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HCV CE2融合蛋白在家蚕杆状病毒表达系统中的表达
HCV的E2蛋白能刺激机体产生具有中和活性的抗体,其C蛋白序列在不同的型和株间具有高度保守性,是细胞免疫的主要识别位点.本研究利用家蚕杆状病毒为载体,在家蚕培养细胞和幼虫中高效表达了具有生物活性的HCVCE2融合蛋白,为今后该蛋白免疫学特性及疫苗的研究、临床诊断试剂的开发提供了参考资料.
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大鼠肝再生相关基因LRRP1的人同源基因是一种新型琥珀酸脱氢酶的亚单位编码基因
目的:应用分子生物学和生物信息学方法,寻找、克隆大鼠肝再生相关基因LRRPl的人的同源基因,阐明LRRPl基因的结构和功能,为研究肝脏再生调节的分子生物学机制奠定基础.方法:利用美国国立卫生研究院建立的核苷酸数据库(GenBank)以及相应的核苷酸序列同源性搜索分析软件(BLASTN),以大鼠的LRRPl的cDNA序列作为参照,对于人的同源性cDNA序列进行搜索分析,寻找人的LRRPl的同源基因序列.利用蛋白质一级结构序列的数据库以及相应的同源蛋白序列的搜索分析,阐明人LRRPl蛋白质一级结构与已知蛋白序列的同源性,从而根据蛋白质一级结构的相似性,对于新克隆基因进行功能方面的预测分析.应用在线软件的分析,对于人LRRPl蛋白质一级结构序列进行分析预测,分析其氨基末端序列是否具有信号肽序列,以判断人LRRPl蛋白是否是一种可以分泌表达的蛋白;同样对人LRRPl蛋白质一级结构序列进行在线软件的分析,对于人LRRPl蛋白质分子结构中的潜在的糖基化位点以及其他类型的修饰位点进行预测.结果:人的LRRPl的编码基因由480nt组成,编码产物由159aa组成.人LRRPl的蛋白质一级结构序列与人琥珀酸脱氢酶亚单位D、牛琥珀酸脱氢酶亚单位D高度同源,同源性分别为79%(126/159),78%(123/156).人LRRPl是一种分泌蛋白,在其分子结构中具有N-糖基化位点、蛋白激酶C磷酸化位点和豆蔻脂化修饰位点.结论:人LRRPl蛋白是一种新型的琥珀酸脱氢酶的亚单位编码基因.
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幽门螺杆菌cagA基因及蛋白序列多态性分析
目的:结合本实验室研究结果,充分利用NCBI的核酸和蛋白数据库中检索到的CagA基因碱基和蛋白质氨基酸序列,分析其序列特征以及与地域和疾病的相关性.方法:利用Vector NTI Suite 9.0,ClastalX(version 1.8),Phylip(version 3.5)和Treeview(version 1.61)软件对检索到的幽门螺杆菌CagA基因碱基和蛋白质氨基酸序列进行多序列比较和系统发育分析.结果:检索到可以利用的全序列44条,部分序列560条.通过44条全序列比对,相似性分析和构建系统进化树,发现CagA基因碱基和蛋白质氨基酸序列可分为具有明显地域特征的东西方两类.通过44条CagA全序列和266条C端部分序列分析,发现C端相对多变区的重复序列可分为两类:第一类为菌株共有的不连续重复序列,第二类为个别菌株特有的连续重复序列,此类重复序列包含EPIYA模体的重复.序列特征与疾病的关系分析表明,非胃癌株中包含第二类重复序列的菌株占13%(9/71),胃癌株中包含第二类重复序列的菌株占3l%(12/39),X2检验P=0.021<0.05,故可以认为胃癌株中包含第二类重复序列出现率高于非胃癌株,可以认为包含第二类重复序列的菌株与胃癌有关.结论:幽门螺杆菌CagA基因及蛋白序列多态性明显,具有东西方两个地域聚类特征,重复序列可分为两类.第二类重复序列中包含EPIYA模体的重复可能导致菌株致病性增强.
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热休克蛋白27抗细胞凋亡的分子机制
热休克蛋白(heat shock proteins, HSPs)是存在于细胞内的一种主要分子伴侣,在生理和应激条件下均能表达.它们是在结构上拥有高度保守晶体蛋白序列的一组多肽,按分子量可以分为HSP100、HSP90、 HSP70、HSP60和分子量为20 000~30 000的小分子量HSPs(small HSPs,sHSPs)、泛肽等几个亚家族.HSP25/27(啮齿动物25 000, 人类27 000)是sHSPs亚家族中的重要一员, 参与调节细胞的增殖、分化和细胞凋亡的信号转导等,具有重要的生物学功能.
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吉林省流行麻疹野病毒的核蛋白基因特征
麻疹是由副粘病毒科麻疹病毒属的麻疹病毒引起的急性传染病[1,2].研究发现,在麻疹病毒的6个结构基因中,除了血凝素蛋白(H)以外,核蛋白(N)的基因变化较大,其中N蛋白序列的羧基端450个核苷酸的区域属于高变区.为此,我们对麻疹病毒的核蛋白基因的分子生物学进行研究,为预测和控制麻疹的发生提供科学依据.
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解聚素-金属蛋白酶家族剪切活化作用及其研究
解聚素-金属蛋白酶 (a disintegrin and metalloprotease,ADAM)又名MDC(Metalloprotease Disintegrin Cysteine-rich),是近年来发现的一类具有多个功能区的细胞膜表面糖蛋白家族,大约由800多个氨基酸残基组成.典型的ADAM蛋白其蛋白序列含保守的具有多个特征性的功能域,从N肽基端到C肽基端依次为信号肽区域、前调控区域、金属蛋白酶区域、解聚素区域、富半胱氨酸区域、上皮生长因子区域、跨膜区域和胞内区的细胞表面糖蛋白区域[1].
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TFPI-2与恶性肿瘤关系的研究进展
组织因子途径抑制物-2(tissue factor pathway inhibitor-2,TPFI-2)又称胎盘蛋白-5(placental protein 5,PP-5)和基质相关性丝氨酸蛋白酶抑制剂(matrix-associated serine protease inhibitor,MSPI),它是一种带有Kunitz型结构域的蛋白酶抑制剂,属于丝氨酸蛋白酶抑制物超家族成员.1979年,Jandial和Horne首次在双胞胎妊娠者体内发现该蛋白,将其命名为PP-5.后来研究发现PP-5和人组织因子途径抑制物(TFPI)的氨基酸顺序有很高的同源性,且两者的性质也有一定的相似性,因此终命名为组织因子途径抑制物-2(TFPI-2).1994年,Spercher等首次公布了人TFPI-2蛋白序列,但TFPI-2的立体结构迄今尚未测定.现就近年来有关TFPI-2与恶性肿瘤关系的研究进展分述如下.
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正常上皮特异性-1基因在胃癌中的表达及其临床意义
正常上皮细胞特异性-1(NES1)基因,又称人组织激肽释放酶10(KLK10)基因,是近年来新发现的一种抑癌基因[1],其编码的蛋白序列34%~42%与丝氨酸蛋白酶高度同源,在调控正常上皮细胞生长、分化等方面起一定作用.近研究还发现,NES1基因与多种肿瘤的发生有关,其表达产物对肿瘤患者的早期诊断、病情监测、预后估计、疗效评价等具有重要作用[2].有关NES1基因的研究国外已有较多报道,包括乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、白血病等[3,4].胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一,NES1基因作为一种在上皮细胞中表达的抑癌基因,其在胃癌发生、发展中的作用尚不清楚.本研究旨在通过地高辛标记的原位杂交技术,分析NES1 mRNA在胃癌前病变和不同分化程度胃癌组织中的表达及其临床意义,初步探讨NES1与胃癌发生、发展的关系.
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Stathmin调控细胞的研究进展
Stathmin蛋白是一种磷酸化蛋白,在大的组织和物种中,均广泛存在,表达于细胞质内.Stathmin在脊椎动物的进化过程中表现的极其保守,人和大鼠的Stathmin的蛋白序列中只有一个氨基酸的差别,这说明其在哺乳动物细胞中有重要的作用.
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YKL-40在肿瘤中的研究进展
YKL-40又名人类软骨糖蛋白-39(HCgp-39),一项对新生骨蛋白的研究中发现在人骨肉瘤细胞系MG63的体外培养中发现一种蛋白的大量分泌,因为其一条肽链氨基端的起始3个氨基酸:酪氨酸、赖氨酸和亮氨酸的符号分别为Y、K和L,其相对分子质量约为40 000而被称为YKL-40.1993年,报道公布了人类软骨糖蛋白的完整氨基酸序列及cDNA序列,YKL-40含383个氨基酸,编码的蛋白序列与糖基水解酶相似,基于其氨基酸序列,发现YKL-40属于哺乳动物18糖基水解酶家族的成员.YKL-40结合不同长度的壳多糖的形式类似壳多糖酶18家族,但没有壳质酶活性.
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乙型肝炎病毒前S1抗原关键表位基因分型及其与全长前S1抗原基因型的相关性
目的 明确乙型肝炎病毒(HBV)大表面蛋白前S1区(PreS1)两个重要表位在中国乙型肝炎患者群中的基因型分布,探讨两表位基因型之间及两表位基因型与PreS1全长基因型之间的相关性,确定能否根据关键表位的多肽序列判断PreS1全长基因型. 方法 从患者血清中提取HBV DNA进行PCR扩增,对扩增成功的278例样本进行DNA测序,并与GenBank中已知的HBV序列比对,确定HBV大表面蛋白PreS1的两个关键表位(第21 ~ 47号氨基酸表位和第94 ~ 117号氨基酸表位,分别简称为P21表位和P94表位)基因型及PreS1全长基因型,并对3组基因分型结果进行一致性分析.一致性检验采用Kappa分析. 结果 成功测序232例样本.根据P21表位蛋白序列的分型结果为:C基因型201例,B基因型23例,基因型不确定8例.根据P94表位蛋白序列的分型结果为:C基因型199例,B基因型25例,基因型不确定8例.根据PreS1全长序列的分型结果为:C基因型207例,B基因型25例.P21表位基因分型和P94表位基因分型与PreS1全长基因分型结果均高度一致,分别为96.55%和96.12%(Kappa值分别为0.841,0.826),且两表位的基因分型结果也具有很好的一致性(93.10%,Kappa值为0.718). 结论 本研究创新性地提出基于关键表位氨基酸序列的基因分型方法,验证了中国乙型肝炎患者群的HBV基因型以B和C基因型为主,且HBV PreS1关键保守表位的基因分型结果与全长基因分型结果具有高度一致性(>96%),可以采用一个或两个关键保守表位的基因分型代替全长基因分型.