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Smad4在人牙胚发育各期的表达与分布
目的:观察转化生长因子β超家族(transforming growthfactor-β superfamily,TGF-β superfamily)细胞因子细胞内共同的信号转导分子Smad4在人牙胚发育过程中的表达与分布变化,探讨Smad4在牙齿发育过程中的作用.方法:制备人牙胚发育各期标本,免疫组化方法观察.结果:Smad4在牙胚发育的各个时期存在特异的时空分布模式.结论:首次观察到Smad4信号分子在人牙胚发育过程中的表达,Smad4作为TGF-β超家族细胞内信号分子,可能参与上皮间充质的相互作用,同时也参与成釉细胞和成牙本质细胞的分化以及牙釉质和牙本质的形成.
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免疫金银法在小鼠牙胚细胞外基质免疫组化研究中的应用
细胞与细胞间质之间相互作用在组织的发生、发育中的重要性已众所周知.胞外基质(ECM)在牙胚的形态发生和细胞分化方面起着重要作用.纤维粘连蛋白(Fibronectin,FN)是牙胚组织中的重要间质成分.为了观察FN在牙胚发育中的分布特征和变化,分析FN等间质与牙乳头细胞分化的关系,更好地进行胞外基质的观察,作者利用免疫组化技术,将免疫金银法(Immunogold silver staining,IGSS)和微波结合,用于小鼠牙胚FN的染色观察中,取得了较好的效果,现将方法介绍如下:
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基质金属蛋白酶8在小鼠胚胎期牙胚发育中表达的研究
目的:观察基质金属蛋白酶-8(MMP-8)在小鼠胚胎不同时期,牙胚发育中的表达及分布,探讨其在小鼠牙胚发育过程中可能的作用.方法:制备小鼠胚胎期E13.5,E14.5,E16.5,E18.5天的下颌第一磨牙牙胚的石蜡切片,通过免疫组织化学染色技术检测MMP-8在这4个发育时期牙胚组织中的表达分布情况.结果:MMP-8在蕾状期(E13.5天)表达于成釉器表层的上皮细胞及周围的间充质细胞,在帽状期(E14.5天)表达于釉结,在钟状早期(E16.5天)表达于外釉上皮层、内釉上皮层、星网状层、中间层及牙囊,在钟状中期(E18.5天)表达于分化中成釉细胞和成牙本质细胞、中间层及外釉上皮层.结论:MMP-8在牙胚发育中可能调控成釉细胞和成牙本质细胞分化及前期硬组织的分泌、改建和成熟过程.
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基质金属蛋白酶8 mRNA在大鼠牙胚发育中表达及氟对酶活性的影响
用原位杂交方法研究基质金属蛋白酶8(matrixmetallop～roteinases-8,MMP-8)在鼠牙胚发育钟状期的表达,用蛋白凝胶电泳法研究氟对酶活性的影响,了解MMP-8对牙本质发育基质改建的作用,探讨氟损伤牙本质的机制.
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牙胚发育信号调控网络研究进展
牙胚的发育源于上皮与间充质间众多信号分子的相互作用,这种上皮-间充质间的相互诱导促进细胞的分化及器官的形成、发育的模式是近端诱导的经典材料.在此过程中,有Wnt家族,Hox基因家族,TGF-β超家族(包括BMP),Shh族基因以及其他间充质来源的转录因子,构成复杂的信号调控网络,指导细胞的增殖、分化、凋亡和牙胚器官的发生发育,形态的形成.本文对牙胚发育过程中主要调控因子的相关研究作一综述.
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不同乙醇预处理方式对LMD分离牙胚组织总RNA完整度的影响
目的:探求不同乙醇预处理方式是否对激光显微切割(Laser microdissection,LMD)技术分离获得的小鼠牙胚组织总RNA完整度有影响.以提高LMD技术获取样品的完整度,使之满足后续基因芯片等高通量实验对样品的质检要求.方法:本实验按照LMD切割前是否乙醇预处理的方式分为无预处理LMD组、梯度乙醇处理组以及100％乙醇处理组三组.以LMD技术获取胚胎17天(Embryonic 17,E17)和出生后2天(Postnatal 2,PN2)两时期CD1小鼠下颌第一磨牙的牙胚组织；提取各组总RNA,再以核糖体RNA 28s/18s比值、RNA完整度数值(RNA Integrity Number,RIN),以及样品电泳图的图形来综合判断样品完整度.数据进行统计分析.结果:100％乙醇处理组,RIN值高且与另两组相比差异有显著性,梯度乙醇处理组RIN值与无预处理LMD组相比,并无显著性差异；以28s/18s比值为指标,100％乙醇预处理组高于其它两组,但差异并无显著性;梯度乙醇处理组与无预处理LMD组间差异亦无统计学意义.结论:100％乙醇直接处理方式更适合用于LMD切割样品的防降解预处理,可显著减少切割过程中的组织RNA完整度破坏.该步操作将有利于获得符合高通量实验质检标准的芯片实验样本.
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牙釉质发育不全症的临床观察
在妊娠期始儿的发育过程中,由于母体营养障碍,身体素质差,造成维生素A、维生素D的缺乏,致使台胎儿的牙胚发育受到影响,因此,新生儿至6岁的乳牙,6～12岁的恒牙发育受到先天性的缺陷;又由于严重的全身疾病,营养障碍或局部感染,以及遗传等原因,使釉质的发育受到障碍而遗留下永久性的缺陷,釉质的基质形成障碍,就会出现实质性缺损,称釉质发育不良;如果基质形成正常,而钙化受影响,则仅有硬度和颜色的改变,而无实质缺损,称釉质钙化不良;二者合称釉质发育不全症.
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Shh反义核酸对体外培养小鼠牙胚发育的影响
目的 用Shh反义寡脱氧核苷酸(ODN)抑制体外培养小鼠牙胚中Shh的翻译,观察该抑制反应对牙胚生长及矿化的影响.方法 培养牙胚取自胎龄为E17.5d昆明小鼠下颌第一磨牙,利用简易Trowell支架,建立小鼠牙胚体外培养模型,实验共分为三组:反叉ODN组;正义ODN组及空白对照组,核酸浓度为30 μmol/L.体外分别培养10 d后,进行HE染色、von Kossa染色.结果 蛋白印迹结果显示所应用的反义核酸阻断了牙胚中Shh的表达.HE、von Kossa染色结果显示:培养10 d,S-ODN组与空白对照牙胚进入钟状晚期,细胞分化,并可见分泌的基质带;钙磷酸盐在成牙本质细胞与成釉细胞间的基质中沉积.AS-ODN组牙胚培养10 d,牙胚进入钟状期,但牙胚体积明显变小,牙尖形态发育不良,成牙本质细胞排列紊乱,但仍可见高柱状分泌期细胞;von Kossa染色未见明显钙磷酸盐沉积.结论 Shh反义核酸减缓体外培养牙胚的发育,可能通过对成牙本质细胞分泌功能的影响而影响牙胚的矿化.
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Notch 1信号蛋白在大鼠牙胚发育中的免疫组化表达研究
目的通过检测大鼠牙胚发育不同阶段Notch 1信号的表达情况,探讨其在牙齿发育过程中的作用.方法采用免疫组织化学染色技术观测大鼠孕期12、14、16、17、18、19d和出生后1、3、5、7、9d牙胚中Notch 1的表达.结果Notch 1的表达始于钟状中期.在钟状中晚期,Notch 1的表达在牙乳头间充质、成牙本质细胞层呈弱阳性,在内釉细胞层呈阳性.牙体组织形成开始,Notch 1则在成釉细胞的中间层有反复表达,在成牙本质细胞层中有一过性表达.牙齿萌出后,该信号在成牙本质细胞和成釉细胞表达均为阴性.结论Notch 1在牙胚发育过程中与成釉细胞分化有关,它可能在牙齿发育早期基质触发前成釉细胞向成釉细胞分化中起重要作用.
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Dlx1基因在大鼠外胚间充质细胞中表达的研究
目的探讨Dlx1基因在牙胚发育过程中的调控作用.方法采用外胚间充质细胞组织块培养法;地高辛标记cDNA原位杂交检测方法和斑点杂交方法,观察Dlx1基因在大鼠外胚间充质细胞,人牙乳头细胞,人牙髓细胞中的表达情况.结果 Dlx1基因在外胚间充质细胞和人牙乳头细胞中mRNA呈强阳性表达,而在牙髓细胞中弱表达.结论 Dlx1基因是牙胚发育过程中重要的调节因子,这种调控作用具有一定的时间性与空间性,它可能主要参与调控早期未分化细胞,而对终末分化细胞作用不显著.
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牙胚牙体组织切片的特殊染色方法及应用探讨
口腔组织胚胎学、病理学的牙胚发育,牙体组织形成教学和科研切片,多用常规HE染色进行观察研究.由于HE染色主要将细胞核染成蓝色,细胞浆染成红色,一般组织和病变的基本形态结构可以显示出来.但因构成牙尤其是牙胚牙体组织的牙釉质、牙本质和新形成的牙骨质是无细胞的特殊组织,HE染色只能将其染成单一的红色,不便观察研究,特别是初学者对牙胚的形态结构识别很困难.本文介绍笔者参考有关文献[1～3],用改良的Gomori、Masson及Mallory三种特殊染色,分别将牙胚牙体组织中的牙釉质和牙本质等染成对比鲜明、不同颜色的方法及应用体会.
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牙胚发育中细胞凋亡的相关基因研究进展
细胞凋亡是生长发育调控中的重要事件.凋亡的两大主要功能是对生长和发育的调控.在发育中,细胞凋亡引起细胞群的程序性清除.发育中凋亡紊乱将导致胚胎结构和功能异常.噬齿类动物牙胚发育一直被当作研究器官发育形态发生和细胞分化的模型.细胞凋亡在牙齿发育中起着重要作用,参与上皮-间充质的相互作用,及时调控细胞数量,清除异常衰老细胞及暂时性结构,发挥塑形作用.牙胚发育过程中的细胞凋亡是在特定的时间空间所发生的一个受许多基因严格调控的主动连续的程序化的生理过程.相关的调控基因包括Bcl-2/Bax, c-myc, Fas/Fasl, Bmps等,现将重要的调控基因综述如下.
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DLX基因在牙胚发育中的作用
转录因子(transcription factor)是一种核蛋白,它可以通过结合DNA调节基因表达[1],研究表明,多数转录因子参与颅面和牙齿的发育,在胚胎发育中调节基因表达.转录因子以不同的机制结合DNA,其中一种通过同源域(homeodomain)结合DNA,在发育调节中起关键作用,这种特殊的转录因子都包含一个同源框(homeobox),它有180bp序列可以编码DNA结合同源域,称同源异型框基因(homeobox gene,Hox gene)[2].Hox基因在序列上高度相似,还有一些基因的序列与Hox基因稍有些差异,称为分支Hox基因(divergent homeobox基因,DHox基因)[3].DLX基因是DHox基因中的一个家族,近几年研究表明,它在颅面部及牙胚发育中起着重要作用.
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幼儿园儿童口腔保健措施与效果分析
当前,龋齿已被WHO认定为除心血管疾病、恶性肿瘤外影响人类健康的第三大疾病.有数字显示我国5岁儿童龋齿率高达70%以上.乳牙在儿童生长发育时期起着重要的作用.它兼具咀嚼、发音、美观以及维持恒牙萌出空间的功能.随着儿童年龄的增长,乳牙被恒牙所替代.因而有相当一部分家长认为乳牙是临时性器官,有了龋齿后,不痛就不必治疗,这是一个严重的误解.乳牙龋病存在着许多危害:①龋齿易松动脱落,影响幼儿的咀嚼功能,不利于食物的消化吸收和幼儿的生长发育,还可影响幼儿颜面颌骨的发育;②乳牙长期慢性炎症,可使恒牙牙胚发育中断,影响恒牙的正常萌出;③龋齿还可成为原发病灶,当机体抵抗力下降时,可引发其他疾病,如关节炎、肾炎、心肌炎等.因此,父母和老师必须重视幼儿乳牙的生长情形,发现问题、及时处理.
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细胞极性相关蛋白CDC42和PAR3在小鼠牙胚发育过程中的表达
目的:研究细胞极性相关蛋白CDC42和PAR3在小鼠牙胚发育过程中的表达,探讨其在牙胚发育中的可能作用.方法:取13.5、14.5、16.5和18.5 d(E13.5、E14.5、E16.5和E18.5)的小鼠胚胎以及出生后1和5d(PN1和PN5)的小鼠,分离头部,固定、脱钙、脱水、石蜡包埋、切片,HE染色观察牙胚的组织形态表现,采用免疫组织化学染色方法观察CDC42及PAR3在牙胚发育过程中的表达.结果:HE染色观察,E13.5～E18.5分别为小鼠牙胚发育的蕾状期、帽状期、钟状早期和钟状晚期,PN1小鼠的牙胚中可见分化成熟的成牙本质细胞和成釉细胞,PN5小鼠牙胚可见牙冠部发育完成.免疫组织化学染色,CDC42在E13.5、E14.5和E16.5小鼠牙胚中有广泛表达,在E18.5小鼠牙胚中表达较E13.5、E14.5和E16.5减少,在PN1和PN5小鼠牙胚中主要表达于成牙本质细胞和成釉细胞的分泌端;PAR3弱表达于E13.5和E14.5小鼠牙胚,在E16.5和E18.5小鼠牙胚上皮处表达明显增强,在PN1和PN5小鼠牙胚中表达较E18.5减弱.结论:CDC42和PAR3参与小鼠牙发育的过程,在牙胚发育早期可能参与小鼠牙胚的增殖及迁移,在牙胚发育晚期可能参与了成牙本质细胞和成釉细胞的分化,尤其在成牙本质细胞和成釉细胞极性的形成与维持中可能具有重要作用.
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尼古丁对全身及口腔牙周组织的病理作用研究
在烟草的毒性物质中,尼古丁是主要成分.作为烟草的活性成分,尼古丁可对全身多系统产生病理性危害作用.除此以外,进入母体血液中的尼古丁可对正在发育的胎儿产生影响.牙周炎是口腔常见病,是成人牙齿丧失的主要原因之一.吸烟是牙周炎的重要危险因素.吸烟者较不吸烟者牙周炎的患病率高、病情重.大量研究表明:吸烟与牙周袋形成、附着丧失、骨丧失及牙齿丧失有关.牙周炎的发生发展存在牙周组织破坏和再生修复两种相互交替的过程,而尼古丁对牙周炎的影响也在于加速牙周组织破坏,抑制再生修复从而使得较之于非吸烟者而言,吸烟者的病情更加严重.同时,尚可使吸烟者经系统性牙周治疗的顸后较差.本文通过文献回顾,旨在探讨吸烟对多种全身系统性疾病的影响尤其是在牙周病发生发展过程中的可能作用.同时提出未来研究的可能方向及临床应用.
关键词： 尼古丁 系统性疾病 牙胚发育 牙周炎 α7亚型乙酰胆碱受体 -
SHH在人牙胚钟状期的表达
目的 观察信号分子Sonichedgehog(Shh)在人牙胚钟状期的表达,探讨其在牙齿发育过程中的作用.方法 采用免疫组化方法观察人牙胚钟状期中Shh的表达.结果 在钟状早期,Shh在成釉细胞强阳性表达,成牙本质细胞亦可见Shh阳性信号,而牙乳头细胞、星网层和中间层细胞无明显表达.钟状晚期即硬组织形成期,Shh在成釉细胞的表达仍强于成牙本质细胞,成釉器星网层未见表达.
关键词： Sonichedgehog 免疫组化 牙胚发育 -
人牙胚发育过程中Smad 2分子的表达与分布变化
目的观察转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)特异的细胞内信号转导分子Smad 2在人牙胚发育过程中的表达与分布变化,探讨Smad 2在牙发育过程中的作用.方法制备人牙胚发育各期标本,免疫组化方法检测Smad 2分子的表达.结果 Smad 2在牙胚发育的各个时期存在特异的时空分布模式,其分布与TGF-β有相似之处.结论首次观察到Smad 2信号分子在人牙胚发育过程中的表达,Smad 2作为TGF-β细胞内信号分子,可能参与上皮-间充质的信号诱导,同时也参与成釉细胞和成牙本质细胞的分化以及牙釉质和牙本质的形成.
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氟对大鼠牙胚发育中survivin蛋白表达的影响
目的:观察survivin蛋白在氟中毒SD大鼠牙胚发育过程中的表达,探讨氟对survivin蛋白表达的影响,进一步探讨氟斑牙的发病机制.方法:取妊娠10d孕鼠45只,随机分为对照组、实验1组和实验2组,饮水中含氟浓度分别为0、50、150 mg/L.每组分别在E18.5 d(妊娠18.5 d)、E20.5 d、P1.5 d(出生后1.5 d)、P3.5 d、P5.5 d时取材、固定、包埋,选择P1.5 d标本做H-E染色.应用免疫组织化学SABC法对每组切片染色.利用Motic Med 6.0数码医学图像分析系统(A)进行图像采集.采用SPSS 13.0软件包对数据进行单因素方差分析.结果:在牙胚发育的不同时期,各组survivin蛋白的表达均呈“M”形变化趋势.E18.5d组F=1.050,P＞0.05;E20.5 d组F=2.232,P＞0.05,各组间差异无显著性;P1.5 d组正=3.538,P＜0.05,P3.5 d组F=3.820,P＜0.05,P5.5 d组F=5.096,P＜0.05.实验组与对照组survivin的表达有显著差异.新生鼠各组经SNK法比较,对照组与实验1组之间的survivin表达差异无显著性(P＞0.05);对照组与实验2组之间的差异有显著性(P＜0.05).结论:氟使新生鼠survivin蛋白表达量减少,且氟浓度越高,这种抑制作用越明显,可能是氟牙症发生的一条途径.
关键词： Survivin蛋白 大鼠 氟 牙胚发育 -
β-catenin在小鼠下颌第一磨牙发育过程中的表达
目的 检测β-catenin在小鼠下颌第一磨牙牙冠形成的表达,探讨其在小鼠牙胚发育过程中的作用.方法取孕11天(E11.5)、孕13.5天(E13.5)、孕14.5天(E14.5)、孕16.5天(E16.5)、孕18.5天(E18.5)的ICR胎鼠及出生后24h、出生后3天及出生后7天(PN0、PN3、PN7)的小鼠,常规组织学处理并制备下颌第一磨牙冠状或矢状切片,用免疫组织化学实验方法检测β-catenin在下颌第一磨牙相关组织中的表达情况.结果 β-catenin在小鼠下颌第一磨牙早期发育不同阶段呈现特异性的表达模式.在E11.5,上皮层可检测到β-catenin的表达;在E13.5,β-catenin的表达集中在向下方间充质凹陷的牙蕾上皮;在E14.5,在内釉上皮层及釉结节可以检测到β-catenin的强阳性表达;在E16.5、E18.5,在内外釉上皮、第二釉结节及邻近上皮的成牙本质细胞层可检测到β-catenin的表达.从出生后开始,在冠方的成牙本质细胞层、成釉细胞层,以及根方邻近上皮根鞘和上皮隔的牙乳头中的成牙本质细胞层内,可观察到β-catnein的阳性表达.结论 在牙胚发育过程中,β-catenin在牙源性上皮、釉结节及成牙本质细胞、成釉细胞中强表达,与牙冠形态发育及间充质细胞向成牙本质细胞分化密切相关.
