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应用胚胎干细胞试验(EST)评价邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)的胚胎毒性
目的 利用小鼠胚胎干细胞试验(EST)模型,初步评价邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)的胚胎毒性.方法 采用悬滴悬浮法培养小鼠胚胎干细胞(mESCs),观察受试物对mESCs分化能力的影响,结合CCK-8法判断受试物对mESCs及小鼠胚胎成纤维细胞(3T3)的细胞毒性结果,预测受试物的胚胎毒性.用已知强胚胎毒性化合物5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)、无胚胎毒性化合物青霉素-G(P-G)对模型进行有效性验证,并将经过验证的EST模型用于评价受试物DEHP的胚胎毒性.结果 利用建立的EST模型对5-FU、P-G胚胎毒性进行评价,结果表明5-FU为强胚胎毒性,P-G为无胚胎毒性,与文献报道一致;DEHP对mESCs和3T3的半数抑制浓度分别为IC50 mESCs=315 μmol/L(126 μg/ml),IC50 3T3=307 μmol/L(122.8 μg/ml),mESCs的半数抑制分化浓度为ID50 mESCs=323 μmol/L(129.2 μg/ml),经EST模型判断公式计算得出该化合物为弱胚胎毒性化合物.结论 建立的EST模型的有效性验证结果与ECVAM的结论一致,可用于胚胎毒性的筛选和评价;经EST模型评价DEHP的胚胎毒性为弱胚胎毒性.
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邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)胚胎期暴露对子代大鼠神经行为发育的影响
目的 通过邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯( Di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)胚胎期暴露,评价DEHP对子代大鼠神经行为发育的影响,初步探讨DEHP的发育神经毒性机制.方法 成熟雌性Wister大鼠从妊娠日起用10、100和500 mg/(kg·d) DEHP连续灌胃染毒至孕19 d,同时设立溶剂对照组.观察仔鼠的行为畸胎学及神经行为学指标的改变,另外Fura-2/AM探针法检测出生后21 d海马神经元细胞内Ca2+浓度变化.结果 500 mg/( kg·d) DEHP组与负趋地性反射实验达标时间延迟;100 mg/(kg·d) DEHP组、500 mg/(kg·d) DEHP组空中翻正实验达标时间延迟;各DEHP染毒组水迷宫实验错误次数增加,潜伏期延长;电穿梭实验电击次数增加、主动逃避时间延长,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).对于海马神经元细胞内Ca2+浓度DEHP各染毒组与对照组相比升高,并且存在一定剂量效应关系.结论 DEHP胚胎期暴露可影响子代大鼠神经系统发育,造成神经行为学改变.DEHP所致海马神经元细胞内钙离子浓度的改变可能为其发育神经毒性的机制之一.
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DEHP与BaP联合诱导Chang liver细胞线粒体介导细胞凋亡作用
目的 研究邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)与苯并(a)芘(BaP)联合染毒对Chang liver细胞的毒性.方法 DEHP(62.5、125、250、500和1000 μmol/L)与BaP(64 μmol/L)单独或联合染毒Chang liver细胞24h,检测细胞活力、细胞内活性氧(ROS)含量、线粒体膜电位(MMP)、细胞凋亡率和Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)以及半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达量.结果 联合染毒各组细胞存活率均低于DEHP单独染毒组(t =6.22、4.64、6.64、5.84、7.29,P＜0.01),但胞内ROS水平均升高(t=4.57、2.23、2.39、2.22、2.16,P ＜0.05或P＜0.01)；≥250μmol/L DEHP与BaP联合染毒组的MMP分别为(80.12±6.41)％、(69.92±5.56)％和(53.76±1.88)％,均低于BaP单独染毒组的(165.93±5.09)％(t=10.92、12.51、14.62,P＜0.01)；细胞凋亡率分别为(7.73±1.91)％、(11.00±3.04)％和(14.20±3.96)％,均高于BaP单独染毒组的(1.55±0.21)％(t=3.96、6.06、8.11,P＜0.01)；此外,活化caspase-3的高表达和升高的Bax/Bcl-2比值也被检出.结论 较高浓度DEHP与BaP联合染毒Chang liver细胞促发ROS水平升高和线粒体膜电位降低,并导致了细胞凋亡；Bax、Bcl-2和活化caspase-3参与了此调控过程.
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邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯宫内暴露对子代大鼠睾丸发育及铜锌微量元素的影响
取雌性Wistar大鼠从妊娠日起用10、100、500mg/(kg·d)邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)连续灌胃染毒至孕19d.测定睾丸脂质过氧化产物丙二醛(MDA)水平,超氧化物歧化酶(SOD)活力,睾丸组织中铜、锌微量元素含量.随着DEHP剂量的增加,500 mg/(kg·d)DEHP染毒组子代大鼠睾丸中的MDA含量增加,SOD活力降低,与对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05).500 mg/(kg·d)DEHP染毒组的锌元素含量与对照组相比,显著降低,差异具有统计学意义(P＜0.05)；而铜含量在各组间差别不明显.提示DEHP胚胎期暴露对子代雄性大鼠的生殖系统发育具有明显的毒性作用,可增加大鼠睾丸组织的脂质过氧化水平,同时会干扰生殖系统锌元素的代谢.这是DEHP致子代雄性大鼠生殖发育毒性的可能机制之一.
关键词： 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP) 生殖毒性 胚胎期 脂质过氧化 微量元素 -
邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯诱发小鼠隐睾与INSL3 mRNA表达的相关性研究
目的:探讨邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)诱发小鼠隐睾的分子机制.方法:DEHP分别以低、中、高3个剂量组(100mg/kg、200mg/kg、500mg/kg)灌胃,作用于孕12 d(gestation day 12,GD 12)至产后3 d(postnatal day 3,PND 3)的昆明孕鼠.观察仔鼠隐睾发生率,RT-PCR检测仔鼠睾丸胰岛素样因子3(insulin like factor 3,INSL3)mRNA表达的相对强度.结果:DEHP可诱发小鼠隐睾,中、高剂量组双侧隐睾发生率分别为16.1%和40.5%,隐睾总发生率分别为25.8%和51.4%;DEHP影响小鼠睾丸组织形态,高剂量组Leydig细胞增生;DEHP下调各实验组小鼠睾丸INSL3mRNA表达水平;PND1、PND5时,DEHP诱发隐睾发生率与INSL3 mRNA表达水平呈负相关(r=-1.0,P＜0.01),PND15时两者无明显相关性(r=0.50,P＞0.05).结论:DEHP诱发小鼠隐睾并下调睾丸Leydig细胞INSL3 mRNA表达水平,隐睾发生率与小鼠一定阶段的INSL3 mRNA表达水平有相关性.
