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氧化型染发剂对CHL细胞毒性的研究
随着社会经济的发展以及人们对审美要求的提高,染发剂越来越多走进人们的日常生活中.染发剂是一种特殊用途化妆品,按其来源可分为三大类:金属盐类染发剂、植物性染发剂和氧化型染发剂.氧化型染发剂由于能使头发染成各种颜色且染色持久而颇受欢迎,使用也更为广泛.近年来的研究表明,氧化型染发剂对皮肤组织、造血系统及免疫系统都有不同程度的毒性作用[1-2].本实验主要研究了市售国产某品牌氧化型染发剂及其配比使用的染发焗油膏和显色焗油膏对体外培养的CHL细胞产生毒性作用的剂量水平.
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体内外染色体畸变实验检测朱砂的遗传毒性
目的:用仓鼠的骨髓细胞与CHL细胞经行体内外染色体畸变实验评价朱砂的遗传毒性.方法:体内染色体畸变实验用毛足属仓鼠给予朱砂混悬液(2.0,4.0,8.0 g·kg-1)连续灌胃5d,处死前2h腹腔注射秋水仙素.处死后取骨髓细胞制备染色体.油镜下观察每只动物骨髓细胞的有丝分裂指数和100个中期分裂相细胞的畸变类型.CHL细胞染色体畸变实验用朱砂浸出液终质量浓度为6.3,12.5,25.0 g·L-1作用于CHL细胞,培养24,48 h,终止培养前4h加入秋水仙素.收获细胞,制备染色体,油镜下观察CHL细胞的200个中期分裂相细胞的畸变类型.结果:①与空白组比较,朱砂浸出液12.5,25.0 g·L-1给药组的CHL细胞染色体畸变率均升高(P＜0.05,P＜0.01),且有明显的量效关系.②仓鼠体内实验与朱砂血清给药CHL细胞的畸变率无显著性差异.结论:①在本实验中朱砂浸出液在12.5 g·L-1以上时能致体外CHL细胞染色体畸变,而朱砂混悬液在8.0 g·kg-1下仓鼠体内染色体畸变实验未出现阳性结果.②仓鼠体内染色体畸变实验可作为研究中药新药遗传毒性评价实验方法之一.
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雄黄致体内外染色体畸变
目的:用仓鼠体内染色体畸变试验和中国仓鼠肺细胞CHL细胞染色体畸变试验评价雄黄的遗传毒性.方法:体内染色体畸变试验用毛足属仓鼠连续ig5 d给予33.25,66.5,133 mg·kg-1剂量雄黄悬浊液,处死前2 h ip秋水仙素.处死后取骨髓细胞制备染色体.油镜下观察每只动物骨髓细胞的有丝分裂指数和100个中期分裂相细胞的畸变类型.CHL细胞染色体畸变试验用雄黄浸出液终质量浓度为0.15,0.3,0.6g.L-1作用于CHL细胞,培养24 h或48 h,终止培养前4h加入秋水仙素.收获细胞,制备染色体,油镜下观察CHL细胞有丝分裂指数和200个中期分裂相细胞的畸变类型.结果:①雄黄265.0 mg· kg -1组和雄黄530.0 mg·kg-1组ig给药和雄黄浸出液(1.2,2.4g·L-1)作用于CHL细胞显示有明显的抑制有丝分裂作用.②与阴性对照组比较,雄黄ig给药仓鼠体内染色体畸变率和雄黄体外给药CHL细胞染色体畸变率均显著升高,差异有极显著意义,且有明显的量效关系.但体内试验的畸变率低于体外试验.③雄黄给药后CHL细胞染色体畸变试验中可见较多的染色体断片,而仓鼠体内染色体畸变试验中未发现,这可能与体内外药物作用的方式不同.结论:①雄黄能致体内外细胞染色体畸变,具有遗传毒性.②仓鼠体内染色体畸变试验可作为中药新药遗传毒性评价试验组合的方法之一.
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两种纳米SiO2刺激巨噬细胞上清液对成纤维细胞的作用
目的 探讨20-nm、60-nm SiO2诱导巨噬细胞生成细胞因子在中国仓鼠肺成纤维细胞(Chinese hamster lung fibroblast,CHL细胞)增殖、胶原合成和基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)表达中的作用.方法 采用酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定2种纳米SiO2染毒RAW264.7细胞生成转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、白细胞介素-1 β(interleukin-1β,IL-1β)的量.CHL细胞与两种纳米SiO2染毒RAW264.7细胞培养上清液共同孵育后,分别用MTT、消化和免疫组化法测定CHL细胞增殖率、羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)生成量及MMP-2表达.结果 与阴性对照组比较,RAW264.7细胞生成TGF-β1,IL-1β增加;CHL细胞增殖率、Hyp生成量和MMP-2表达率增加.结论 两种粒径纳米SiO2与微米SiO2一样,可通过刺激巨噬细胞释放细胞因子促进成纤维细胞增殖,胶原合成和MMP-2增加,启动肺纤维化的发生.
关键词： 纳米SiO2颗粒 RAW264.7细胞 CHL细胞 细胞因子 纤维化 -
口腔卫生用品中甲硝唑的致突变检测及分析
[目的]验证加入口腔卫生用品中的甲硝唑的遗传毒性.[方法]采用中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)体外染色体畸变试验和胎鼠肝血嗜多染红细胞微核试验对甲硝唑进行了检测.[结果]甲硝唑可引起CHL细胞染色体的断裂、缺失和易位等结构异常,畸变率明显高于空白对照(P＜0.05);各剂量组胎鼠肝血嗜多染红细胞微核率均高于对照组,中、高剂量组微核率与对照组相比差异有极显著性P＜0.01),且存在较为明显的剂量-反应关系.[结论]甲硝唑经肠胃吸收后,可透过胎盘屏障进入胎鼠,并造成胎鼠肝血细胞染色体的损伤.建议有关部门应禁止或限制在口腔卫生用品中加入甲哨唑,以避免健康人接触而造成不良后果.
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斑蝥酸钠对中国仓鼠肺细胞生长影响初探
目的:观察不同剂量的斑蝥酸钠在体外作用24h对中国仓鼠肺细胞(CHL细胞)生长的影响.方法:以体外培养的中国仓鼠肺细胞为研究对象,分别设立正常对照组以及低、中、高3个剂量的斑蝥酸钠给药组,采用MTT法、倒置显微镜下形态学观察以及PI流式细胞分析法分析斑蝥酸钠对CHL细胞的生长抑制情况.结果:低、中、高剂量斑蝥酸钠作用24h,对CHL细胞抑制率分别为11.27％、17.77％、27.32％,大剂量有明显抑制作用(P＜0.01);倒置显微镜下可观察到细胞表面有“出芽”现象.结论:斑蝥酸钠能抑制CHL细胞生长,并且可诱导其凋亡.
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0.4mT工频磁场对CHL细胞微丝装配的影响
目的 探讨0.4mT工频磁场对中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)微丝(F-actin)装配的影响及作用机制.方法 用免疫荧光染色法标记F-actin,激光共聚焦荧光显微镜观察F-actin形态并拍照,用Western-blotting方法检测了与去垢剂不可溶的细胞骨架相连的表皮生长因子受体(EGFR)蛋白的含量.结果 0.4 mT工频磁场辐照CHL细胞30min导致细胞F-actin应力纤维减少,在细胞周边出现丝状伪足,磁场对CHL细胞F-actin形态的影响与细胞经50nmol/L的表皮生长因子(EGF)作用30min类似,且磁场和EGF都使与去垢剂不可溶的细胞骨架相连的EGFR增多.结论 0.4mT工频磁场辐照导致CHL细胞F-actin装配发生变化,磁场对F-actin的影响可能与磁场诱导表皮生长因子受体聚集,并引起信号向下传递有关.
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茶多酚对60Coγ辐射诱发CHL细胞染色体畸变和微核形成作用的影响
目的 研究茶多酚(tea polyphenols,TP)对60Coγ辐射诱发中国仓鼠肺成纤维细胞(Chinese hamster fibroblast cell line,CHL)染色体畸变和小鼠骨髓微核形成作用的影响.方法 将CHL细胞(±S9)分为空白对照组、阳性对照组、辐射模型组,TP保护组(分别加TP12.5、25、50 μg/ml)6组,除空白和阳性对照组外均给予2 Gy60Co γ照射后继续培养24h,常规制备染色体,观察畸变类型并计算畸变率.50只KM小鼠分为正常对照组、辐射模型组,TP保护组(高、中、低剂量分别于照射后给TP725、145、29 mg/kg灌胃),每组10只,给药后14天给予6 Gy60Coγ照射,24h后处死动物,取双侧股骨,行骨髓涂片和姬姆萨染色,计数含微核嗜多染红细胞(polychromatie erythrocyte,PCE)数.结果 中、高剂量组TP(25、50μg/ml)可显著降低60Co γ诱发的CHL染色体畸变率,S9不影响CHL细胞染色体畸变形式和畸变率.高、中剂量TP保护组(725、145 mg/kg)小鼠PCE微核率与辐照模型组相比较,相差显著(P＜0.05).结论 茶多酚能部分对抗60Co γ辐射诱发的CHL细胞染色体畸变和微核形成,对染色体损伤具有保护作用.
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白芷多糖的提取纯化及其对仓鼠肺细胞生长作用的研究
目的:研究白芷多糖(ADP)的提取纯化及其对中国仓鼠肺细胞(CHL)生长作用的影响.方法:提取ADP,经Sephadex G-50、G-200层析纯化,用二甲基噻唑二苯基四唑溴盐(MTT)比色法检测ADP对体外培养的CHL细胞生长增殖的作用.结果:经Sephadex G-50、G-200层析纯化后,分子量范围为1000～200000的ADP在50、100、500μg/m1对CHL细胞的生长增殖均有促进作用.结论:ADP对体外培养的CHL细胞增殖具有促进作用.
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Hep G2培养条件的摸索及其与CHL、3T3细胞代谢能力的比较
目的:以MTT试验方法计算环磷酰胺(cyclophosphamide,CP)对Hep G2细胞和体外安全性评价常用细胞系CHL、3T3细胞的LC50,间接比较几种细胞系的代谢能力并确定Hep G2细胞适宜的培养试验条件.方法:用需代谢活化的阳性物CP以含血清和不含血清的培养液配制染毒液,按10.0、7.21、5.19、3.73、2.69、1.93、1.39、1.00 mg/ml浓度对CHL、3T3细胞和以不同培养液培养的Hep G2细胞染毒,在24 h时间点以MTT方法对细胞存活情况进行分析,计算LC50,比较各种细胞和不同培养条件下Hep G2细胞对CP的代谢活化水平,并观察不同培养条件下Hep G2细胞的生长状态.结果:MTT试验结果表明Hep G2细胞对CP的代谢能力强,CHL细胞次之,而3T3细胞对CP的代谢能力弱;3种不同培养液培养的Hep G2细胞无论染毒液是含血清的还是不含血清的均观察到CP对细胞的LC50:MEM＞DMEM＞RPMI 1640,Hep G2细胞在DMEM、RPMI 1640两种培养液中生长状态均良好,尤其是RPMI 1640培养的Hep G2细胞,在无血清的染毒液培养下既能获得较多的细胞又能表现出较强的代谢CP的能力.结论:Hep G2细胞对CP的代谢活化能力较CHL和3T3细胞强,以RPMI 1640培养的Hep G2细胞生长状态良好且较DMEM和MEM培养的细胞表现出更强的代谢活化CP的能力,能获得较理想的培养和试验结果.
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硫芥诱导小鼠染色体畸变和微核形成作用的研究
目的研究硫芥对中国仓鼠肺成纤维细胞(chinese hamsterfibroblast cell line,CHL)染色体的诱变作用及对小鼠骨髓微核率的影响.方法培养CHL细胞(±S9),以不同浓度硫芥处理24h后常规方法制备染色体,观察畸变类型并计算畸变率.KM小白鼠皮下注射硫芥染毒,24h后处死动物,取双侧股骨,行骨髓涂片和姬姆萨染色,计数含微核嗜多染红细胞(polychromatic erythrocyte,PCE)数.结果硫芥处理的CHL细胞染色体畸变率显著增加,出现裂隙、断裂、缺失、多倍体等多种类型畸变,并呈量效依赖趋势.S9不影响硫芥诱导的CHL细胞染色体畸变形式和畸变率.与对照组比较,注射硫芥小鼠骨髓PCE微核率显著增加(P＜0.01),硫芥剂量越大,微核形成率越高.结论硫芥能直接诱发细胞染色体损伤.
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吴茱萸对CHL细胞染色体畸变影响的研究
目的 探讨吴茱萸的主要生物碱(吴茱萸碱和吴茱萸次碱)以及柠檬苦素对CHL细胞染色体畸变的影响,对其遗传毒性进行初步研究.方法 用不同剂量的吴茱萸碱、吴茱萸次碱、柠檬苦素对CHL细胞进行体外染毒,观察其致CHL细胞染色体结构及数量的变化.结果 吴茱萸在0.5 mg/ml、0.05 mg/ml和0.005 mg/ml不同测试浓度下,在+S9和-S9条件下,与细胞作用4h及24h收集细胞进行染色体畸变分析,各剂量组染色体畸变率均在正常范围；吴茱萸次碱在0.5 mg/ml、0.05 mg/ml和0.005 mg/ml不同测试浓度下,在+S9和-S9条件下,与细胞作用4h收集细胞进行染色体畸变分析,各剂量组染色体畸变率均在正常范围,与细胞作用24 h,可诱发可重复性的阳性结果；柠檬苦素在2.5mg/ml、0.25 mg/ml和0.025 mg/ml不同测试浓度下,在+S9和-S9条件下,各剂量组染色体畸变率均出现可重复性的阳性结果.结论 在本试验所确定的测试条件下,吴茱萸次碱和柠檬苦素可导致CHL细胞染色体畸变.
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乌头类中药对CHL细胞的DNA损伤作用
[目的]观察乌头类中药盐附子和乌头碱对CHL细胞(中国仓鼠肺成纤维细胞)的DNA损伤作用.[方法]采用单细胞凝胶电泳法检测盐附子、乌头碱对CHL细胞DNA即刻损伤的影响.在加和不加S9时,盐附子均设5个剂量组(终浓度分别为5、25、1.25、0.625、0.313 mg生药/ml)、乌头碱设4个剂量组(终浓度分别为100、50、25、5μg/ml),试验同时设PBS阴性对照组和阳性对照组,阳性对照在不加S9时为0.1 mmol/ml重铬酸钾,加S9时为80μg/ml环磷酰胺.[结果]在加和不加S9时,盐附子各浓度组拖尾细胞率和拖尾细胞尾长与阴性对照比较差异无统计学意义(P＞0.05),乌头碱100μg/ml和50μg/ml组拖尾细胞率和拖尾细胞尾长与阴性对照之间差异有统计学意义(P＜0.05),乌头碱各浓度组拖尾细胞率和拖尾细胞尾长存在剂量反应关系.[结论]在本试验条件下,加与不加S9时,乌头碱浓度为100μg/ml和50μg/ml时对CHL细胞有DNA损伤作用;盐附子5、2.5、1.25、0.625、0.313 mg生药/ml时未观察到对CHL细胞有DNA损伤作用.
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实时动态监测纳米氧化铜作用于CHL细胞的毒性效应
目的:探讨纳米氧化铜连续作用于CHL细胞的毒性效应.方法:应用实时细胞分析仪(RTCA)对不同接种密度(1×105、5×104、2.5×104、1.25×104/mL)的CHL细胞进行140 h连续测定,绘制不同密度CHL细胞的生长曲线.继而对不同剂量(0、2、1、0.5、0.25、0.125、0.062 5、0.031 3 mg/mL)的纳米氧化铜作用于CHL细胞所产生的毒性效应进行实时监测,得到不同作用时间的IC50值,绘制连续时间点IC50变化的曲线,以判定纳米氧化铜作用于CHL细胞所产生的毒性效应.结果:4种不同密度CHL细胞接种后,细胞达到对数生长期的时间有所不同,其中5×104/mL密度适合进行毒性效应试验.不同剂量纳米氧化铜染毒后,毒性作用起始时间为4～5h,加入受试物后,前6h的IC50值较高,且波动较大.从6h以后,IC50值呈现明显下降,作用12、24、36、48 h的IC50值分别为0.157 0、0.051 1、0.042 9和0.016 8 mg/mL.结论:使用RTCA实时动态监测系统测定纳米材料的细胞毒性具有实用性.在纳米氧化铜对CHL细胞所产生毒性作用的进一步研究工作中,对染毒后4～18h所产生的毒性作用进行研究更有意义.
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染色体畸变试验中不同有机溶剂对CHL细胞毒性的比较
目的:研究9种不同的有机溶剂不同体积分数下对体外培养的CHL细胞的毒性作用.方法:采用MTT法,对0.1％、0.3％、1％、3％和10％体积分数下DMSO、二氧六环、乙腈、丙酮、四氢呋喃、甘油、冰醋酸、甲醇和乙醇对CHL细胞的抑制率进行测定,计算出细胞抑制率达20％时各溶剂的体积分数.结果:DMSO、二氧六环、乙腈、丙酮、四氢呋喃、甘油、冰醋酸、甲醇和乙醇对CHL细胞抑制率达20％时,体积分数分别为1.0％、0.2％、1.5％、5.4％、0.2％、3.2％、0.000 07％、1.7％和2.1％.结论:在进行染色体畸变试验时,应充分了解受试物特点,并在此基础上根据溶剂的特点及毒性选择合适的溶剂.
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一种氧化型染发剂的致突变性研究
目的: 检测一种染发剂的致突变性作为毒理学评价的一部分.方法:用Ames试验和体外哺乳动物细胞(CHL)染色体畸变试验来检测氧化型染发剂的致突变性.结果:在加S-9mix条件下,每皿2 500 μg至5 000 μg对测试菌株TA98具有明显的诱变性,其回变菌落数是自发回变数的2～3倍, Ames试验检测结果为阳性.体外哺乳动物细胞(CHL)染色体畸变试验显示在加或不加S-9mix条件下,当受试物终浓度为300 μg/ml,600 μg/ml和1 000 μg/ml,除了300 μg/ml在加S-9mix时染色体畸变细胞率未显著增加外(P＞0.05),其余浓度无论加或不加S-9mix,染色体畸变细胞率与阴性对照组相比均有显著性差异(P＜0.05).结论:受试的氧化型染发剂具有一定的遗传毒性.
