首页 > 文献资料
-
结缔组织生长因子的研究进展
结缔组织生长因子(CTGF, CCN2)是一种在人体生理和病理过程中具有重要作用的分泌型蛋白质,属于立早基因CCN 家族成员中的一员.CTGF 在人类多种组织器官中广泛表达,由于其具有促进细胞增殖、介导细胞粘附、刺激细胞迁移、血管发生、软骨形成、骨形成、癌症、组织修复和纤维化等生物学功能,在生物学领域受到广泛关注.CTGF 的表达水平与许多疾病相关.
-
移植静脉平滑肌增殖与调节的研究
移植静脉术后狭窄是影响远期通畅率的重要问题.术中造成血管壁损伤所致的平滑肌细胞迁移、增殖引起内膜增生是狭窄的重要原因之一[1].
-
水通道蛋白调节剂对脑部疾病潜在的治疗价值
水通道蛋白(Aquaporins,AQPs)是一种膜蛋白,主要介导水分高效特异的跨膜转运.中枢神经系统主要表达AQP1、AQP4,参与控制脑组织水分的平衡,细胞的迁移和神经元的兴奋性.AQP4调节剂可作为脑卒中、外伤、肿瘤、感染、脑积水和癫痫新的治疗策略.在此我们就水通道蛋白在中枢神经系统的表达、作用及疾病研究中的新进展作一综述.
-
慢病毒介导的CRYAB基因沉默对骨肉瘤细胞增殖和迁移能力的影响
目的：应用慢病毒介导的RNA干扰技术，通过体外实验探讨CRYAB基因沉默对人骨肉瘤细胞MG-63增殖和迁移能力的影响。方法构建靶向CRYAB基因特异性shRNA慢病毒载体并转染人骨肉瘤细胞MG-63细胞株，利用Real-time PCR和Western Blotting技术分别从mRNA和蛋白质水平检测其表达的变化。 CCK-8法和细胞克隆实验检测沉默CRYAB基因后细胞的增殖能力，Transwell迁移实验检测细胞的迁移能力。结果 Real-time PCR和Western Blotting结果均表明，成功建立稳定转染shRNA-CRYAB骨肉瘤细胞MG-63细胞株。 CCK8实验结果显示shRNA-CRYAB病毒转染组与阴性对照组相比细胞的增殖能力显著降低（P<0.05），尤其在第四、五、六和第七天表现更明显；细胞克隆实验结果显示，shRNA-CRYAB病毒转染组和阴性对照组的克隆形成率分别为5.2%和26.0%，具有显著性差异（P<0.05）。 Transwell迁移实验结果显示， shRNA-CRYAB病毒转染组的细胞迁移率明显低于阴性对照组（P<0.01）。结论 shRNA-CRYAB慢病毒干扰载体能有效抑制CRYAB基因在人骨肉瘤细胞MG-63中表达，进而抑制细胞增殖和迁移。
-
cxcr2基因修饰小鼠骨髓间充质干细胞的构建与鉴定
目的 构建小鼠CXC型趋化因子受体2(CXCR2)基因cxcr2过表达的骨髓间充质干细胞(Bone marrow mes-enchymal stem cell,BMSC)并进行鉴定.方法 全骨髓贴壁法分离培养小鼠BMSC,采用流式细胞术检测干细胞抗原1(stem cell antigen-1,SCA-1)、CD44、CD43、CD45、IA/IE表达率,并诱导成骨分化.以含有小鼠cxcr2的质粒为模版进行PCR扩增,将获得的cxcr2克隆到慢病毒载体,命名为pLenti-cxcr2-GZ;将其与慢病毒包装质粒共转染HEK-293T细胞,收获慢病毒后,通过离心法感染BMSC,经过1μg/mL zeocin压力选择建立了稳定表达CXCR2的小鼠BMSC(CXCR2-BMSC).采用流式细胞术和RT-PCR分别检测其CXCR2蛋白和mRNA表达水平,Transwell趋化实验检测其迁移能力.结果 90％以上的第3代BMSC表达CD44、SCA-1,几乎不表达IA/IE、CD34、CD45,且成功诱导成骨分化.菌液PCR、质粒双酶切后,琼脂糖凝胶电泳鉴定结果得到特异、大小正确的条带及测序鉴定正确,表明成功构建了pLenti-cxcr2-GZ表达质粒.流式细胞术和RT-PCR结果显示,CXCR2-BMSC的CXCR2蛋白和mRNA表达水平均明显高于对照组BMSC,差异有统计学意义(P<0.001).Transwell结果显示,CXCR2-BMSC迁移能力高于对照组BMSC,差异有统计学意义(P<0.01).结论 利用慢病毒系统成功构建了稳定表达CXCR2的BM-SC,cxcr2基因修饰BMSC后可明显增加BMSC的迁移能力.
关键词： CXC型趋化因子受体2 小鼠 骨髓间充质干细胞 细胞迁移 -
CCR5在乙肝病毒感染中有重要作用
在人类中，乙肝病毒（ HBV）是普遍也是主要导致肝病的传染性病原体。之前的调查研究确认了长期乙肝病毒感染的患者不能将HBV完全从肝细胞清除。形成长期感染的主要机制尚未被阐明。然而研究者相信，和能够成功清除HBV感染的患者相比，那些患者基因和免疫参数的不同，可能是长期感染的原因。有研究证明，趋化因子在调节免疫细胞迁移和活化中有重要作用，并在抗HBV的全面免疫应答中是至关重要的。 RANTES、MIP－1a和 MIP－1b是重要的CC 趋化因子，通过 CC 趋化因子受体5（ CCR5）发挥作用。几种免疫效应细胞表达这种受体，包括NK细胞、T淋巴细胞、吞噬细胞，在抗病毒（包括HBV）的免疫应答中，对调节免疫细胞的活化和迁移都有重要作用。因此，它的表达或功能的变化可能是与抗HBV免疫应答减弱有关。另外，有研究确定，外显子1中一个32碱基对缺失（Δ32）以及CCR5基因启动子区的3种多态性导致分子量的下调。之前的研究表明， CCR5的表达在乙肝中有所改变，但是在这个疾病中，变异的CCR5（Δ32）和CCR5启动子多态性的作用还有争议。本文着重描述了近期关于CCR5在免疫细胞的表达状态以及CCR5启动子多态性和感染HBV患者之间的关系。
-
E47蛋白在KRasG12V介导肿瘤细胞迁移中的作用
目的 探讨E47蛋白在KRasG12V介导肿瘤细胞迁移中的作用.方法 在人非小细胞肺癌H1299细胞中,利用慢病毒感染技术过表达Vector、E47、KRasG12V以及过表达KRasG12V并且同时敲低E47的四株稳定细胞系;然后收集细胞,通过Western blot检测E47和Ras等相关蛋白的表达,同时利用Transwell小室的方法检测细胞的迁移能力.结果 原癌基因Ras的热点突变KRasG12V能够显著上调E47蛋白的表达且不调控其mRNA水平,同时上调Twistl蛋白的表达,并且细胞的迁移能力明显增强.但在表达KRasG12V基础上敲低E47蛋白后,细胞的迁移能力明显减弱,说明E47蛋白在原癌基因Ras的热点突变KRasG12V介导的肿瘤细胞的迁移过程中起着关键作用.结论 探讨了Ras信号通路促进肿瘤细胞迁移的一种新机制,为治疗KRasG12V介导的非小细胞肺癌提供了新的药物靶点.
-
慢病毒介导的αB-晶状体蛋白基因沉默对胃癌细胞SGC-7901增殖和迁移能力的影响
目的 应用慢病毒转染技术研究αB-晶状体蛋白(CRYAB)基因沉默对人胃癌SGC-7901细胞增殖和迁移能力的影响.方法 构建CRYAB慢病毒载体转染人胃癌细胞株SGC-7901,获得稳定转染的细胞株,制备空载体作为阴性对照组(sh-ctrl组),实验组为CRYAB病毒转染组(sh-CRYAB组).提取总RNA和蛋白,应用荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测CRYAB的表达,应用CCK-8、Transwell和细胞划痕实验分别检测CRYAB基因沉默后细胞增殖和迁移能力的变化.结果 慢病毒转染SGC-7901细胞后,CRYAB mRNA及蛋白水平显著降低(P＜0.01,P＜0.001),表明成功构建了稳定转染的CRYAB-shRNA胃癌细胞株.与sh-ctrl组比较,sh-CRYAB组细胞的增殖能力在第4天、第5天显著降低(P＜ 0.05,P＜0.01),sh-CRYAB组细胞迁移率显著降低(P＜0.01).结论 CRYAB表达沉默可降低胃癌细胞的增殖和迁移能力,CRYAB有望成为胃癌基因治疗的新靶点.
关键词： αB-晶状体蛋白基因 慢病毒 细胞增殖 细胞迁移 胃癌 -
2,2,6,6-四甲基-3-烯哌啶氮氧自由基鱼藤酮肟酯体外抗肿瘤作用
目的 研究2,2,6,6-四甲基-3-烯哌啶氮氧自由基鱼藤酮肟酯(PNR)体外抗肿瘤作用.方法 用磺酰罗丹明B(SRB)法检测PNR对肿瘤细胞增殖能力的影响;用流式细胞术检测PNR对Tea8113细胞周期的影响;用Transwell迁移法观察PNR对Tca8113细胞迁移能力的影响;用4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)荧光染色法观察Tca8113细胞凋亡形态.结果 PNR对Tca8113、A549、HepG 2、BCG 823和EJ等人癌细胞均有增殖抑制作用.PNR在0.8～ 12.8μg/mL剂量范围内浓度、时间依赖性地抑制A549、HepG 2和BCG 823细胞的生长.2～7 μg/mL明显抑制Tca8113和EJ细胞生长,量效关系明显,对Tca8113和EJ细胞抑制作用在24 h已达高峰.综合比较,PNR对Tca8113细胞的抑制作用强.PNR还明显抑制Tca8113细胞的迁移活性,阻止Tca8113细胞于S期,减少G1期细胞比例,并能明显诱导Tca8113细胞凋亡.结论 PNR对多种肿瘤细胞的生长有明显抑制作用,对Tca8113细胞的作用强,并能抑制其迁移,诱导其凋亡.
-
微小RNA-320a通过靶向FoxM1调控肝癌细胞迁移
目的：探讨微小RNA-320a (miR-320a)在肝癌细胞中对癌基因FoxM1的靶向调控作用以及对肝癌细胞迁移能力的影响，为肝癌治疗提供新的靶点。方法通过信息学工具网站http：//www.microRNA.org找到可能靶向调控FoxM1表达的微小RNA；利用蛋白印记和双荧光素酶报告基因试验验证miR-320a对FoxM1的调控作用；采用Transwell小室分析miR-320a和FoxM1对肝癌细胞迁移的影响。结果信息学分析表明，miR-320a在FoxM1的3'端非翻译区存在2个潜在结合位点。蛋白印迹实验显示miR-320a降低FoxM1在肝癌细胞中的蛋白水平，双荧光素酶报告基因试验显示miR-320a可以调控FoxM1表达。miR-320a类似物对FoxM1表达有下调作用（P<0.01），miR-320a抑制物对FoxM1表达有上调作用（P<0.05）。Transwell试验表明miR-320a类似物可抑制肝癌细胞株Huh7、HCC-LM3的迁移能力，miR-320a抑制物可增加Huh7、HCC-LM3的迁移能力。当使用小干扰RNA下调FoxM1在这些细胞株中的表达后，miR-320a类似物和miR-320a抑制物对肝癌细胞迁移能力的调控作用明显减弱。结论 miR-320a有抑制肝癌细胞迁移的作用，这种抑制作用是通过靶向调控癌基因FoxM1来实现的。
关键词： 肝癌 微小RNA-320a FOXM1 细胞迁移 -
新西兰兔间盘再生机制探讨
目的 观察并分析新西兰白兔椎间盘老化进程.方法 选择取32只雌雄各半新西兰白兔,按年龄分为2组:A组均为3月龄新西兰白兔;B组均为9月龄新西兰白兔.用抗BrdU单标抗体以及其它代表分化的标记物抗体进行双标免疫组化反应检测.结果 不同年龄组新西兰白兔均检测到细胞增殖从niche区域向纤维环和椎间盘内部逐渐迁移.niche位于细胞似乎在椎间盘区域发挥了一定的作用,不止在幼年的新西兰白兔模型上可以发现,在成年的新西兰白兔模型上也可以发现.结论 本研究结果表明支持祖细胞从干细胞niche位向椎间盘区域迁移,祖细胞可能对成年哺乳动物椎间盘再生起到一定的作用.
-
MiR-106b 对食管癌 KYSE150细胞的生长及细胞上皮间质转化的影响
目的：研究微小 RNA106b（miR-106b）对食管癌 KYSE150细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化（Epi-thelial-Mesenchymal Transition，EMT）的影响，为临床治疗食管癌提供新的理论依据。方法用 miR-106b 慢病毒转染 KYSE150细胞，实验分为3组：control 组（未转染 miR-106b 的 KYSE150细胞）、miR-NC 组（转染随机序列）和 miR-106b 组（转染 miR-106b 的 KYSE150的细胞）。采用实时荧光定量聚合酶联反应（qRT-PCR）和免疫印迹（Western Blot）检测 miR-106b 和 EMT 的相关标记物 E-钙黏蛋白（E-Cadherin）、神经型钙黏蛋白（N-Cadherin）的表达情况，四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT 法）检测细胞的增殖能力，划痕实验检测细胞的迁移能力， Transwell 方法检测细胞的侵袭能力。结果慢病毒稳定转染 miR-106b 后，食管癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力均增强（P ＜0．05）；qRT-PCR 与 Western blot 检测显示 miR-106b 组 E-Cadherin 表达较 miR-NC 组、control 组明显降低（P ＜0．05）；N-Cadherin 表达明显升高（P ＜0．05）。结论 miR-106b 能够促进食管癌细胞的增殖、迁移和侵袭，同时能促进上皮间质的转化。
-
微泡联合不同机械指数超声辐照对结肠癌细胞超微结构及迁移运动的影响
目的 探讨微泡联合不同机械指数超声辐照对结肠癌细胞超微结构及迁移运动的影响.方法 采用实验研究方法.体外培养结肠癌Lovo细胞,分为4组:细胞未做任何处理作为对照,设为A组;细胞采用微泡+不同机械指数超声辐照处理(机械指数分别为0.20、0.80及1.45),分别设为B、C、D组.采用激光共聚焦显微镜观察各组细胞超微结构的变化.采用Millicell-PCF培养小室法观察各组细胞迁移运动.正态分布的计量资料以(x)±s表示.多组间比较采用单因素方差分析.组间两两比较采用t检验.结果 (1)微泡联合不同机械指数超声辐照对结肠癌Lovo细胞超微结构的影响:A组结肠癌Lovo细胞核大、细胞质少、排列整齐,核周边呈锯齿状或有多个凹凸,核内常染色质扭曲,核周隙扩张,局部呈大泡状,线粒体相伴随散布于细胞质中,线粒体发育正常,线粒体嵴清晰.B组结肠癌Lovo细胞核大,形态尚规则,核仁明显边集,异色质多,内质网扩张,线粒体发育正常,线粒体嵴清晰.C组结肠癌Lovo细胞胞核间隙增宽,细胞核异形并出现核固缩,染色质浓缩.粗面内质网少量残存或扩张明显,离散成不同片段和大小泡.细胞质出现大量空泡样变,线粒体嵴数量减少.D组结肠癌Lovo细胞核增大,形态不规则,核仁明显边集,异色质更多,内质网扩张明显,线粒体较少,面积明显增大,呈肿胀形,部分完全空泡化,线粒体嵴稀少,排列紊乱或断裂,甚至消失.(2)微泡联合不同机械指数超声辐照对结肠癌Lovo细胞迁移运动的影响:Millicell-PCF小室法检测结果显示:A、B、C、D组结肠癌Lovo细胞迁移数目分别为(63±7)个、(61±4)个、(21±3)个、(19±5)个,4组比较,差异有统计学意义(F=55.040,P＜0.05).A组与B组比较,差异无统计学意义(t=1.571,P＞0.05).A组分别与C组和D组比较,差异均有统计学意义(t=7.861,10.652,P＜0.05).B组分别与C组和D组比较,差异均有统计学意义(t=7.161,10.453,P＜0.05).C组和D组比较,差异无统计学意义(t=2.013,P＞0.05).结论 微泡联合高机械指数超声辐照能使肿瘤细胞发生超微结构的改变,导致肿瘤细胞发生变性和死亡,抑制肿瘤细胞的迁移.
-
碱性成纤维细胞生长因子促进人内皮细胞αv整合素及MMP-1表达的研究
创伤修复是体内多种因子和细胞参与的复杂过程,碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)可影响创伤修复的整个过程,深入了解其作用机制有重要意义.笔者通过研究经bFGF刺激后人脐静脉内皮细胞(HUVEC)αv整合素表达及基质金属蛋白酶-1(MMP-1)分泌的情况,从而分析bFGF促进内皮细胞迁移、血管新生的可能机制,为进一步研究bFGF促进创伤修复作用提供依据.
-
两种生长因子联合应用对大鼠缺血皮瓣成活的影响
血管内皮生长因子(VEGF)可调节血管生长中的内皮细胞外基质溶解和内皮细胞迁移、增生及管腔形成.碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)能够诱导内皮细胞萌芽、增殖,增加血管通透性.二者按一定方式联合使用能否起到促血管生长的协同作用?为此,笔者将二者联合应用,观察其对大鼠缺血皮瓣血供恢复及血管重建的影响.
-
成纤维细胞与皮肤替代物的研究与应用
现代观点认为,皮肤创面修复是一复杂而有序的病理过程,是细胞之间、细胞与细胞外基质(ECM)及细胞因子间相互影响和协同作用的结果,涉及炎症反应,细胞迁移、增殖和分化,血管、神经形成及ECM的合成和重塑.成纤维细胞是参与修复过程的主要细胞,在一定程度上决定创面修复的时间和质量[1].本文就成纤维细胞在创伤修复中的生物学作用及其在皮肤替代物研究中的应用予以综述.
-
基质金属蛋白酶在皮肤创面愈合中的作用
基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)为一特异的酶家族,其成员均为锌依赖性肽链内切酶,主要功能为降解细胞外基质(extracellular matrix,ECM).经MMPs达到ECM的可控性降解,对不同情况下的组织生理病理变化,如发育组织的形态形成、组织修复、血管生长、以及细胞脱离和迁移等都起着重要作用.皮肤创面愈合过程中MMPs家族主要参与其中如下反应:(1)去除失活组织;(2)角朊细胞迁移;(3)血管再生;(4)结缔组织再塑形;(5)某些生长因子的活生调节.
-
大鼠浅Ⅱ度烫伤创面表皮生长因子受体的表达
浅Ⅱ度烫伤创面愈合主要涉及表皮角质细胞迁移、增殖和分化.生长因子等多种因素调控着上皮细胞的生物学行为,从而完成创面修复,其中以表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)尤为重要.EGF是表皮角质细胞的化学性趋化因子和特异性促有丝分裂原,必须通过与相应受体--表皮生长因子受体(EGFR)结合,才能在愈合过程中发挥其生物学活性.目前关于创面愈合过程中内源性EGF表达水平及其促愈作用的报道较多,但关于内源性EGFR表达水平的研究却鲜见报道.
-
Sema3A-Fc真核表达载体构建及诱导少突胶质细胞祖细胞迁移作用观察
目的 构建真核表达载体pIGSema3A-Fc,并观察Sema3A-Fc融合蛋白对少突胶质细胞祖细胞(OPCs)迁移的作用.方法 运用DNA重组技术自原核表达载体上将鸡来源的Sema3A基因克隆到真核表达载体pIGIsG1Fc上,并用双酶切、测序法进行鉴定.采用脂质体法转染非洲绿猴肾细胞株(COS-7)细胞进行融合蛋白表达,培养3天后提取上清液,经蛋白A亲和纯化,Western blotting进行鉴定.利用插入式细胞迁移小室(millicell-PCF)细胞迁移仓观察其对OPCs细胞迁移的诱导作用.结果 重组质粒双酶切产生了2.24kb目的 片段及5.7kb载体片段.测序证实构建的Sema3A膜外区与Sema3A-Fc cDNA阅读框完整,连接部位序列正确;Western blotting证实有Sema3A-Fc融合蛋白表达.迁移试验证明其对少突胶质细胞祖细胞迁移具有推斥作用.结论 成功构建了Sema3A-Fc真核表达载体,并使有生物学活性的Sema3A-Fc融合蛋白在COS-7细胞上获得了稳定表达,为进一步研究OPCs细胞定向迁移奠定了基础.
关键词： Sema3A-Fc融合蛋白 真核表达 细胞迁移 -
问题3：创面的皮肤张力会影响创面愈合吗？
解答：临床医生的经验是，创面的张力会影响创面愈合，因此，为保证缝合创面的良好愈合，需尽量减少缝合的张力。已有的研究表明，创面周围皮肤组织张力对于创面愈合有显著影响。组织修复细胞的微管、微丝系统会趋向局部组织张力线的方向，从而影响到创面收缩及细胞迁移的方向。因此，在创面局部处理时，应借助包扎的手法或器械，尽量降低周围皮肤组织的离心张力，从而有利于周围皮肤组织向创面中心方向扩展。
