功率达94.54%.结论:该方法成功率高、操作简便、培养时间短、细胞损耗小、染色体形态质量好,可供分析的染色体核型多,对异常胎儿能及早终止妊娠.
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MEBO 培植微粒皮再生疗法
湿润烧伤膏(MEBO) 培植微粒皮再生疗法是皮肤原位再生复原技术(MEBT/ MEBO) 的临床过渡外科技术.它针对目前深Ⅲ度烧伤治疗仍以切痂或截肢、切瘢植皮法,对瘢痕体质患者束手无策,应用切削痂技术的外科医生在不能短时间内掌握MEBO/ MEBT 治疗深Ⅲ度创面的现状来实现的快速封闭深Ⅲ度创面的疗法.其应用范围包括:大面积深Ⅲ度烧伤创面、开放性体表创伤缺损创面和电击伤创面等.主要步骤:1.由表入里地削除创面2/3 层坏死组织后,使用MEBO 液化排除创面坏死组织; 2.原位培养新鲜皮下组织; 3.新鲜皮下组织平皮后,进行微粒皮种植; 4.原位培养种植微粒皮使其形成正常皮肤组织,实现创面愈合.优点:1.缩短封闭创面疗程; 2.减少外科创伤和治疗痛苦; 3.原位再生复原皮下组织; 4.创面皮肤再生愈合; 5.质量远远优于切痂植皮术.缺点:愈后质量不及MEBT/ MEBO 疗法.
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细胞原位培养载玻片法在产前诊断中的初步应用
目的 建立稳定的羊水及绒毛细胞原位培养方法.方法 采用细胞原位培养载玻片法,对100例羊水和30例绒毛标本进行原位培养收获,制备好的玻片于GSL-120染色体全自动扫描系统进行克隆识别扫描.结果 结合染色体全自动扫描平台,建立了条件稳定、操作简单、分析过程简化的原位培养载玻片法.100例羊水标本均培养成功,其中异常4例,核型分别为2例46,XX,inv(9),1例47,XX,+21,1例45,XY,rob(13；14)；30例绒毛标本中,10例为介入性产前诊断标本,均培养成功,核型均正常；余20例为流产绒毛,成功17例,其中5例异常,核型分别为2例47,(XX/XY),+16,1例47,XX,+14,1例45,X,1例47,XX,+3.结论 细胞原位培养载玻片法培养周期短,操作简便,染色体形态好,核型多且完整,配合染色体全自动扫描系统,大大缩短阅片时间,能更加及时准确地得出产前诊断结果.
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成人成牙本质细胞原位培养的初步研究
目的:建立成人成牙本质细胞原位培养模型.方法:取20～30岁成人新鲜、健康、完整的第三磨牙30颗,随机分为拔髓实验组、有血清培养组和无血清培养组,每组各10颗.冠根分离,拔髓,将成牙本质细胞保留在牙冠上,进行有血清和无血清的原位培养,每天换液,连续培养7d.通过光镜检测细胞保留情况,扫描电镜检测细胞形态和分布特征,台盼蓝检测细胞活性,对模型进行鉴定.结果:室温拔髓后,成牙本质细胞保留在髓室壁上,在7d的培养过程中细胞有活性,形态保持良好.结论:采用有血清和无血清培养,均可建立成人成牙本质细胞培养模型.
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孕早期绒毛膜细胞原位培养法用于地中海贫血的产前诊断
目的 探讨孕早期绒毛膜细胞原位培养及在地中海贫血(简称地贫)产前诊断中的应用价值,评价其在产前诊断中的可行性.方法 用COOK公司的绒毛活检吸管,经宫颈吸取绒毛膜细胞(chorionic villus samplings,CVS)标本,分两组:1组直接行地贫基因诊断,另1组进行绒毛膜细胞原位培养,收获细胞后行地贫基因诊断.结果 取材手术69例,64例取材成功,63例绒毛膜细胞原位培养成功,1例培养失败,培养成功率为98.44%.64例中有6例绒毛取材量极少,无法直接提取DNA行地贫基因诊断,经培养后完成基因诊断.产前诊断结果:63例中29例正常儿,异常34例,其中:Bart's胎儿2例,HbH胎儿1例,α地贫基因携带者12例,HbCS胎儿2例,β地贫纯合子3例,β重型地贫6例,β地贫基因携带者5例,α+β复合地贫纯合子1例,α+β复合地贫杂合子2例.结论孕早期绒毛膜细胞原位培养方法简单易行,技术稳定,需标本量少,安全,结果可靠.可应用于地贫的产前诊断.
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羊水细胞培养及制备方法改进的探讨
目的:探讨改进的羊水细胞培养及制备方法对产前诊断的价值.方法:对羊水细胞原位培养法进行改进,采用等量羊水与培养液混合培养,选择适当的时机终止培养,同时对羊水细胞染色体的制片方法作了改进.结果:64例羊水细胞培养及制备无一失败,发现1例44,XX,-14,-21,t(14;21)(p11;q11).2例母血污染的羊水培养也获得成功.结论:本文改进的方法,克服了传统方法羊水细胞不易培养,培养周期长,染色体核型数量少,分散较差的缺点,获得了满意的效果.
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羊水细胞原位培养及核型制备方法的改进
目的 羊水染色体核型分析是产前诊断染色体疾病的金标准,但由于羊水培养的影响因素较多,故其成功率较低.探讨影响羊水细胞原位培养成功率的相关因素,探索核型制备的条件,建立一种成功率高且较为稳定的羊水细胞染色体制备方法.方法 对具有产前诊断指征的435例孕妇行羊膜腔穿刺术抽取羊水进行细胞培养.根据羊水沉淀物的颜色和大小分为5～10 mm3白色团块、5～10 mm3棕色团块、10～15 mm3棕色团块、5～10 mm3鲜红色团块、10～15 mm3鲜红色团块组,根据采集羊水过程中使用器具的材质分为塑料组、塑料联合玻璃组、玻璃组,各30例,分析羊水离心后沉淀情况及不同材质操作器具的培养结局.选取培养良好的培养瓶和培养皿共100例,根据制片时环境温度和湿度分为20℃室湿20％组(室温:20℃,室湿:20％)、28℃室湿20％组、20℃湿度50％组、28℃湿度50％组,每组25例,对核型制备过程中不同温度和湿度下的核型分散程度评分.结果 435例羊水培养中成功406例,培养成功率93.3％.培养结果显示,10～15mm3棕色团块组和10～15mm3鲜红色团块组细胞培养成功率(72.72％、56.25％)较5～10 mm3白色团块组培养的成功率(95.98％)明显降低(P<0.01);10～15 mm3鲜红色团块组细胞培养成功率较5～10 mm3鲜红色团块组培养的成功率明显降低(56.25％vs 90.48％,P<0.01).塑料组和塑料联合玻璃组细胞培养成功率(56.67％、70.00％)较玻璃组细胞培养成功率(93.33％)均明显降低(P<0.01).20℃室湿20％组、28℃室湿20％组、20℃湿度50％组载玻片核型分散程度的得分[(52.48±2.44、66.36±2.25、71.60±2.34)分]明显低于28℃湿度50％组[(86.36±1.59)分],差异有统计学意义(P<0.01);20℃室湿20％组、28℃室湿20％组载玻片核型分散程度的得分明显低于20℃湿度50％组(P<0.01).结论 对于有明显鲜血性的羊水,立即加入0.5 mL无菌肝素可提高羊水培养的成功率;全部采用玻璃器具可有效地提高羊水细胞培养的成功率;控制好分散过程中环境的温度和湿度(28℃、50％),可以制作出合格的核型分析载玻片.
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羊水细胞原位培养与产前诊断镶嵌体分析
目的 了解载片培养瓶对羊水细胞原位培养的效果,并探讨产前诊断羊水染色体中镶嵌体不同分级水平与临床意义.方法 使用载片培养瓶(研究组)与载片培养皿(对照组)对1 274例有产前诊断指征的孕妇进行羊水细胞原位培养并G显带分析.结果 研究组与对照组培养时间平均为6.7和8.9 d,细胞克隆数平均为11.5和6.0个,两组培养天数和细胞克隆数比较差异有统计学意义(x2=1814.4,P＜0.01;x2＝2049.04,P＜0.01).羊水镶嵌体检出34例,Ⅰ级水平25例,Ⅱ级水平7例,Ⅲ级水平2例,其中真性镶嵌体3例.结论 载片培养瓶对羊水细胞原位培养优于载片培养皿,羊水原位培养镶嵌体分级水平的研究对产前诊断有非常重要的临床意义,Ⅱ级水平不能认为全是假性镶嵌体.
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改良绒毛细胞原位培养染色体制备的临床应用
目的 探讨改良绒毛细胞原位培养和染色体制备的应用价值.方法 对20份绒毛组织标本经酶消化解离后,进行原位培养、染色体制备及核型分析.结果 20例绒毛标本,培养成功率为100%,检出异常核型8例.结论 该方法成功率高、操作简便、培养时间短、细胞损耗小,可供分析的染色体核型多,染色体形态质量好.
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改良羊水细胞原位培养和传代培养法--附208例羊水染色体分析
目的:建立一种操作简便易于推广的羊水细胞原位培养及传代培养方法.方法:抽取208例孕16-23周孕妇的羊水,离心作原位培养,6 d后换液,换下的上清液传代培养,原位培养和传代培养在观察到多个细胞集落和较多圆形细胞时直接在原位收获制片分析.结果:208例羊水全部培养成功,并发现多例异常.其中199例经原位培养即获得足够分裂相,培养时间6-9d,平均7 d,平均每例分裂相≥100个,一般8-10 d报告结果;9例由于原位培养不能获得足够分裂相或实验过程失误等而依靠传代培养,培养时间12-15 d,16-18 d报告结果.结论:羊水细胞原位培养法较传统胰酶消化法染色体分裂相多,分带清晰,核型完整,成功率高,出报告时间短等优点,传代培养后收获的细胞可做为前者的补充或其它研究.
