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卵母细胞和卵巢组织的冷冻
精子冻存已取得了一定的成功,但是冻存的卵母细胞体外发育的成功率很低,因为卵母细胞冻存与许多因素有关,成熟的卵母细胞对冻存非常敏感,很容易出现非整倍体现象.为了提高卵母细胞的受精率,人们已着手研究不成熟卵母细胞及卵巢的冻存.要建立一个方法,使生长完全的生殖泡(germinal vesicle,GV)和MII卵母细胞暴露于与冻存有关的物理和化学逆境后,仍然具有很高的存活率、受精率和发育率.目前还没有一个简单可行的冻存方法,而且主要困难在于如何使原始卵泡中的未成熟卵母细胞发育为成熟的卵母细胞.
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HCG在小鼠卵母细胞体外受精胚胎发育过程中的作用
目的 探讨HCG在小鼠卵母细胞体外受精胚胎发育过程中的作用.方法 选择性成熟4～6周ICR雌性小鼠进行促排卵,体外受精并培养至96 h.在受精液及胚胎培养液中分别加入HCG浓度为0 U/L(对照组)和1 500 U/L(HCG组),对两组的体外受精率、2-细胞分裂率及囊胚形成率进行比较;用实时定量PCR法(qPCR)比较两组4个囊胚质量相关基因mRNA的表达水平,包括多能性相关基因八聚体结合蛋白4(Oct4)、分化相关基因尾端型同源盒2(Cdx2)、氧化应激相关基因锰超氧化物歧化酶(MnSOD)、侵袭相关基因基质金属蛋白酶9(Mmp9);采用免疫荧光法,对两组囊胚进行Cdx2蛋白标记,并用DAPI染色料标记所有细胞的细胞核,在激光共聚焦显微镜下对细胞总数、内细胞团(ICM)、外滋养层(TE)细胞数目进行计数并比较.结果 HCG组的受精率(95.6％)、2-细胞率(96.6％)以及囊胚形成率(83.9％)与对照组(分别为95.8％,96.0％0,81.6％)相比较,差异无统计学意义(P＞0.05);HCG组相关基因Cdx2、MnSOD mRNA的表达水平显著高于对照组(P＜0.05);与对照组相比,HCG组Mmp9基因mRNA表达水平显著上调(P＜0.01);两组的Oc以基因mRNA表达水平无显著性差异(P＞0.05);HCG组囊胚细胞总数(61.7±16.3)显著高于对照组(52.3±9.1)(P＜0.05),HCG组ICM细胞数(15.4±3.8)及TE细胞数(46.2±13.1)多于对照组[分别为(13.2±3.9)和(39.1±7.8)],但差异无统计学意义(P＞0.05);两组ICM/TE值相比较,差异也无统计学意义(P＞0.05).结论 胚胎培养液中加入HCG增加囊胚细胞总数及某些质量相关基因的表达,提高体外发育潜能,HCG具有潜力成为优化植入前胚胎培养体系的有益成分.
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胰岛素对小鼠早期胚胎体外发育的影响
目的探讨胰岛素对小鼠体内外来源早期胚胎体外发育的影响. 方法用添加不同浓度胰岛素和胰岛素+葡萄糖的CZB培养液对小鼠体内外来源胚胎进行体外培养,观察囊胚发育率和囊胚细胞数的变化. 结果小鼠2-细胞胚胎体外培养102 h后,0.05 μg/ml 胰岛素添加组扩张囊胚率、孵化囊胚率和囊胚细胞数均显著高于其他各浓度添加组.葡萄糖加入显著提高了这一效应.添加0.05 μg/ml 胰岛素和葡萄糖的CZB培养液同样显著提高体外受精(IVF)胚胎的孵化囊胚率和囊胚细胞数. 结论添加胰岛素和葡萄糖培养液对体内或IVF小鼠胚胎发育具有相同的促进作用.
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表皮生长因子与胰岛素对小鼠早胚体外发育的影响
目的:探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)与胰岛素对小鼠体外受精(in vitro fertilization,IVF)胚胎植入前发育的影响.方法:小鼠IVF胚胎培养在添加不同浓度的EGF和/或胰岛素-葡萄糖的CZB培养基中,于hCG注射后138h检测囊胚发育率及每个囊胚的细胞数目.结果:培养基中添加0.1ng/ml EGF显著提高了小鼠扩张囊胚的形成率,而囊胚的细胞数目并未增加.EGF与胰岛素-葡萄糖共同添加对小鼠IVF囊胚发育率及囊胚细胞数目并未有显著提高.结论:EGF通过刺激细胞分化,而非细胞增殖方式促进小鼠IVF胚胎的早期发育.而各自佳浓度的EGF与胰岛素共同添加对小鼠早胚并未有协同促进作用.
关键词： 表皮生长因子(EGF) 胰岛素 植入前胚胎 体外发育 小鼠 -
新生大鼠神经干细胞球体外生长传代及分化鉴定
近年来,有关神经干细胞分离培养和研究已经成为神经生物学研究的热点.已有许多研究小组报道了大鼠、小鼠和人胚胎脑组织神经干细胞的分离和培养方法[1-3],但对新生大鼠的脑组织神经干细胞进行分离传代培养则鲜有报道.由于神经干细胞可作为一种移植手段治疗神经系统各种病变和损伤,还可用于研究不同生长因子对神经干细胞的体外发育的影响,其有着广泛的应用前景.因此,我们实验室利用新生当天大鼠大脑皮质和中脑进行神经干细胞的分离培养取得成功,现报道如下.
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胚胎干细胞及细胞工程研究的新进展
干细胞是指具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的一类细胞,它所产生的子代细胞与其具有相同的基因型和表现型.作为"种子细胞”的干细胞可以通过细胞工程的方法在体外发育为各种特异性的细胞供移植和细胞替代所需,并可作为基因疗法的靶细胞用于治疗和研究.由于干细胞有广泛的应用前景,它已成为近年来医学和生物学领域研究的热点.20世纪90年代以来,随着细胞生物学技术的发展及体外分离、培养人胚胎干细胞的成功,干细胞经适当诱导分化可发育为不同类型的细胞、组织和器官,成为移植供体的新来源,由此掀起了干细胞研究的新一轮热潮.
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肉苁蓉水提液对猪早期体外发育胚胎中NO浓度含量的影响
目的 探讨肉苁蓉水提液对猪早期体外发育胚胎中一氧化氮浓度的影响,以研究肉苁蓉促进猪胚胎发育的药理作用.方法 将采集的猪卵母细胞随机分为试验组和对照组,试验组在胚胎培养时在基础液中加入50 μg/mL肉苁蓉水提液.将培养至囊胚阶段的胚胎取出,用Griess试剂法测定囊胚细胞中NO含量.结果 细胞中NO含量显著低于对照组(P＜0.05).结论 肉苁蓉水提液减少了胚胎细胞中NO含量,这可能是其促进细胞体外发育的作用机理之一.
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斑马鱼--一种理想的分子生物学研究的脊椎动物模型
斑马鱼已成为生物学研究的佳脊椎动物模型.它个体小;周期产卵,产卵周期短,产卵量多,卵大;胚胎在体外发育,胚胎发育速度快,早期胚胎完全透明;单倍体、雌核发育二倍体的制作和突变体的获得均较容易;精子可以冷冻保存,所有这些特点使斑马鱼非常适合于胚胎学和发育遗传学的研究.对斑马鱼的基因诱变将揭示其功能基因并绘出其基因图谱,2002年5月份第17期Science杂志专门介绍了这方面的一些研究情况.操纵斑马鱼的基因表达和对其基因的定向诱变已经成为斑马鱼研究的热点.
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EGCG对昆明小鼠早胚体外发育的影响
目的 观察表没食子儿茶素没食子酸酯(-)(EGCG)对昆明(kunming,KM)小鼠早胚体外发育的影响,为改善小鼠早胚体外培养体系奠定实验基础.方法 以空白M16培养液为对照组,M16中添加浓度为0.1 μg/mL、1μg/mL、10μg/mL、20μg/mL EGCG为实验组,收集KM/b鼠1-细胞胚进行体外连续培养,计数各组发育至2-、4-细胞胚、桑椹胚和囊胚等各个阶段的数目,并以2-细胞胚为基数,计算各组至不同阶段的发育率.结果 添加EGCC实验组发育到桑椹胚和囊胚的比率明显高于对照组,其中以添加浓度为10 μg/mL和20μh/mL的EGCG实验组的效果显著,其桑椹胚发育率分别为77.3%和78.7%,而对照组只有43.2%(P＜0.01).10μg/mL和20μg/mL的EGCG实验组的囊胚发育率分别为53.0%和47.3%,也明显高于对照组(19.2%,P＜0.01).结论 EGCG可以显著提高KM小鼠1-细胞胚体外发育到桑椹胚及囊胚的比率,以10μg/mL和20μg/mL浓度的EGCG效果显著.
关键词： 表没食子儿茶素没食子酸酯 早胚 小鼠 体外发育 -
表皮生长因子对小鼠早期胚胎体外发育影响的研究
目的:探讨表皮生长因子对小鼠植入前胚胎体外发育的影响.方法:用添加不同浓度EGF(epidermal growth factor)的CZB培养液对小鼠早胚进行体外培养,观察囊胚发育率和胚胎细胞数的变化.结果:HCG(humah chorionic gonadotropin)注射后138 h,0.1 ng/ml EGF添加组扩张囊胚率、孵化囊胚率显著高于其他各组.100.0 ng/ml EGF添加组扩张囊胚率和孵化囊胚率显著低于其余各组,且囊胚细胞死亡较多.结论:EGF通过刺激囊胚期细胞分化而促进胚胎体外发育.但高浓度EGF抑制胚胎体外发育并使早期胚胎受损.
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一步法和二步法培养系统对小鼠核移植胚胎体外发育的影响
目的 比较一步法和二步法两种培养系统对小鼠体细胞核移植胚胎体外发育的影响,确立一种有效的培养系统.方法 构建小鼠核移植胚胎,在一步法和二步法2种培养系统中培养,观察核移植胚胎体外发育情况.结果 GlyGln-KSOMg~(AA)/GlyGln-KSOMg~(AA)组核移植胚胎发育的囊胚率(3.9%)和囊胚细胞计数(34.00±2.29)与GlyGln-KSOMg~(AA)组差异无统计学意义(P＞0.05).卵裂培养基(9.8%;46.05 ±2.62)组和卵裂培养基/囊胚培养基(10.3%;51.15±2.37)组核移植胚胎的囊胚率和囊胚细胞计数差异也无统计学意义(P＞0.05);牛磺酸加入GlyGln-KSOM-g~(AA)后能有效改善早期核移植胚胎体外发育能力.结论 一步法和两步法培养体系均符合小鼠体细胞核移植胚胎不同发育阶段的代谢特征和营养需求,是适宜的小鼠体细胞核移植胚胎培养方法 .
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不同浓度表皮生长因子对小鼠2-细胞胚胎体外发育的影响
目的:研究不同浓度表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)对ICR小鼠2-细胞胚胎体外发育的影响.方法:在mKSOM培养液中添加不同浓度(0.1,1.0,10和100 ng/ml)的EGF对小鼠2-细胞胚胎进行体外培养72 h、96 h,观察囊胚发育率、孵化率和胚胎细胞数的变化.结果:实验组加入四种不同浓度EGF胚胎培养72 h后,其囊胚率分别为93.8%、92.4%、91.8%、91.2%; 96 h后其孵出率分别为61.1%、61.8%、63.0%、60.1%,均显著高于对照组(79.9%、43.1%,P＜0.05),囊胚细胞数分别为73.1±13.4、73.8±7.0、74.3±12.2、77.6±8.2,与对照组(72.1±6.9)比较,差异无显著性(P＞0.05);四个实验组间差异亦无显著性(P＞0.05).结论: EGF浓度在0.1,1.0,10和100 ng/ml范围内可提高体外培养鼠胚的囊胚率与孵出率;胚囊细胞数无变化;不同浓度EGF对早期鼠胚未见有毒性作用.
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卵巢和睾丸组织异种移植技术在物种保存中的研究进展
随着医学研究领域的不断扩展,尤其是体外成熟(IVM)、体外受精(WF)或卵胞浆精子注射(ICSI)等技术的发展,人工体外发育与繁殖被认为是保存物种的一个有效补充途径,但就众多濒危物种来说,成熟配子获取困难以及数量有限制约了这些技术在物种保护领域的进一步应用.
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组织发育和构建及其调节机制
从再生医学的角度来讲,体外生成的组织可以在一定程度上模仿生理和病理组织,具有十分重要的生物学意义.然而,体外组织在结构和功能上比较简单,需要进行体外的自组装和模拟组织发育等相关研究.纳米技术和微构衍生工具的出现,使体外组织的组装成为可能.研究表明,除遗传物质外,组织构型及其微环境也与体外组织的形态发生密切相关.那么,我们该如何设计和装配微观组织,使其成形?如何在体外预测和调控其发育机制?本文结合目前有关物理、生物学以及系统集成构形化理论,对体外组织的组装和模拟机制等进行综述.
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胰岛素对ICR小鼠胚胎体外发育的影响
目的 研究ICR小鼠胚胎体外培养时,添加胰岛素的作用、浓度及所需阶段.方法 用添加不同浓度胰岛素的mKSOM培养基对小鼠胚胎进行体外培养及选择适浓度对不同阶段鼠胚进行体外培养,观察囊胚发育率和囊胚细胞数的变化.结果所有添加胰岛素的浓度组,囊胚发育率均高于对照组,其中0.005μg/mL和0.05 μg/mL浓度组囊胚细胞数显著高于对照组和其他各浓度组.2-细胞至4-细胞、4-细胞至桑椹胚前添加胰岛索囊胚率显著高于对照组和其他实验组. 结论 在ICR小鼠胚胎体外培养时添加胰岛素能够促进胚胎发育;胰岛素浓度增至10 μg/mL对在ICR小鼠胚胎无毒性作用;在ICR小鼠胚胎体外培养的适宜胰岛素浓度为0.005 μg/mL和0.05μg/mL;2-细胞至4-细胞、4-细胞至桑椹胚前添加胰岛素更加重要.
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胰岛素对不同时期ICR小鼠胚胎体外发育的影响
目的 研究胰岛素对不同时期小鼠胚胎体外发育的影响.方法 收集1-细胞、2-细胞、4-细胞及桑椹胚期鼠胚,分别在含0(对照组)、0.005、0.05、0.5、5、10ug/mL胰岛素的KSOM中培养.结果在1-细胞及2-细胞阶段添加系列浓度时,0.005 ug/mL及0.05ug/mL胰岛素组不仅提高囊胚率、孵化率,而且提高囊胚细胞数.4-细胞阶段添加系列浓度时0.05ug/ml胰岛素组能够提高囊胚率、孵化率以及囊胚细胞数;而至桑椹胚阶段再添加系列浓度胰岛素时,囊胚率、孵化率以及囊胚细胞数均无统计学意义(P>O.05).结论 在ICR小鼠胚胎体外培养时适宜的胰岛素浓度为0.05ug/mL;桑椹胚之前添加胰岛素对小鼠胚胎发育是必要的.在一定发育阶段内,随着胚胎的生长对胰岛素的需求也相应增加.
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槲皮素对小鼠1-细胞胚胎体外发育能力的影响
目的 为完善小鼠早期胚胎体外培养体系,了解槲皮素对小鼠1-细胞胚胎体外发育的影响.方法 以CZB为基础培养液,添加不同浓度(500、50、5、1、0.5、0.2、0.1 μm)的槲皮素作为试验组,添加等量二甲基亚砜(DMSO)作为对照组,观察不同浓度槲皮素对胚胎发育到囊胚各阶段的影响.结果 当槲皮素浓度超过50μm时,对胚胎发育有毒性效应；0.1～1 μm浓度槲皮素对胚胎发育有促进作用,特别是0.5 μm槲皮素能明显提高胚胎的囊胚形成率.结论 0.5 μm槲皮素能促进小鼠早期胚胎的体外发育.
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不同机械辅助孵化方式对小鼠胚胎体外发育影响的研究
目的:探讨不同机械切口辅助孵化方式对小鼠胚胎体外发育的影响.方法:将678枚2-4-细胞期昆明白种小鼠胚胎随机分为A(183枚)、B(177枚)、C(168枚)组和对照组(150枚).A、B、C组采用机械法在透明带上分别开"-"、"+"、"(|)"形状切口,对照组不作切口,比较各组的囊胚获得率和孵出率.结果:A、B、C组d 5囊胚获得率分别为92.35%、92.09%和91.07%,与对照组的93.33%比较,无统计学差异(P＞0.05);d 6囊胚完全孵出率依次为75.00%、91.52%和90.57%,显著高于对照组的48.25%(P＜0.001).B、C组d 6囊胚完全孵出率无统计学差异(P＞0.05),但均显著高于A组(P≤0.001).A组的辅助孵化时间(13.88±1.72 s)显著小于B、C组(44.46±2.61 s和53.73±3.29 s)(P＜0.05);且B、C组间也有显著差异,P＜0.05.结论:不同机械切口的辅助孵化方式均能有效提高囊胚孵出率;"+"和"(|)"形状切口的辅助孵化效果显著优于单一切口者;"(|)"较"+"形状切口的辅助孵化方式更省时、安全,较"-"方式更有效,值得推广.
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小鼠4-细胞期胚胎单卵裂球体外发育潜能的实验研究
目的:探讨小鼠4-细胞期胚胎的单卵裂球(4-cell stage mice embryo derived-blastomeres,4c-MEDB)的全能性.方法:将小鼠4-细胞期胚胎分割产生单个卵裂球,在体外无透明带培养条件下,不加外源性细胞因子,观察其发育潜能及特性,并将得到的囊胚与正常囊胚进行形态学、免疫学鉴定比较,同时将4c-MEDB来源囊胚(individual blastomere derived-blastocysts,IBDB)移植到假孕母鼠子宫,观察其发育情况.结果:①体外无透明带培养条件下,4c-MEDB较正常胚胎发育滞后,囊胚获得率低;②4c-MEDB具有发育成为完整囊胚的潜能;③IBDB移植入假孕小鼠子宫后具有一定发育能力,能发育到原条期,但未获得足月妊娠.结论:在未添加外源性细胞因子的体外无透明带培养条件下,小鼠4-细胞期胚胎单卵裂球具有发育为完整囊胚的能力,所获囊胚移植入假孕小鼠子宫后可以发育到原条期.
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肿瘤转移抑制因子CD82/KAI1对植入前小鼠胚胎体外发育的影响
目的:研究CD82/KAI1mRNA及蛋白质在小鼠胚胎中的表达规律及其对小鼠胚胎体外发育的影响.方法:①应用RT-PCR及免疫荧光技术观察CD82/KAI1 mRNA及蛋白质在小鼠不同发育时期胚胎中的表达规律.②在不同CD82/KAI1抗体浓度的培养液中,培养小鼠8-细胞胚胎,观察囊胚发育率、孵化率和胚胎细胞数的变化.结果:①CD82/KAI1 mRNA在小鼠不同时期胚胎中均有表达,于8-细胞期及桑葚胚表达较丰富,CD82/KAI1蛋白表达于各期胚胎细胞的胞膜和胞浆,在桑葚胚期CD82蛋白还强表达于胚胎细胞的胞核.②一定浓度的CD82/KAI1抗体可明显抑制胚胎的发育速度(1:800,P＜0.05),降低囊胚的形成率(1:400,P＜0.05)和孵出率(1:800,P＜0.05),减少囊胚细胞数(1:800,P＜0.05).结论:CD82/KAI1在小鼠胚胎的发育过程中可能发挥重要作用.
关键词： 肿瘤转移抑制因子CD82/KAI1 胚胎 体外发育
