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卵母细胞和卵巢组织的冷冻
精子冻存已取得了一定的成功,但是冻存的卵母细胞体外发育的成功率很低,因为卵母细胞冻存与许多因素有关,成熟的卵母细胞对冻存非常敏感,很容易出现非整倍体现象.为了提高卵母细胞的受精率,人们已着手研究不成熟卵母细胞及卵巢的冻存.要建立一个方法,使生长完全的生殖泡(germinal vesicle,GV)和MII卵母细胞暴露于与冻存有关的物理和化学逆境后,仍然具有很高的存活率、受精率和发育率.目前还没有一个简单可行的冻存方法,而且主要困难在于如何使原始卵泡中的未成熟卵母细胞发育为成熟的卵母细胞.
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表皮生长因子卵丘细胞对卵母细胞体外成熟的影响
目的探讨表皮生长因子(EGF)、卵丘细胞对人类生殖泡(germinal vesicle,GV)期不成熟卵母细胞体外成熟的影响.方法将EGF和促性腺激素(gonadotropin,Gn)联合应用于不成熟卵母细胞的体外培养,并同单纯应用Gn相对照观察EGF的影响;同时将卵母细胞分为卵丘卵母细胞复合物(CEO组)及裸卵(DO组)进行培养,了解卵丘细胞在体外培养中的作用.结果EGF可以提高DO组的MII期率(P＜0.01);对于CEO组应用EGF后可以促进胞质的成熟,提高受精能力(P＜0.05).关于卵丘细胞的作用,CEO组的MII期率为68.8%,明显高于DO组的46.7%(P＜0.01);CEO组的卵裂率为72.7%,高于DO组的35.7%(P＜0.05).结论EGF可以直接促进不成熟裸卵体外成熟,提高其MII期率;与Gn联合应用后可进一步促进卵丘卵母细胞复合物胞质的成熟,提高受精率.保留卵丘细胞利于卵母细胞胞质的发育,提高不成熟卵母细胞的体外成熟能力,使MII期率、卵裂率升高.
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排卵前成熟卵泡液对卵母细胞体外成熟的影响
目的:探讨成熟卵泡液、促性腺激素对人类生殖泡期(germinal vesicle,GV)不成熟卵母细胞体外成熟(in vitro maturation,IVM)的影响.方法:在基本培养液中加入50%成熟卵泡液(follicle fluids,FF)(Ⅰ组)、或促性腺激素(gonadotrophin,Gn)(Ⅱ组)或单用基本培养液即对照组(Ⅲ组)用于GV期卵母细胞的体外培养,观察成熟率及进一步发育能力.结果:三组之间GVBD(生殖泡期破裂)率差异无显著性(P>0.05),MⅡ期率和受精率,Ⅰ、Ⅱ组明显高于Ⅲ组(P<0.01)、Ⅰ组与Ⅱ组之间无差异(P>0.05);Ⅰ组卵裂至8细胞的比例为62.5%,明显高于Ⅱ组的33.3%(P<0.01).结论: GV期卵母细胞尽管在基本培养液中可完成核成熟,但胞质不成熟,加入50% FF或Gn均能促卵母细胞的成熟,两者相比50% FF效果更好.
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人类不成熟卵体外培养的应用
1935年Pincus和Enzmann在家兔的实验中发现,若将不成熟卵母细胞从卵泡中释放出来,它在体外适当培养基中可发育成熟.这一现象使人们开始联想到从体内抽取的不成熟卵母细胞可在体外培养成熟,并可用来挽救发育中即将退化的卵母细胞,同时可能应用于临床提供卵子用于体外受精.人不成熟卵细胞的体外成熟(in vitro maturation, IVM),由Cha[1]首先报道成功从手术穿刺卵巢获得不同成熟阶段的未成熟卵母细胞,在体外培养到成熟卵母细胞而进行体外受精和胚胎移植.随后Trounson等[2]报道在阴道B超引导下穿刺2～10 mm直径的卵泡,未接受促激素刺激的多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢获得不成熟卵进行体外培养并获得成功妊娠.
