首页 > 文献资料
-
基因疫苗作用机制和免疫途径的研究现状
基因疫苗(gene vaccine)又称DNA疫苗(DNA vaccine)或核酸疫苗(nucleic acid vaccine),即将编码特异性抗原多肽或蛋白的基因克隆到真核表达载体上,然后经一定途径进入机体内,使外源基因在活体内表达、产生的抗原激活机体的免疫系统,从而诱导特异性的体液免疫和细胞免疫应答,以达到预防和治疗疾病的目的.基因疫苗由抗原编码基因及质粒载体两部分组成.抗原基因可以是单个基因或完整的一组基因,也可以是编码抗原决定簇的一段核苷酸序列.
-
钙粘附蛋白N-cadherin基因RNAi质粒载体的构建与鉴定
目的:构建有效的小鼠神经型钙粘附蛋白(N-cadherin)基因RNA干扰质粒载体.方法:在小鼠基因库中选择3个靶序列并设计合成相应3对寡核苷酸序列,同时合成1对阴性对照寡核苷酸序列,然后将以上4对寡核苷酸序列退火后连入pSilencer~(TM)3.1-H1 hygro质粒并分别命名为pSicad1、pSicad2、pSicad3、pSi-control.酶切和测序鉴定后,将以上重组质粒转染MN9D细胞,用Western Blot和半定量RT-PCR方法检测N-cadherin基因mR-NA和蛋白的表达水平.结果:酶切和测序证实目的寡核苷酸片段已被准确克隆到pSilencer~(TM)3.1-H1 hygro质粒,与对照组相比,pSicad 2和pSicad 3转染MN9D细胞后,N-cadherin mRNA和蛋白水平的表达均受到明显抑制,其中N-cadhefin蛋白水平在pSicad3组下降50%(P<0.01).结论:结果表明已成功构建了小鼠N-cadherin基因RNAi质粒载体,为N-cadherin功能研究奠定了基础.
-
BRAF基因序列特异性shRNA质粒载体的构建
目的 构建BRAF基因序列特异性的短发卡RNA(Short Hairpin RNA,shRNA)质粒载体.方法 根据文献已发表的BRAF基因序列,设计合成3条BRAF特异性的shRNA编码序列(其中一条shRNA特异性针对黑素瘤中常见的BRAF V599E错义突变设计)和一条与人基因组无同源性的阴性对照shRNA编码序列.将退火后的双链shRNA编码序列重组于pGenesil-1质粒中,进行双酶切和测序鉴定.结果 双酶切显示shRNA编码序列被成功插入pGenesil-1质粒中,测序结果证实插入片断与设计序列完全一致.结论 所设计的shRNA编码序列被正确插入质粒骨架,成功构建了BRAF基因序列特异性的shRNA质粒载体.
-
食管鳞状上皮细胞癌及癌旁组织中HPV11 L1基因克隆及序列比较
［马群风，江 红，刘 锟，冯永强，周勇安，王小平，李谨瑜. 细胞 与分子免疫学杂志，2001；17(3)：251-254］ 目的 克隆食管癌组织和癌旁组织中HPV11型主要壳蛋白L1基因，并比 较两个序列间的同源性. 方法 以食管癌组织和癌旁组织纯化的总DNA为模 板，根据HPV11型L1基因的保守区分段设计引物. 分两段扩增HPV L1基因，克隆入质粒载体 中，pGEM-3Zf(-)以双脱氧法双向测定目的片段的序列，并拼接出该片段的全序列，比较两 个序列间的同源性，以及与已知基因序列的差异性. 结果 从1例食管癌患 者食管癌组织和癌旁组织中，分别克隆到1株HPV11型L1的编码序列M1和M2，两序列间的同源 性极高，仅在个别位点存在差异. 与GenBank中登录的HPV序列NC001525.1(HPV-11), M1411 9.1(HPV-11)和AF217526.1(HPV-11)相比较大部分相同. 结论 成功地构 建了HPV11型L1基因上游片段pGEM-3Zf(-)和下游片段pGEM-3Zf(-)的重组克隆，为深入研 究HPV的感染与食管癌发病机制的关系奠定了基础.(井晓梅)
-
转化生长因子-β1基因RNAi质粒载体的构建与鉴定
目的 构建人转化生长因子-β1(TGFβ1)基因RNAi质粒载体.方法 根据人TGFβ1 mRNA序列选择3个靶序列并设计合成相应3对寡核苷酸序列,同时合成1对阴性对照寡核苷酸序列;将以上4对寡核苷酸序列退火后连入pRNA-U6.2/Lenti质粒并分别命名为pRNA-U6.2/Lenti-1、pRNA-U6.2/Lenti-2、pRNA-U6.2/Lenti-3、pRNA-U6.2/Lenti-4.酶切和测序鉴定后,将以上重组质粒转染Hela细胞,运用RT-PCR和ELISA检测TGFβ1 mRNA和蛋白的表达水平.结果 酶切和测序证实目的 寡核苷酸片段已被准确克隆到pRNA-U6.2/Lenti质粒;与对照组相比,pRNA-U6.2/Lenti-1、pRNA-U6.2/Lenti-2转染Hela细胞后,TGFβ1 mRNA水平及蛋白水平的表达量均受到明显抑制;其中TGFβ1蛋白水平在pRNA-U6.2/Lenti-1组下降79.2%,在pRNA-U6.2/Lenti-2组下降53.7%,统计有显著性差异(P＜0.01).结论 成功构建了人TGFβ1基因RNAi质粒载体,对于TGFβ1高表达疾病的基因治疗奠定了基础.
-
衣原体主要实验技术研究进展
衣原体(chlamydia)是人类重要的致病菌之一,不同衣原体感染会引起多种人类疾病.因此,衣原体研究正逐步受到广泛的关注.依据近年来国内外衣原体的研究进展,概述了荧光下等位基因交换突变(fluorescence-reported allelic exchange mutagenesis,FRAEM)技术、分离纯化衣原体的空斑技术、质粒载体的构建及转化技术、蛋白质谱技术在衣原体研究中的应用进展.
关键词： 衣原体 荧光下等位基因交换突变 空斑试验 质粒载体 蛋白质谱
