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光谱式染色体自动核型分析简介
光谱染色体自动核型分析(SKY-SpectralKaryotying)是近年来在国际上迅速发展的一项技术.自问世以来,即以其检测灵敏度高,操作简单等优势得到了广泛应用,在我国部分医院也已经开始应用该项技术.本文从SKY技术的原理、发展前景、优越性以及与同类技术的性能比较等方面对该技术进行了介绍.
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用荧光原位杂交方法检测肺癌印片标本中性染色体数目的异常
目的研究肺癌细胞中性染色体拷贝数的异常. 方法取新鲜的肺癌手术标本作印片,利用双色荧光原位杂交(dual-color FISH)技术对16例肺癌印片标本(其中男性病例12例,女性病例4例)中X染色体和Y染色体数目进行检测. 结果发现12/16(75%)的标本中有X染色体数目增多,其中女性患者3例,男性患者9例;在12例男性患者中,有1例发生Y染色体数目增多,有5例(41.7%)发生Y染色体数目减少.总计出现性染色体数目异常的病例为13例,占16例的81.25%. 结论 X染色体数目增多在肺癌中发生的频率很高,其意义值得进一步研究.
关键词： 肺癌 X染色体 异常 荧光原位杂交(FISH) -
食管癌中癌基因MUC4的变化及临床病理意义
目的探讨癌基因MUC4在食管癌中的拷贝数变化及其意义.方法应用FISH方法检测MUC4基因在35例食管癌组织中的拷贝数变化,并与18例癌旁组织做对比研究.结果 MUC4基因在35例食管癌组织均出现高频率(100%)扩增,18例癌旁组织中仅5例出现低频率扩增(27.8%),两者之间差异极显著(P＜0.01).MUC4基因扩增频率与食管癌患者的年龄、性别、肿瘤TNM分期、淋巴结转移及分化程度无相关性(P＞0.05). 结论 MUC4基因扩增可能与食管癌的发生关系密切.
关键词： MUC4 食管癌 荧光原位杂交(FISH) -
MLPA在产前诊断性染色体嵌合体的应用价值
目的 探究多重连接探针扩增技术(MLPA)在产前诊断性染色体嵌合体的价值.方法 收集2015年6月～ 2016年6月东莞市妇幼保健院产前诊断中心经核型分析或MLPA P095非整倍体检测试剂盒检测发现的性染色体嵌合体病例作为研究对象,共11例.比较这两种方法的检测结果,并用荧光原位杂交(FISH)验证性染色体嵌合体的真实性.结果 MLPA结果显示,11例标本中,有9例标本(病例9至病例17)MLPA与核型分析结果均是阳性,其中8例(病例9至病例16)两种结果一致,1例(病例17)结果有差异.有1例(病例18)MLPA检测结果为嵌合体,而核型分析正常,有1例(病例19)核型分析发现嵌合体,而MLPA检测结果正常.FISH检测:除病例16外,其余病例均为真性嵌合体.MLPA、核型分析诊断性染色体嵌合体的灵敏度为90％,符合率为81.82％.结论 MLPA对于产前诊断性染色体嵌合体具有重要意义.
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端粒酶基因在宫颈脱落细胞中的表达及其临床意义
[目的]探讨人类染色体端粒酶(hTERC)基因在宫颈脱落细胞中的表达及其临床意义.[方法]收集2008年3月～2009年3月就诊于大连医科大学附属第一医院妇产科患者的宫颈脱落细胞标本,选取细胞学及组织学均正常的20例标本建立阈值,并选取100例细胞学异常或组织学异常标本,共120例宫颈脱落细胞标本参与实验,荧光原位杂交(FISH)方法检测脱落细胞hTERC基因.[结果]CINⅡ/Ⅲ及宫颈癌组与正常组及CINⅠ组比较,hTERC基因阳性表达率均明显增高(P<0.05),且宫颈癌组表达率高于CINⅡ/Ⅲ组(P<0.05).细胞学分级ASCUS及以上各组与正常组比较,hTERC基因阳性表达率均增高(P<0.05),且HSIL组及宫颈癌组表达率均较ASCUS组及LSIL组增高 (P<0.05).组织学分级中,CINⅡ、CINⅢ及宫颈癌的基因扩增异常细胞数目均高于正常组(P<0.05).CINⅡ及以上级别病变基因扩增异常细胞数目约为(27±17)%,其单侧95%可信区间为μ>23.6%.hTERC基因对ASCUS样本的高级别病变阳性预测值为91%,阴性预测值为94%.[结论]hTERC基因在CINⅡ/Ⅲ和宫颈癌中表达异常,且随病变程度增加阳性表达率增加.hTERC基因扩增异常细胞数≥24%可能成为检测CINⅡ及以上高级别病变的独立生物学指标并对ASCUS分流有一定的指导意义.
关键词： 染色体畸变 宫颈肿瘤 端粒酶基因 ASCUS分流 荧光原位杂交(FISH) -
两种少量小鼠外周血间期核FISH技术的比较
目的:探讨低渗法与红细胞裂解法应用于小鼠少量外周血间期核荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测的优缺点,以便于根据实验条件选取合适的方法.方法:小鼠剪尾巴法获取外周血,采用低渗法或红细胞裂解法破坏红细胞,涂片前先用免疫组化笔在玻片上划好预计涂片区域,重悬沉淀后稍等片刻再吸中间部分用于涂片,涂完后在相差显微镜下观察密度,行常规FISH,比较两种方法处理后的FISH结果.结果:低渗法和红细胞裂解法处理后的片子背景都较干净,密度适中,信号较强.结论:在外周血间期核荧光原位杂交技术中,低渗法和红细胞裂解法都可以获得较满意的FISH结果.低渗法的特点在于试剂便宜且易于获取,但耗时稍长;而红细胞裂解法的特点在于可节省实验时间,但需专用试剂.
关键词： 荧光原位杂交(FISH) 外周血 间期核 低渗 裂解 -
10例HIV/AIDS相关Burkitt淋巴瘤(BL)临床病理和免疫表型分析
目的 探讨HIV/AIDS相关Burkitt淋巴瘤(Burkitt lymphoma,BL)的临床病理学形态、免疫表型特点、诊断及其鉴别诊断.方法 按照WHO(2008)造血与淋巴组织肿瘤病理学分类,应用HE染色、免疫组化EnVision法染色、荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)及原位杂交并结合临床资料对2010年8月至2013年3月收集的10例HIV/AIDS相关BL进行综合分析.结果 10例患者中活检腋下肿块4例、颈部肿块3例、腹股沟肿块1例、腹部手术切除肿物2例.免疫组化染色瘤细胞均显示IgM、CD20、CD19、CD79a、CD10、Bcl-6阳性,CD5、CD21、CD30、EMA、Bcl-2、CD3、ALK-1、TdT阴性,Ki67增殖指数均＞90％,1例表达CD38及MUM-1,3例c-myc阳性,1例LMP-1阳性,突变型p53阳性表达5例.原位杂交EBER示3例阳性;FISH示C-MYC基因断裂重组8例t(8;14)(q24;q32).病理诊断:经典型BL9例,浆细胞样分化BL 1例.结论 HIV-BL为高度恶性淋巴瘤,预后较差,光镜下易与弥漫大B细胞淋巴瘤和淋巴母细胞性淋巴瘤/白血病等相混淆,结合典型病理表现、免疫组化和FISH技术有助于临床病理诊断及其鉴别诊断.
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乳腺癌HER-2基因荧光原位杂交检测的临床应用
目的 研究荧光原位杂交(FISH)用于乳腺癌HER-2检测的临床应用及HER-2基因扩增与乳腺癌临床病理的相关性.方法 应用FISH技术和免疫组化(THC)技术检测40例乳腺浸润性导管癌石蜡包埋标本,对比分析.结果 IHC检测cerbB-2(3+)/(2+)/(1+或0),其FISH阳性率分别为85.7%、50%、5.9%.24例腋窝淋巴结阳性者,其FISH检测HER-2基因扩增10例(P=0.0399).ER/PR阴性8例,其HER-2基因扩增6例(P>0.05).结论 IHC检测HER-2蛋白有很高的假阳性及假阴性,FISH有效性及准确性显著高于IHC,可在临床广泛推广应用.HER-2基因扩增与腋窝淋巴结阳性相关.
关键词： 荧光原位杂交(FISH) 免疫组化(IHC) HER-2基因 乳腺癌 基因扩增 -
荧光原位杂交和免疫组织化学法检测乳腺浸润性导管癌中HER-2基因状态的研究
目的 比较荧光原位杂交(FISH)和免疫组织化学(IHC)两种方法检测乳腺浸润性导管癌人类表皮生长因子受体2(HER-2)基因扩增及与C-erbB-2蛋白表达结果的一致性.方法 分别采用FISH和IHC法检测346例乳腺浸润性导管癌组织HER-2基因扩增和C-erbB-2蛋白表达,并对两种方法的结果进行统计学分析.结果 346例乳腺浸润性导管癌中,FISH检测HER-2基因扩增145例(41.9％),无扩增201例(58.1％).IHC检测显示,C-erbB-2蛋白(-)7例,(+)30例,(++)227例,(+++)82例.按乳腺癌HER-2检测指南,(-)和(+)为阴性结果,(+++)为阳性结果,(++)为不确定病例.全组IHC检测C-erbB-2蛋白阳性表达率为23.7％ (82/346).IHC检测C-erbB-2蛋白(-)的7例患者经FISH检测无HER-2基因扩增,一致率为100.0％.IHC检测C-erbB-2蛋白(+)的30例经FISH检测25例无基因扩增,一致率为83.3％;227例(++)中有65例基因扩增,一致率为28.6％;82例(+++)中有基因扩增75例,一致率为91.5％.IHC和FISH检测HER-2状态的一致率为89.9％,具有高度一致性(Kappa值=0.768,P＜0.001).HER-2基因扩增与年龄、肿瘤大小、组织学分级及淋巴结转移均无关(P＞0.05).结论 IHC和FISH法检测乳腺浸润性导管癌HER-2表达状态有高度一致性.IHC可以作为初步筛查乳腺浸润性导管癌HER-2基因状态的首选检测方法,对于IHC检测结果为(++)的标本建议采用FISH法进一步明确HER-2基因扩增状态.
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双色FISH分析浸润性乳腺癌HER-2基因扩增模式
[目的]应用荧光原位杂交技术(FISH)分析乳腺癌HER-2基因状态.[方法]采用双色FISH技术检测100例浸润性乳腺癌HER-2基因,分析FISH和免疫组织化学(IHC)检测结果,分析17号染色体多倍体比率及其与HER-2基因扩增的关系.[结果]100例浸润性乳腺癌标本中,HER-2蛋白IHC 3+ 21例者中FISH检测均为阳性;IHC 2+ 69例者中FISH检测为阳性的占72％,IHC 1+ 10例者FISH检测为阳性的占20％.17号染色体多倍体的比率为51％.17号染色体二倍体与多倍体标本中,HER-2基因扩增的比率分别是76％和69％,差异无统计学意义(P=0.330).[结论]乳腺癌IHC检测HER-2为1+～2+者需进一步行FISH检测确定HER-2基因状态;应用双色FISH方法能准确、全面评估HER-2基因状态.
关键词： 荧光原位杂交(FISH) HER-2基因 乳腺癌 染色体 -
高压高温预处理后FISH法检测子宫颈病变组织中hTERC基因
在子宫颈癌的筛查中,人端粒酶基因(human telomerase RNA gene ,hTERC)成为继细胞学、HPV检测后的又一指标,发生hTERC基因扩增的病变,继续发展成子宫颈癌的可能性增加.在妇科临床应用中,多用于细胞学标本的检测;而在子宫颈病变组织原位检测hTERC基因,探讨病变组织细胞形态学改变与其遗传学改变之间的关系,进而提高不典型病变诊断的准确性,这方面的研究报道不多.
关键词： 子宫颈病变 荧光原位杂交(FISH) 高压高温预处理 hTERC -
应用FISH技术对肝癌细胞系X染色体畸变的研究
目的研究人肝细胞肝癌细胞系X染色体畸变规律.方法制备三株新建人肝细胞肝癌细胞系HCC-9903、EGHC-9901、HCC-9810染色体标本,用X染色体着丝粒特异DNA探针,对其X染色体进行荧光原位杂交(FISH),检测X染色体拷贝数畸变.结果三株肝癌细胞系X染色体拷贝数均增多,以4拷贝为主.结论 X染色体拷贝数增多在肝癌细胞系中发生频率很高,证明在肝癌发病及发展过程中起到某种作用,其意义值得进一步探讨.这是以FISH技术对肝癌X染色体拷贝数研究的首次报告.
关键词： 肝恶性肿瘤 X染色体 荧光原位杂交(FISH) -
荧光原位杂交技术在膀胱癌诊断中的临床研究
目的:评价尿脱落细胞荧光原位杂交(FISH)检测在膀胱癌的诊断价值.方法:采用FISH检测68例血尿患者尿脱落细胞3、7、17号染色体和9号染色体上p16基因位点数目异常情况,以组织病理确诊为膀胱癌为金标准,评估FISH诊断的特异度和敏感度,并与尿细胞学检查结果做比较.结果:FISH诊断膀胱癌的总的敏感性高于尿脱落细胞学检查(分别为79.8％、24.4％,P＜0.05),两者的特异性分别为93.4％、100％ (P ＞0.05).结论:FISH在诊断膀胱癌中敏感性、特异性高于尿细胞学检查,在早期膀胱癌诊断和膀胱癌术后复发的监测具有重要意义.
关键词： 膀胱尿路上皮癌 荧光原位杂交(FISH) 细胞诊断学 细胞块 -
IHC、FISH和RT-PCR检测对EML4-ALK重排的一致性
棘皮动物微管结合蛋白-间变性淋巴瘤激酶(echinoderm microtubule-associated protein-like4-anaplastic lymphoma kinase,EML4-ALK)在肺癌中已成为第二个重的驱动致癌基因,在4%~6%的肺腺癌中EML4-ALK已经成为第一个可以靶向治疗的融合基因位点.伴随着ALK分离探针荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridization,FISH)试剂盒的上市,克唑替尼已经被批准治疗ALK阳性的进展期非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer,NSCLC).然而,一种靶向药物的成功主取决于一种敏感且特异的筛选实验方法来检测分子药物作用的靶点.以作者的经验看,用RT-PCR来检测EML4-ALK,比用FISH和免疫组化(immunohistochemistry,IHC)方法更敏感,结果更可靠.尽管通过FISH检测ALK已经经过大量的临床实验验证,然而该方法在技术层面仍存在许多具有挑战性的问题,而通过IHC和RT-PCR方法检测ALK仍需临床进一步的探索.
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荧光原位杂交技术检测肺癌ROS1易位病例临床病理特点
目的 总结ROS1 (c-ros oncogenel)易位病例分子病理特点及治疗情况;探讨荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术在肺癌ROS1基因检测中的价值.方法 采用荧光原位杂交方法检测613例肺癌患者ROS1基因.ROS1易位样本行手工ROS1免疫组化(IHC)、ALKVentana全自动免疫组化及EGFR突变检测.结果 采用ROS1 FISH法检出19例阳性病例,检出率为3.1％ (19/613).阳性细胞平均比例为60％,范围35％ ～ 78％.阳性病例显示两种信号模式,其中63.2％(12/19)为经典红绿分离,36.8％ (7/19)为单独绿色.19例阳性病例ROS1蛋白表达为:1例(5％)0+,2例(11％)1+,7例(37％)2+,9例(47％)3+.阳性病例均无ALK基因易位,除1例同时具EGFR 19外显子突变外,其余病例均为EGFR野生型.ROS1易位患者年龄略小;女性、非吸烟患者比例较高;大多为晚期病人.组织学类型以实体、腺泡及乳头型腺癌为主.易位病例中,3例患者死亡,7例患者接受克唑替尼治疗. 结论 ROS1易位更易发生在年轻、女性、不吸烟的腺癌患者中.FISH方法可有效地检测肺癌ROS1基因易位,对确诊ROS1阳性肺癌具有重要意义.
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FISH检测c-MYC/IgH基因重排在淋巴组织增生性疾病中的意义
目的:探讨c-MYC/IgH基因重排在淋巴组织增生性疾病中的意义及其临床应用价值.方法:收集本院病理科的淋巴组织增生性病变10例,应用EBER原位杂交检测EBV感染情况,荧光原位杂交(FISH)检测淋巴组织增生性疾病c-MYC/IgH基因重排,PCR检测IgH/IgK或TCRγ基因重排,分析FISH技术在淋巴组织增生性疾病中的诊断和鉴别诊断意义.结果:10例淋巴组织增生性病变中仅1例EBV感染,所有病例均未检测到c-MYC/IgH基因重排,部分病例检测到c-MYC/IgH或TCRγ基因单克隆性重排.结论:通过FISH检测c-MYC/IgH基因重排在淋巴组织增生性疾病中的诊断价值尚需进一步探讨.
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多色荧光原位杂交用于胎儿常见非整倍体的快速产前诊断
目的 探讨多色荧光原位杂交(multi-color fluorescence in situ hybridization,m-FISH) 技术用于快速诊断胎儿非整倍染色体的临床价值.方法 纳入符合产前遗传学诊断指征的孕妇126例,行羊膜腔穿刺获取羊水细胞,采用荧光标记的DNA探针对羊水细胞间期核DNA进行杂交,荧光显微镜观察、计数杂交信号类型,同时对每例标本行羊水细胞培养及染色体核型分析.结果 在126例羊水细胞样本中,FISH检出21-三体综合征胎儿4例、18-三体综合征1例、Turner综合征1例、46,XX核型67例、46,XY核型53例.FISH检测结果与羊水细胞核型分析的符合率为100%.结论 FISH结果判读直观,信号明晰,是快速、准确检测染色体数目异常的重要手段.
关键词： 荧光原位杂交(FISH) 非整倍染色体 产前诊断 -
不同pH值的40mL/L磷酸盐缓冲甲醛液固定乳腺癌组织对FISH法检测HER2基因结果的影响
目的 探讨不同pH值的40 mL/L磷酸盐缓冲甲醛固定液对荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)法检测乳腺原发性浸润癌人类表皮生长因子受体2(human pidermal growth factor receptor 2,HER2)基因扩增结果的影响.方法选取中山市博爱医院2014年3月至2017年1月期间,手术切除的乳腺癌75例,同一肿瘤病变部位取材4块,按照固定液pH不同,随机分为A、B、C、D组.固定液使用40 mL/L磷酸盐缓冲甲醛,A～D组固定液pH值分别为6.0、7.0、7.5、8.0,分别固定15h后制作石蜡切片.采用FISH法检测HER2基因扩增情况,比较各组HER2基因扩增检测结果的差异.结果 ①在荧光显微镜下,A、D组的组织轮廓较模糊、出现细胞碎片、部分探针定位欠佳、出现信号不规则甚至丢失、核溶解现象,见明亮的桔红/绿荧光信号.B、C组的组织轮廓清晰而完整、背景洁净、探针定位准确,见耀眼的桔红/绿荧光信号.②B、C组HER2基因扩增阳性率稳定在24.00％～25.33％;B、C组的基因扩增阳性率显著高于A、D组(P＜0.05).结论采用荧光原位杂交法检测乳腺原发性浸润癌HER2基因扩增,固定液的pH值在7.0～7.5之间可获得可靠的检测结果.
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畸形精子症患者精子染色体非整倍体的研究
目的:研究畸形精子症患者精子染色体的非整倍体率.方法:应用18号、X和Y染色体着丝粒探针,采用荧光原位杂交(FISH)技术比较畸形精子症患者(畸精组,n=18)和生育力正常且精子正常形态率、浓度、活力等均正常男性(对照组,n=5)精子中18号、X和Y染色体的非整倍体率.结果:畸精组共计数精子58178条,对照组共计数精子16369条.畸精组和对照组杂交效率分别为97.5％和98.3％；染色体非整倍体类型主要有二体(XX 18、YY18、XY18、Y1818和X1818)和二倍体(1818XX、1818YY、1818XY).畸精组和对照组的18号染色体二体率分别为0.29±0.16％和0.03±0.02％,性染色体二体率分别为0.65±0.24％和0.05±0.02％,二倍体率分别为0.14±0.12％和0.04±0.03％.18号、X和Y染色体非整倍体率组间均有统计学差异(P＜0.05).结论:与生育力和精液各参数均正常男性相比,畸形精子症患者18号、X和Y染色体非整倍体率明显升高.
关键词： 畸形精子症 荧光原位杂交(FISH) 精子染色体 非整倍体 -
1例嵌合型45,X/46,X,r(Y)患者的遗传学分析
目的:应用细胞遗传学和分子生物学技术分析1例嵌合型45,X/46,X,r(Y)患者的核型.方法:应用常规染色体标本制备方法进行G-显带和C-显带；并应用CEPX(DXZ1,Xp11.1-q1 1.1,Spectrum Green,Vysis)探针、LSI SRY(Yp1 1.3,Spectrum Orange,Vysis)探针和CEP18(D18Z1,18p11.1-q11.1,Spectrum Aqua,Vysis)与患者的中期分裂相进行荧光原位杂交(fluorescencence in situ hybridization,FISH);同时应用PCR技术对患者进行Y染色体微缺失检测.结果:结合G-显带、C-显带、FISH检测结果和Y染色体微缺失的检测结果,确定该患者核型为46,X,r(Y)(p 11.3q 12)[85]/45,X[15].Yq11区生精基因微缺失检测未显示该患者存在缺失.结论:细胞遗传学检测结合FISH可以诊断复杂的染色体异常,为患者提供正确的遗传咨询和生育指导.
