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Med19表达与前列腺癌临床病理关系分析
目的:分析Med19在不同病理类型的前列腺癌组织中的表达情况及其与临床病理分级之间的关系.方法:选取2016年1月至2018年6月我院收治的前列腺癌患者病理标本70例,70例癌旁组织和20例前列腺增生标本作对照,采用免疫组化S-P法检测组织Med19表达,应用统计学分析Med19表达强度与临床病理分级的关系.结果:70例PCa组织中,39例表达阳性(55.7％),70例ATC组织8例表达阳性(11.4％),20例BPH组织中2例表达阳性(10.0％),三种组织中的表达差异明显,有统计学意义(P<0.001);Med19在Gleason<7的PCa组织中阳性表达4例(16.0％),在Gleason=7的PCa组织中阳性表达19例(63.3％),在Gleason>7的PCa组织中阳性表达12例(80.0％),三组差异存在统计学意义(P=0.002);Med19在PT=2的PCa组织中阳性表达24例(42.9％),在PT≥3的PCa组织中阳性表达12例(85.7％),两组差异明显,有统计学意义;Med19在PSA<10的PCa组织中阳性表达12例(32.4％),在10≤PSA<20的PCa组织中阳性表达8例(42.1％),在PSA>20的PCa组织中阳性表达10例(71.4％)在PSA>20组的阳性表达高于其他两组,但无显著性差异,无统计学意义(P=0.075).结论:Med19在前列腺癌组织中过表达,且与前列腺癌的Gleason评分及病理分期密切相关.
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Med19在舌鳞癌组织中的表达及 对舌鳞状细胞癌Tca8113增殖的影响
目的 通过检测Med19在舌癌组织表达的基础上,探讨Med19表达下调对Tca8113细胞增殖的影响.方法 应用免疫组织化学染色方法检测Med19在舌鳞癌组织及舌乳头状瘤组织中的表达,分析Med19的表达分布及表达水平;构建Med19 siRNA并转染人舌鳞癌细胞Tca8113,应用MTT检测细胞增殖的改变.结果 免疫组织化学染色结果显示Med19在舌癌组织中高表达;建立siRNA-Med19重组慢病毒载体并转染Tca8113,MTT结果显示Med19下调可以抑制细胞增殖.结论?Med19在舌鳞状细胞癌中高表达;通过siRNA-Med19慢病毒载体转染Tca8113细胞可以抑制细胞增殖,为后续体内实验奠定坚实的基础.
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Med19基因在恶性肿瘤中的研究进展
恶性肿瘤是严重危害人类健康的疾病,随着人们生活方式、生活环境的改变,恶性肿瘤的发病率越来越高,死亡率一直居于首位.肿瘤的发生、发展主要与癌基因的突变、扩增、过度表达以及抑癌基因的突变、失活等密切相关.在人体内Med19基因已经定义为肿瘤相关基因,目前已发现Med19与多种恶性肿瘤的增殖、转移及周期调控有关.现就Med19基因在恶性肿瘤中的研究进展作如下综述.
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非小细胞肺癌组织Med19蛋白表达与DNA倍体和SPF相关性分析
目的:探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织Med19蛋白表达与DNA倍体和S期比例(Sphase fraction,SPF)的关系.方法:收集山东省肿瘤医院2010-02-01-2011-07-31手术治疗、临床病理资料完整的56例NSCLC组织,应用免疫组化技术检测56例NSCLC组织中Med19蛋白水平,应用流式细胞术检测癌组织DNA倍体和SPF.结果:56例NSCLC组织中Med19阳性45例,阴性11例,二倍体14例,异倍体42例.14例二倍体肿瘤中Med19蛋白表达阴性6例,阳性8例;42例异倍体肿瘤中Med19蛋白表达阳性37例,阴性5例,异倍体肿瘤Med19蛋白阳性表达显著高于二倍体肿瘤,x2 =6.373,P=0.012.27例低SPF的患者中Med19蛋白表达阴性9例,阳性18例;29例高SPF的患者中Med19蛋白表达阴性2例,阳性27例,高SPF的患者肿瘤组织Med19蛋白阳性表达显著高于低SPF患者,P=0.018.结论:Med19作为潜在癌基因在NSCLC细胞增殖和多倍体形成中起一定作用,有望成为一个新的肿瘤治疗靶点.
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肺癌组织Med19和Ki-67蛋白表达临床意义的研究
目的:探讨肺癌组织中Med19蛋白表达的临床意义及其与Ki-67表达的关系.方法:应用免疫组织化学技术检测56例肺癌患者肺组织Med19和Ki-67蛋白的表达.结果:癌旁组织Med19蛋白表达的阳性表达率为1.8％(1/56).癌组织Med19蛋白表达强度明显增加,以细胞核着色为主,阳性表达率为80.4％(45/56).癌组织Med19阳性率显著高于癌旁组织,提示Med19蛋白表达与肺癌发生有关,P＜0.05.Med19蛋白表达与肺癌患者临床分期和淋巴结转移有关,P＜0.05；但与年龄、性别、病理类型和组织分级无关,P＞0.05.统计分析结果显示,癌组织Med19蛋白与Ki-67表达正相关,P=0.008.结论:Med19与Ki-67表达呈正相关.Med19与肺癌发生、发展和增殖有关,可能作为潜在癌基因在肺癌进展中起一定作用,有望成为一个新的肿瘤治疗靶点.
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siRNA-Med19对人肺癌A549细胞Med19转录、表达的影响
目的 研究siRNA-Med19对人肺癌A549细胞Med19的影响.方法 利用前期已合成的siRNA-Med19慢病毒载体,感染A549细胞,并以无病毒感染组作为空白对照组,以慢病毒载体感染组作为阴性对照组.采用荧光图片和白光图片对比方法判断细胞的感染率;RT-PCR法检测细胞Med19mRNA的转录水平; Western 印迹法检测细胞Med19蛋白表达水平.结果 慢病毒载体对人肺癌A549细胞的感染率在80%以上,siRNA-Med19慢病毒感染组Med19mRNA转录水平明显降低,敲减效率大于70%,Med19蛋白表达量也明显降低.结论 siRNA-Med19慢病毒载体可以高效感染人肺癌A549细胞,siRNA-Med19对A549细胞Med19的转录和表达具有明显的抑制和消减作用.
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Med19基因沉默对胃癌细胞增殖和细胞周期的影响
目的 研究Med19基因在胃癌MGC-803细胞中沉默后对细胞增殖和周期的影响.方法 应用shRNA慢病毒载体感染胃癌MGC-803细胞沉默Med19基因,通过MTT和克隆形成实验观察Med19基因在胃癌细胞增殖中的作用,并用流式细胞术验证抑制Med19基因对细胞周期的影响.结果 构建的shRNA慢病毒载体感染MGC-803细胞后细胞增殖能力显著降低、细胞克隆形成能力明显减弱,同时,细胞周期阻滞于G1期.结论 Med19基因沉默后胃癌细胞的增殖能力和细胞周期均受到显著影响,提示Med19在肿瘤形成过程中具有重要作用.
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Med19在人胃癌中的表达及其临床意义
目的 研究Med19基因在人胃癌组织中的表达情况及临床意义.方法 应用免疫组化和RT-PCR方法检测Med19 基因在胃癌组织、癌旁胃组织及正常胃组织中的表达.结果 胃癌组织中Med19表达阳性率为71.7%(43/60),显著高于癌旁胃组织和正常胃组织(P<0.01).癌旁胃组织和正常胃组织中Med19多为阴性表达,少数为弱阳性表达,二者间差异无显著性(P> 0.05).Med19的表达与胃癌的细胞分化程度、淋巴结转移情况、TNM分期相关(P<0.05),而在不同年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度的胃癌样本中表达差异无显著性(P> 0.05). 结论 Med19参与了胃癌的发生、发展过程,有望成为一个新的肿瘤治疗靶向因子.
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Med19在肿瘤领域的研究
中介体(Mediator,Med)是RNA聚合酶Ⅱ通用转录装置的重要组成部分,在真核mRNA合成的活化和阻抑中起着关键作用.其早是在研究酵母RNA聚合酶Ⅱ转录功能时发现的[1],并在近年的研究中发现Med复合物的亚基组成及其相关的可能功能活性.
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Med19基因沉默对p53野生型和突变型乳腺癌细胞紫杉醇化疗疗效的影响
目的:探讨下调中介体(mediator,Med) 19表达是否增加紫杉醇(pacliatxel,PTX)对p53野生型和突变型乳腺癌细胞化疗的疗效.方法:构建Med19 RNA干扰(RNAi)慢病毒,分别感染p53野生型的乳腺癌细胞MCF-7和53突变型的乳腺癌细胞MDA-MB-231,两种细胞均分为Med19基因敲减组(KD组:细胞感染pGcscil-Med19-siRNA-GFP)、空载体感染组(NC组:细胞感染pGcscil-Med19-NC-GFP)、对照组(CON组:未感染慢病毒的乳腺癌细胞),荧光显微镜观察慢病毒感染效率.Western blotting检测Med19基因沉默后各组细胞内P53、磷酸化P53(pP53)、P21蛋白表达水平的变化.紫杉醇分别作用于Med19基因沉默前后的MCF-7和MDA-MB-231细胞,MTF法检测细胞增殖抑制率的变化,流式细胞术检测细胞周期和凋亡率的变化.结果:KD组和NC组细胞的荧光感染效率均大于90％,表明获得了满意的感染效率.与CON组和NC组相比,两种细胞KD组的Med19蛋白表达水平均下降,差异有统计学意义(均P＜0.05).MCF-7细胞KD组P53、pP53、P21蛋白表达上调,差异有统计意义(均P ＜0.05).在0.01～ 50 μg/ml范围内,紫杉醇抑制两种乳腺癌细胞的生长增殖并呈浓度依赖性(P＜0.05),对KD组的抑制率和细胞凋亡率均高于NC组及CON组,差异有统计学意义(均P＜0.05);但MDA-MB-231细胞各组间抑制率差异无统计学意义(均P ＞0.05).10 μg/ml紫杉醇导致两种细胞的KD组和NC组均出现G2/M期阻滞,并且MCF-7细胞KD组G0/G1期细胞较NC组显著增加(P＜0.05).结论:Med19基因沉默增强紫杉醇对p53野生型乳腺癌MCF-7细胞化疗的疗效,其机制可能为增强了p53基因的表达活化,通过其下游基因p21调节细胞周期、促进细胞凋亡.
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沉默Med19的表达对结肠癌Caco-2细胞增殖和凋亡的影响
目的:探讨RNA干扰Med19的表达对结肠癌Caco-2细胞增殖和凋亡的影响.方法:构建靶向Med19的干扰质粒pSilencer-Med1 9-siRNA,转染Caco-2细胞后,RT-PCR检测Caco-2细胞中Med19 mRNA的表达,Western blotting检测Caco-2细胞中Med19蛋白的表达,MTF检测pSilencer-Med19-siRNA转染后Caco-2细胞的增殖,流式细胞术分析Caco-2细胞的凋亡.结果:RT-PCR及Western blotting检测结果显示,pSilencer-Med1 9-siRNA转染后Caco-2细胞中Med19 mRNA及蛋白表达水平上均显著下降(P ＜0.01)；MTT及流式细胞术检测结果表明,与pSilencer对照组相比,pSilencer-Med1 9-siRNA组Caco-2细胞的增殖明显受到抑制[7d时:(0.86±0.09)％vs(1.38±1.10)％,P＜0.01],且细胞凋亡比例明显升高[(22.72 ±2.85)％vs(7.23±1.29)％,P＜0.01].结论:RNA干扰沉默Med19的表达可抑制结肠癌Caco-2细胞的增殖,促进其凋亡,提示Med19可作为结肠癌治疗的潜在靶点.
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Med19在人胆管癌中的表达及意义
目的 研究Med19基因在人胆管癌组织中的表达及其意义.方法 应用免疫组化和RT-PCR检测Med19基因在胆管癌组织、癌旁组织和正常组织中的表达.结果 胆管癌组织中的Med19表达显著高于癌旁组织和正常组织,而癌旁组织和正常组织间Med19表达无明显差异.Med19表达高低与肿瘤分化程度相关,但在不同性别、年龄、TNM分期、淋巴结转移之间无明显差异.结论 Med19参与了胆管癌的发生、发展过程,有可能成为胆管癌的诊断指标和治疗靶点.
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沉默中介体19对人乳腺癌MCF-7细胞侵袭及迁移的影响
目的：研究中介体19（Med19）对人乳腺癌MCF-7细胞侵袭及迁移的影响。方法：用慢病毒介导的Med19小分子干扰RNA（siRNA）感染人乳腺癌细胞MCF-7（KD组），并设置空载体转染组（NC组）、空白对照组（CON组）。荧光显微镜下观察细胞感染效率，利用RT-PCR和Western blot检测Med19蛋白表达，用划痕实验和transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力。结果：荧光显微镜下观察细胞感染慢病毒效率达90％以上。与NC组及CON组细胞相比，KD组Med19 mRNA表达水平下降了72．3％、72．1％，Med19蛋白表达水平下降了85．4％、85．3％，差异均有统计学意义（P＜0．05）。分别在0、6、12、24 h比较迁移的距离，KD组细胞随着时间的延长，较CON组、NC组迁移能力显著下降，差异有统计学意义（P＜0．05）；KD组、NC组、CON组MCF-7细胞穿过聚碳酸酯膜的细胞数分别为23．8±4．32、43．4±3．65、45．8±5．81，KD组较CON组、NC组细胞的侵袭能力显著降低，差异均有统计学意义（P＜0．05）。NC组与CON组相比，细胞迁移和侵袭能力差异无统计学意义（P＞0．05）。结论：Med19基因沉默抑制细胞的迁移及侵袭能力，从而抑制乳腺癌的恶性生物学行为。
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Med19过表达慢病毒载体的构建及鉴定
目的:构建含Med19基因的过表达慢病毒载体.方法:用PCR技术获得Med19基因片段,将其连接入酶切后的线性慢病毒载体,转化感受态细胞进行PCR及测序鉴定.脂质体转染法共转染293T细胞,荧光显微镜及Western blot检测转染效率.包装成慢病毒,实时定量PCR检测病毒滴度.结果:成功获取Med19基因,测序证实所获取基因序列完全正确.荧光显微镜以及Western blot检测均证实pGC-FU-Med19携有正确的Med19基因,并能在293T细胞中表达.实时定量PCR检测病毒滴度为2×109 TU/mL.结论:成功构建Med19基因慢病毒表达栽体,为进一步研究其生物学功能奠定了基础.
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沉默Medl9对人乳腺癌裸鼠成瘤的影响
目的:通过观察慢病毒介导的siRNA沉默Med19基因对人乳腺癌裸鼠成瘤的影响.探讨Med19在乳腺癌发生发展中的作用.方法:利用前期已稳定感染Med19-siRNA慢病毒载体的人乳腺癌MCF-7细胞.采用western blotting方法检测Med19蛋白的沉默效果.稳定感染Med19-siRNA慢病毒栽体的人乳腺癌MCF-7细胞接种于BALB/c裸鼠背侧皮下,观察裸鼠成瘤情况和移植瘤生长情况,并绘制生长曲线.以慢病毒空载体感染组作为阴性对照组.结果:所构建的Med19-siRNA慢病毒载体能有效抑制MCF-7细胞Med19蛋白的表达,蛋白表达水平下降了62%,Med19基因沉默组较空载体慢病毒感染组瘤体生长速度慢(t值分别为4.843、6.291、5-317,均p<0.01),肿瘤终体积分别为(620.08±263.07)mm3和(1 406.77±351.14)mill3,终重量分别为(0.20±0.18)g和(0.67±0.27)g,差异有统计学意义(t值分别为4.399、3.615,均P<0.01).结论:Med19基因沉默能有效抑制人乳腺癌裸鼠成瘤和移植瘤生长,表明 Med19在乳腺癌发生发展中起到重要作用,并有可能成为乳腺癌靶向治疗的潜在靶点.
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肺癌组织Med19和Ki-67蛋白相关性研究及临床意义探讨
目的:探讨肺癌组织Med19和Ki-67蛋白相关性研究及临床意义.方法:采用免疫组化实验对50例肺癌患者组织中Med19和Ki-67蛋白表达进行检验.结果:癌周边组织Med19与癌组织内部表达具有统计学差异,以细胞核着色为主,阳性表达率超过80％.另外,研究发现Med19蛋白表达与肺癌患者分期、淋巴结转移具有相关性.结论:Med19与Ki-67表达呈现相关性,并关系到肺癌的发展和增殖,作为潜在癌基因在癌症进展中起到一定作用.
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沉默中介体复合物亚基19基因对人膀胱癌细胞UM-UC3迁移能力的影响
目的 探讨中介体复合物亚基19(Med19)对人膀胱癌UM-UC3细胞迁移能力的影响及其机制.方法 采用针对Med19的siRNA慢病毒载体转染人膀胱癌UM-UC3,应用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)和蛋白质印迹方法(Western blot)检测Med19-siRNA转染组(siRNA)与空载组(NC)Med19基因表达情况;采用Western blot检测细胞外基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的表达;采用划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力的变化.结果 Med19-siRNA慢病毒感染UM-UC3细胞后,转染组Med19 mRNA表达与空载组相比明显降低,差异有统计学意义(t=10.15,P＜0.01),且转染组Med19、MMP-2和MMP-9蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(t值分别为71.36,26.34,8.627,均P＜0.01),划痕实验和Transwell实验显示转染组细胞迁移能力明显减弱.结论 沉默Med19基因可通过抑制MMP-2和MMP-9的表达降低人膀胱癌细胞UM-UC3的迁移能力.
