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耐多药结核分枝杆菌异烟肼耐药相关基因katG突变分析
异烟肼(isoniazid,INH)是一种重要的抗结核药物,其在细菌体内被过氧化氢酶-过氧化物酶KatG氧化为乙酰异烟肼自由基和活性氧自由基等活性物质,进而攻击结核分枝杆菌多个靶位点来发挥杀菌作用[1].Zhang等[1]通过Southern印迹杂交(Southern blot)发现结核分枝杆菌katG 基因缺失和异烟肼耐药相关.研究表明,异烟肼耐药与许多基因相关,发生频率高的为katG编码区和inhA启动子区的突变[2-3],katG315位突变常见,有30％～94％的耐药株发生该突变[2,4],但国内对于该基因其他位点的突变研究较少.本研究通过对河南省耐多药(multidrug resistant,MDR)结核分枝杆菌katG编码区全长突变进行分析,进一步分析异烟肼的耐药机制.
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RP-HPLC法测定患者血浆中异烟肼及乙酰异烟肼的浓度
目的 建立高效液相色谱法测定患者血浆中异烟肼和乙酰异烟肼的浓度.方法 色谱柱为Inertsil ODS-SP(4.6 mm×150 mm,5μm),以甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钾(三乙胺调pH=5.6)为流动相,柱温:40℃,流速:1.0 mL/min,进样体积:20 μL,检测波长:261 nm.结果 三组分在线性范围内与峰面积线性关系良好(r2 ＞0.99),日内、日间精密度RSD＜ 10％,平均回收率为80％ ～ 120％.结论 本方法专属性好,样品处理简单,符合生物样品分析要求.
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HPLC法同时测定人血浆中异烟肼及乙酰异烟肼的浓度
目的 建立HPLC法同时检测人血浆中异烟肼及其代谢产物乙酰异烟肼的浓度.方法 采用HPLC法,血浆用20％三氯乙酸沉淀蛋白后,旋涡混匀1 min,离心10 min,取上清液进行分析,以外标法定量.色谱柱为SinoChrom ODS-BP(250 mm×4.6mm,5μm),保护柱为Hypersil ODS(C1s),流动相为乙腈-0.05 mol· mL-1磷酸二氢钾溶液(含0.04％三乙胺)(3∶97),流速为1.0 mL· min-1,柱温为30.0℃,检测波长为265 nm.结果 异烟肼和乙酰异烟肼质量浓度在0.25～20.00 mg·L-1内线性关系良好,回归方程分别为y=1 113.0x-150.9(r=0.999 8)和y=529.8x-131.9(r=0.999 7),定量下限均为0.25 ng·L-1;异烟肼的回收率为100％～104％,乙酰异烟肼为90％～106％;低、中、高浓度的日内、日间精密度良好(RSD均＜15％).结论 本方法专属性好,样品处理简单,适用于人血浆中异烟肼及乙酰异烟肼的含量测定.
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N-乙酰化酶2基因型对中国肺结核患者异烟肼代谢的影响
目的 研究N-乙酰化酶2(NAT2)基因型对中国肺结核患者异烟肼(INH)代谢的影响.方法 采用反向点交法(RDB)检测中国肺结核患者NAT2基因型;柱前衍生化高效液相色谱法检测服药2 h后血浆中INH及其代谢物乙酰化INH(Ac-INH)浓度.结果 46例患者基因型包括野生型wt/wt(n=17)、杂合子m/wt(n=22)、突变型纯合子m/m(n=7).血浆INH及AcINH浓度分别为(12.74±10.51)和(12.49±9.61)μmlo·L-1 3个基因组玳H、AcINH浓度比为1:1.37:1.77和1:0.77:0.75;3组AclNH与INH比值(RA/I为1:0.52:0.40(P<0.01).结论 不同NAT2基因型的结核患者对INH代谢能力差异显著,存在基因剂量现象.NAT2基因分型对结核患者合理用药具有重要意义.
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高效液相色谱法同时测定人血浆中异烟肼、乙酰异烟肼和吡嗪酰胺的浓度
目的：建立高效液相色谱法同时测定人血浆中异烟肼、乙酰异烟肼和吡嗪酰胺的浓度。方法：色谱柱为Inertsil ODS-SP（4.6 mm×150 mm，5μm），以甲醇∶0.05 mol·L-1磷酸二氢钾（三乙胺调pH 5.6）为流动相，柱温：40℃，流速：1.0 mL·min-1，进样体积：20μL，检测波长：268 nm。结果：3组分在线性范围内与峰面积线性关系良好（r2>0.9940），日内、日间精密度RSD<10%，平均回收率在80%~120%。结论：本方法专属性好，样品处理简单，符合生物样品分析要求。
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高效液相色谱法同时测定血浆中异烟肼和乙酰异烟肼
目的:建立同时测定血浆中异烟肼和乙酰异烟肼的高效液相色谱(HPLC)法. 方法:血浆样品经10%高氯酸沉淀蛋白后,取上清液直接进样分析.选用Lichrospher C18柱(250 mm×4.6 mm,7μm),流动相为乙腈∶ 20 mmol/L磷酸缓冲液(含2 mmol/L庚烷磺酸钠)(2:98,v/v),检测波长266 nm. 结果:异烟肼和乙酰异烟肼的血药浓度线性范围分别为0.12～15.89 mg/L(r=0.998)和0.13～17.08 mg/L(r=0.997) ,提取回收率分别为78.1%～95.6%和83.4%～94.4%,日内和日间变异系数(RSD)均<10%. 结论:本研究建立的方法简便、准确,能满足药代动力学研究中生物样品测定的要求.
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同时测定血浆 INH、AcINH、RFP 和 PZA 的高效液相色谱法建立及其在肺结核患者中的应用
目的：建立同时测定血浆异烟肼（ INH）、乙酰异烟肼（ AcINH）、利福平（ RFP）、吡嗪酰胺（ PZA）的高效液相色谱法（ HPLC），并验证其在肺结核患者中的应用效果。方法 HPLC色谱柱为Waters Xselect-HSS T3（250 mm ×4．6 mm，5μm），以乙腈和磷酸二氢钾为流动相，柱温40℃，流速0．8～1．0 mL／min，进样体积20μL。同时进样含INH、AcINH、RFP、PZA对照品的血浆，检验方法的专属性、线性关系、精密度和准确度、稳定性及回收率。取联合服用INH、乙胺丁醇、RFP和PZA的10例肺结核患者的血浆样本，采用上述HPLC测定INH、AcINH、RFP和PZA的血药浓度。结果血浆样本中INH、AcINH、RFP和PZA各组分有较好的分离，互不干扰；在线性范围内与峰面积线性关系良好（r2＞0．99）；日内、日间精密度均＜10％；稳定性较好；回收率为80％～120％。肺结核患者中除1例AcINH和1例RFP血药浓度低于线性范围外，其余数据均在线性范围内。结论成功建立了同时测定血浆INH、AcINH、RFP、PZA的HPLC方法，该方法专属性好，样品处理简单，符合生物样品分析要求。
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HPLC法检测脊柱结核病椎内外异烟肼和乙酰异烟肼浓度
目的 研究脊柱结核正规化疗后异烟肼及代谢产物在病椎内外分布的特点.方法 23例应用3SHRE/15HRE化疗方案结合手术治疗的脊柱结核患者,术前按年龄分4组行脊柱CT检查,测量核病灶、病灶外病椎及正常椎骨CT值.化疗第4周手术,术中再取病椎各部作高效液相色谱分析(HPLC),测量抗结核药异烟肼(INH)及其代谢产物乙酰异烟肼(AC-INH)浓度.结果 (1)INH和AC-INH在血液中的浓度水平高,在正常髂骨和非硬化骨病椎中浓度次之,硬化壁和病灶中浓度极低.(2)在病椎非硬化骨中INH和AC-INH浓度与正常椎骨之间无统计学差异(P<0.05).(3)在病椎硬化骨中INH和AC-INH浓度与正常椎骨之间有统计学差异(P<0.05).(4)在病灶中几乎测不出该药浓度.结论INH和AC-INH在脊柱结核患者正常椎骨与非硬化骨的病椎中可达到有效治疗浓度,而在病灶及有硬化骨的病椎中难以达到有效的药物浓度.
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高效液相色谱法测定人血浆中异烟肼及乙酰异烟肼浓度
目的:建立以高效液相色谱法测定人血浆中异烟肼(INH)及其代谢物乙酰异烟肼(AcINH)浓度的方法.方法:血浆加入三氯醋酸沉淀蛋白后,将上清液分为2份,一份加入蒸馏水,另一份加入盐酸, 80℃孵育1h后,分别加入 1%桂皮醛进行柱前衍生化.色谱柱为 Hypersil BDS C18,流动相为 0.02 mol/L磷酸二氢钾(pH=4.0)-乙腈(69∶31),检测波长为 340nm,流速为 1ml/min.结果: INH检测浓度在 0.57～145.88μmol/L范围内线性关系良好, INH和 AcINH平均回收率分别为 101.1%、101.5%,日内、日间相对标准差均 <10%.结论:本法可用于异烟肼血药浓度监测及乙酰化酶代谢能力研究.
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HPLC法测定血浆中异烟肼和乙酰异烟肼的质量浓度及异烟肼在老年患者体内的药代动力学研究
目的：建立高效液相色谱法测定患者血浆中异烟肼和乙酰异烟肼质量浓度的方法，并对目前应用较多的老年肺结核患者进行药代动力学研究。方法10名老年患者，年龄大于65岁，诊断为肺结核，口服给予异烟肼0．3g，不同时间采集患者血样，用HPLC法测定血浆药物质量浓度，用DAS3．1软件计算药代动力学参数。结果用非房室模型计算出了异烟肼在患者体内的药代动力学参数。结论该方法简单、灵敏、准确，适用于体内异烟肼药代动力学分析。异烟肼在老年患者的药代动力学特征与年轻人群的药代动力学特征存在差异。
