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NOD/SCID孕鼠淋巴细胞表型检测和NK细胞活性分析
目的观察NOD/SCID小鼠免疫状况和生育力特征,并分析NK细胞亚群对同基因交配组合NOD/SCID×NOD/SCID妊娠结局的影响.方法采用流式细胞术对未孕和孕13.5 d的NOD/SCID小鼠进行淋巴细胞表型分析,并系统地观察和比较NOD/SCID×NOD/SCID和BALB/c×BALB/c小鼠的生育力特征.分别采用多聚次黄苷酸-胞苷酸(polyinosinic-polycytidylic acid,poly I:C)或抗asialoGM1单抗(anti-asialo GM1)刺激或抑制NK细胞活性,并分别观察这些因素对妊娠结局的影响.结果 与对照组NOD/SCID小鼠相比,poly I:C处理组NOD/SCID×NOD/SCID小鼠平均每窝产仔数增多,而注射抗asialo GM1单抗则使胚胎吸收率增高,进而平均每窝产仔数显著减少.结论在NOD/SCID小鼠孕期母-胎界面保持适当水平的NK细胞活性对妊娠结局有利.
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TLR3参与poly(I-C)所致流产的作用
目的研究Toll样受体3(toll-like receptor 3,TLR3)在poly(I-C)诱发小鼠流产中的潜在作用.方法多聚次黄苷酸-胞苷酸[polyinosinic-polycytidylic acid,poly(I-C)]是一种双链RNA,腹腔注射时能够诱发小鼠流产.在预先用单抗阻断或不阻断TLR3情况下,注射poly(I-C)建立小鼠诱发性流产模型,应用流式细胞术分别检测CD45+DX5+和DX5+CD69+细胞百分率.结果不用抗TLR3抗体预处理,单用poly(I-C)刺激同种异基因交配模型BALB/c×C57BL/6,可使CD45+DX5+和DX5+CD69+细胞百分率均显著升高.但是,应用抗TLR3抗体预处理的雌鼠,用poly(I-C)刺激时上述百分率不改变.与此相应,poly(I-C)刺激可显著增高胚胎吸收率,而抗TLR3抗体预处理可消除这种作用.结论poly(I-C)与TLR3结合可能对母-胎界面NK细胞活化至关重要,并可促进小鼠胚胎吸收.
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冠心病介入治疗患者白细胞生物标志物分析
目的:循环白细胞数量与心血管风险分层相关,冠心病患者炎症细胞表面标志物表达发生变化,然而其表达时相和在急性和稳定性冠心病中的相对变化不清。本研究目的是澄清急性心肌梗死与稳定冠心病患者在介入治疗中的白细胞数量和表面标志物表达变化规律。
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肾小管上皮细胞标志物随增龄变化及其意义
各种肾小管间质病理性损伤过程中常出现明显的细胞表型转化.细胞表型转化是指某种细胞失去其特定的表型特征而获得另一种表型特征,其中细胞表面标志物的表达变化是其重要表现之一.E-钙黏素(E-cadherin)是Ca2+依赖的细胞黏附分子,在维持肾小管上皮细胞发生、荚维持与屏障功能方面发挥着重要作用.我们于2002年2月至2004年5月检测了不同月龄大鼠肾小管上皮细胞标志物E-钙黏素随增龄的表达变化,同时检测细胞表型指标α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、细胞增殖的标志增殖性细胞核抗原(proliferative cell nuclear antigen,PCNA)与细胞外基质(Ⅰ型与Ⅲ型胶原)的表达,以期评估肾小管细胞表型转化在肾脏衰老中的作用.
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表皮干细胞表面标志物的研究进展
表皮干细胞(epidermal stem cells,ESCs)是来源于胚胎外胚层的皮肤组织的专能干细胞,可以分化成各种表皮细胞,使表皮始终处于持续的增殖、分化、脱落、消亡状态,大约每月更新一次,并且增殖与消亡的速度保持大致平衡,从而保证了皮肤形态和功能的完整性.
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含小鼠表皮干细胞的真皮替代物体内移植追踪实验
目的追踪种植于真皮替代物中的小鼠表皮干细胞(epidermal stem cells,ESCs)移植到同基因受者体内后的转归.方法在体外诱导胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES细胞)分化为ESCs,采用荧光染料Hoechst 33342染色后,种植到含有成纤维细胞的胶原-明胶海绵真皮替代物内,移植到与ES细胞同基因的129/J小鼠皮下,采用HE染色、免疫组化和Van Gieson染色等观察这些细胞的存活和分化情况.结果移植后至少3周内仍可以在荧光显微镜下清晰观察到ESCs.这些细胞能够存活并分化形成毛囊样、腺管样结构,形成与天然真皮相似的结构.在这些结构中有CD29(整合素β1亚单位)和细胞角蛋白18等表皮干细胞特异性标志物的表达.在移植后至少10周内未观察到明显排斥反应或严重毒副反应.结论ESCs能够在所构建的真皮支架内存活并分化形成毛囊样和腺管样结构,提示这些来源于ES细胞的ESCs可以作为种子细胞,用于研究制备含有皮肤附属器的真皮替代物.
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表面黏附分子 CD133在子宫内膜癌干细胞研究中的进展
1994年,Lapidot等[1]首次提出了肿瘤干细胞理论,开创了肿瘤干细胞研究的先河.研究表明,肿瘤干细胞可以来自于发生突变的成体干细胞、高度受限的祖细胞、甚至已经发生分化的细胞[2].肿瘤干细胞是一种广泛存在于肿瘤组织中,含量极少,具有自我更新、多向分化、体内致瘤能力,并且与肿瘤的转移、复发及治疗耐受有着密切关系的细胞群[3-6].随着肿瘤干细胞研究的逐渐深入,肿瘤干细胞表面标志物的确立成为实现肿瘤干细胞分选和鉴定的首要任务.
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NOD/SCID孕鼠脾脏和胎盘CD45+细胞内细胞因子的表达
目的:研究NOD/SCID孕鼠胚胎吸收率(Resorption rate,RR)与母-胎界面局部免疫状况的关系.方法:计算并比较孕13.5天同基因妊娠NOD/SCID×NOD/SCID小鼠和非免疫缺陷的BALB/c×BALB/c小鼠的RR,并采用4色流式细胞术检测NOD/SCID小鼠非孕期和孕13.5天脾脏和胎盘细胞内细胞因子的表达状况,以明确其与妊娠耐受相关的淋巴细胞功能亚群.结果:NOD/SCID小鼠的RR与对照组BALB/c小鼠相比无显著差异.与此相应,虽然能够证实NOD/SCID小鼠具有多重免疫缺陷,但是孕期母-胎界面多种功能性细胞亚群的百分率发生自发性改变.结论:NOD/SCID小鼠脾脏和胎盘某些细胞百分率的自发性改变可能对妊娠结局有利.
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CD44、CD133及EpCAM与肝癌细胞成瘤性及耐药性的相关性
目的 探讨细胞表面标志物组合与肝癌细胞的成瘤性及其对药物抗性的相关性.方法 利用目前广泛用于肝癌干细胞鉴定与分离的三种细胞表面标志物(CD44、CD133和EpCAM)对几种肝癌细胞进行表面标志物表达分析,并通过肿瘤体外移植实验研究细胞成瘤性,用抗癌药索拉非尼处理细胞,观察不同类型细胞的耐药性.结果 Hep3B、SK-Hep-1和SNU182这三株细胞具有三种截然不同的细胞表面标志物组合表达模式.CD44阳性与STAT3的激活和细胞对索拉非尼的抗性相关,而CD133/EpCAM双阳性则与低成瘤性相关.结论 该研究为肝癌干细胞的组合式分选鉴定的探索提供了新思路.
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肉瘤中肿瘤干细胞及其表面标志物的研究进展
肿瘤干细胞(CSC)不仅参与肿瘤的发生、发展和转移,而且还与肿瘤的放化疗耐密切相关,肿瘤干细胞假说也是目前学术界研究的热点;此外,CSC的细胞表面标记物能作为辨别肿瘤良恶性及其分化程度的有效手段.总结分析CSC及其细胞表面标志物在不同肉瘤类型的生物学特点,能进一步阐明其致病机制和探寻更有效的治疗策略.
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干细胞标志物CD44在胃肠道肿瘤中研究现状
目前认为,胃肠道肿瘤或是一种干细胞疾病,可由干细胞突变而来.肿瘤干细胞不仅启动肿瘤发生,且参与肿瘤细胞侵袭和转移.但肿瘤干细胞参与胃肠道肿瘤发生、侵袭和转移的分子机制尚不清楚.对肿瘤干细胞来说鉴别特异性细胞表面标志物尤为重要.某些特异性标志物或候选基因极可能在胃肠癌干细胞参与肿瘤侵袭、转移机制中起重要作用.近年来,作为胃肠道癌的标志物,CD44的研究进展较为引人注目,本文予以简介.
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乳腺癌干细胞的靶向治疗进展
早在100多年前,就有学者提出肿瘤干细胞(CSCs)假说,随着现代分子生物学及肿瘤免疫学的发展,科学家先在急性髓性白血病中成功分离并鉴定出CSCs,此后,利用特定的细胞表面标志物及流式细胞分选技术,分别在脑肿瘤、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、肝癌、结直肠癌等实体肿瘤中分选出CSCs.研究结果显示,CSCs与胚胎干细胞具有相似的生物学特点,都具有自我更新及多向分化的潜能,除此之外,CSCs还与肿瘤的发生、发展、转移、复发密切相关[1].乳腺癌干细胞(BCSCs)的研究一直是近年的热点,从乳腺癌的发生发展、侵袭转移,到抵抗放化疗的机制,BCSCs始终起着关键的作用,成为乳癌复发的根源.
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胶质瘤干细胞表面标志物的研究进展
胶质瘤干细胞(glioma stem cells,GSCs)的存在使得胶质瘤,尤其是恶性胶质瘤,临床治疗变得困难,手术、放疗及化疗等一系列传统治疗正在面临挑战.因此,寻求优于现有疗法的有效安全的分子靶向治疗是必要的.GSCs表面标志物相对于其它类型标志物更有优势是由于前者暴露在细胞表面而更容易与抗胶质瘤分子结合,从而获得特异疗效,因此表面标志物适于作为治疗靶点,为GSCs的鉴定、治疗提供便利.
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CD73在骨代谢中作用的研究进展
先天性胫骨假关节(CPT)是由于骨发育异常所致的胫骨畸形和特殊类型的骨折不愈合[1]。而实现胫骨假关节的骨性愈合和维持骨性连接则是治疗CPT 的关键。虽然目前有很多该病治疗方法的报道,使该病的治愈率得到很大改观,但其治愈率仍存在很大差异[2]。手术方法的改进虽提高了 CPT 的治愈率,但仍存在治疗失败,如假关节不愈合,骨性连接不稳定,甚至导致截肢的可能。该病的骨延迟愈合或不愈合是否与成骨因素缺陷有关仍是未知。骨愈合是一个复杂而精细的多级再生过程,成骨细胞是骨形成的主要功能细胞,在骨重塑中起着重要的作用。近有研究证明,胞外-5′—核苷酸酶(CD73)是一种影响间充质干细胞(MSCs)向成骨细胞和软骨细胞分化的调节因子,可以引导骨再生[3]。近20年来的研究表明,CD73是一个主要的间充质干细胞的细胞表面标志物,然而 CD73在细胞中的功能知之甚少。有研究表明 CD73参与间充质干细胞(MSC)分化后的循环压缩载荷[3],在细胞外腺苷的生成中也起着重要的作用。它可以通过调节核苷酸的代谢和腺苷的浓度影响成骨细胞功能[4]。本文就 CD73在骨代谢中的作用的研究进展作一综述。
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自发性流产CBA/J×DBA/2小鼠母-胎界面DX5+CD69+细胞的浸润
目的:研究DX5+CD69+细胞浸润与CBA/J×DBA/2小鼠自发性胚胎吸收的关系.方法:CBA/J×DBA/2小鼠(A组)和CBA/J×BALB/c小鼠(B组)分别用作自发性流产模型和生育力正常对照.DX5用作广泛性NK细胞标志物,CD69作为NK细胞和T细胞活化标志物.采用流式细胞术检测母-胎界面淋巴细胞中CD69+细胞百分率,DX5+CD69+细胞与DX5+细胞比率,并对细胞数量与胚胎吸收率进行线性相关回归分析.结果:A组孕13.5 d胚胎吸收率为34.1% (45/132),显著高于B组 (6.6%, 9/137; P<0.001).同时A组DX5+CD69+细胞与DX5+细胞比率 (28.1±11.9)%显著高于B组(19.5±5.7)%, (P<0.01).此外,A组DX5+CD69+与DX5+细胞比率(x)和胚胎吸收率(y)之间存在强线性相关(r=0.807, P<0.001, y=-1.157+1.278x).结论:母-胎界面过多的DX5+CD69+细胞浸润可能与CBA/J×DBA/2小鼠胚胎吸收有关.
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心脏干细胞基础研究和临床应用回顾与展望
CSCs对心脏干细胞(CardiacStemCells,CSCs)的发现打破了传统对心脏是“终分化不可再生”器官的认识.经过大量实验研究,目前已经对CSCs有了初步的认识,包括CSCs的形态特征,迁移性,具有代表性的细胞标记物,以及CSCs的分化潜能.心脏,从来都被认为是一个终分化的器官,临床上一些疾病,例如心肌梗死、心力衰竭、扩张性心肌病、病窦综合症等造成的心肌损伤都是不可逆的,临床治疗中仍不能找到有效的方法“获取”新的心肌来代替受损的心肌.
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皮肤科学基础
20120001 人原代表皮干细胞及其传代细胞生物学特性的比较/王元元(三军大大坪医院野战外科研究所皮肤科重庆市创伤愈合与组织工程研究所),杨桂红,杨涛…//第三军医大学学报.-2011,33(1).-24 ~27选择2009年5 -12月在该科医学美容门诊行包皮环切术后的包皮标本共20例,从包皮标本获得人原代表皮干细胞,利用0.25%胰蛋白酶冷消化4h获得传代细胞,利用CASY系统计数后计算细胞的黏附率,倒置相差显微镜下观察原代干细胞及传代细胞的形态学变化,观察干细胞表面标志物整合素β1和CK19,细胞分化的表面标志物CK10的表达,以及各代细胞基因组的表达差异.结果:原代干细胞的黏附率为(55.44±2.42)%,随着传代次数的增加,2代、4代及6代细胞的黏附率分别为(44.30±2.76)%,(30.95±2.24)%和(20.64±1.37)%,与原代细胞相比,差异有统计学意义(P<0.05).细胞生长融合时间随着传代次数而增加.各代细胞均表达整合素β1;原代、2代及4代细胞表达CK19,但6代细胞不表达CK19;部分6代细胞表达CK10.原代及4代细胞基因组比较结果相近,但与6代细胞结果差异较大.提示与原代干细胞相比,体外培养的人表皮干细胞在4代以后生物学特性发生改变,体外实验宜选用4代以前的细胞.