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睾丸大细胞钙化性支持细胞瘤一例
患者男,25岁.双侧睾丸肿大半年余,伴咳嗽、咳痰和发热于2005年3月入院.体检:双侧睾丸上极均触及无痛性硬肿物,大小分别约1.5 cm×1.5 cm和0.5 cm×0.2 cm,可活动,与周围组织无粘连,既往无睾丸外伤史,无体态及毛发的改变.无明显内分泌疾病症状和体征.
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睾丸大细胞钙化性支持细胞瘤一例
患者男,12岁.左侧睾丸无痛性肿大1年余,于2005年1月18日入院,右侧睾丸未见异常,亦无第二性征的异常.
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高糖诱导大鼠主动脉瓣膜间质细胞钙化的现象观察及初步研究
目的：初步探讨高糖诱导大鼠主动脉瓣膜间质细胞钙化的机制。
方法：采用细胞培养，IF鉴定，von-kossa钙化测定， Westernblot，real-time PCR等方法对高糖诱导主动脉瓣间质细胞钙化的作用机制进行初步研究。 -
探讨雷帕霉素靶向抑制mTOR对大鼠心瓣膜细胞钙化的影响及其作用机制
目的：探讨雷帕霉素靶向抑制mTOR对大鼠心瓣膜细胞钙化的影响及其作用机制。方法：体外分离大鼠心瓣膜间质细胞后培养并鉴定；细胞共分为4组：正常对照组、钙化诱导组、雷帕霉素组、钙化诱导+雷帕霉素组；采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率；采用茜素红S染色并观察钙沉积的变化，对细胞进行钙化结节计数；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组细胞中骨形成蛋白-2（bmp-2），骨钙素（osteocalcin），骨调素（osteopontin），smad同源物1（smad1）及半胱氨酸蛋白酶（caspase-3）的表达水平。结果：成功分离获得大鼠心瓣膜间质细胞；各组细胞凋亡率没有明显差异（P>0.05）；钙化诱导组细胞钙化结节数明显高于正常对照组（P<0.05）；钙化诱导组细胞钙化结节计数（0.471±0.091）较正常对照组（0.104±0.023）多，钙化诱导+雷帕霉素组细胞钙化结节计数（0.237±0.039）明显少于钙化诱导组，差异均有统计学意义（P<0.05）；钙化诱导组细胞的骨形成蛋白-2，骨钙素、smad同源物1和骨调素蛋白的表达水平明显高于正常对照组（P<0.05），钙化诱导+雷帕霉素组的骨钙素、smad同源物1和骨调素蛋白的表达水平明显低于钙化诱导组（P<0.05），但3个实验组间caspase-3蛋白表达水平差异均无统计学意义（P>0.05）。结论：mTOR抑制剂雷帕霉素通过抑制mTOR后下调其靶蛋白骨形成蛋白-2、骨钙素、smad同源物1和骨调素蛋白的表达水平，从而抑制大鼠心瓣膜细胞的钙化，即细胞钙化变缓很可能与mTOR通路被抑制有密切的关系。
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RTA-408对晚期糖基化终末产物诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化的作用及机制
目的 探讨RTA-408对晚期糖基化终末产物(AGE)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)钙化的作用及其机制.方法 体外分离培养Sprague Dawley大鼠主动脉VSMC,将传代培养至第5代的细胞按照随机数字表法分为对照组(培养2d后,更换为含牛血清蛋白的培养基继续培养5d)、AGE组(培养2d后,更换为含200 mg/L AGE的培养基继续培养5d)、实验组(使用含100 nmol/L RTA-408的培养基培养2 d后,更换为含200 mg/L AGE的培养基继续培养5d)和RTA组(使用含100 nmol/L RTA-408的培养基培养2 d后,更换为含牛血清蛋白的培养基继续培养5d).收集各组VSMC,采用偶氮胂Ⅲ法检测细胞内钙离子含量,采用Von Kossa染色法检测细胞内相对钙沉积量,采用试剂盒检测细胞内丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用Western blot检测细胞内骨桥蛋白(OPN)、碱性磷酸酶(ALP)、核因子E2相关因子2(Nrf2)和醌氧化还原酶1(NQO1)蛋白含量.结果 (1)AGE组细胞中钙离子含量高于对照组[(2.43±0.15)mmol/L比(1.23±0.09)mmol/L,P<0.01],而实验组细胞中钙离子含量[(1.62±0.18)mmol/L]低于AGE组(P<0.01).(2)AGE组细胞内相对钙沉积量高于对照组(3.64±0.50比1.00±0.12,P<0.01),而实验组细胞内相对钙沉积量(1.56±0.37)低于AGE组(P<0.01).(3)与对照组比较,AGE组MDA含量较高[(3.79±0.27)nmol/mg蛋白比(1.99±0.15)nmol/mg蛋白,P<0.01],而SOD活性较低[(308.45±14.28)U/mg蛋白比(428.58±11.00)U/mg蛋白,P<0.01];实验组MDA含量[(2.37±0.19)nmol/mg蛋白]低于AGE组(P<0.01),而SOD活性[(391.03±22.92)U/mg蛋白]高于AGE组(P<0.05).(4)AGE组OPN和ALP蛋白相对表达量均高于对照组[分别为3.06±0.21比1.00±0.07和2.89±0.29比1.00±0.10,P均<0.01];实验组OPN(1.15±0.12)和ALP(1.45±0.15)的蛋白相对表达量均低于AGE组(P均<0.01).(5)实验组Nrf2及NQO1蛋白相对表达量均高于AGE组(分别为2.37±0.17比1.17±0.09和3.91±0.18比1.05±0.08,P均<0.01).结论 RTA-408对AGE引起的大鼠主动脉VSMC钙化有保护作用,其机制可能与激活Nrf2/NQO1信号通路从而提高细胞抗氧化应激能力有关.
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血管平滑肌细胞钙化后转化类型的研究
目的：分析主动脉血管平滑肌细胞钙化后细胞转化类型。方法将第4代细胞等量随机分为实验组和对照组，给予实验组10 mmol/L的β-甘油磷酸盐进行细胞诱导，给予对照组正常DMEM培养基培养，连续培养10天，测定两组碱性磷酸酶（ALP）活性及骨钙素的含量，采用Western blot方法检测VSMCs及成骨细胞标志蛋白（骨桥蛋白）含量的差异。结果细胞诱导钙化后，细胞聚集并形成囊泡结构，实验组ALP、骨钙素含量较对照组有所增加，差异有统计学意义（P＜0.05）；Western blot显示成骨细胞标志物含量较对照组明显增加，差异有统计学意义（P＜0.05）；骨桥蛋白（osteopontin，OPN）表达逐渐增强，对照组仅有微弱表达，且随时间无明显变化，实验组OPN的表达明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论主动脉血管平滑肌细胞在钙化后会向成骨细胞转化，可为血管钙化通路、病因及治疗提供新的思路和研究机制。
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体外培养高糖、高脂喂养大鼠主动脉平滑肌细胞钙化的研究
目的 检测高糖、高脂喂养Goto-Kakizaki(GK)糖尿病大鼠主动脉平滑肌细胞(SMCs)的血管钙化指标,探讨糖尿病血管钙化的相关机制.方法 高糖、高脂喂养GK及Wistar大鼠2周,同时分离培养两组大鼠的主动脉SMCs,Wistar大鼠SMCs作为对照.通过细胞计数法观察细胞生长状况,以甲基百里香酚蓝比色法测定两组大鼠细胞层及培养上清中钙的含量,实时定量PCR检测两组细胞碱性磷酸酶(ALP)、骨桥蛋白(OPN)、核心结合因子α-1(Cbfα-1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的基因表达.结果 与Wistar大鼠SMCs相比,GK大鼠SMCs生长速度明显缓慢(F =363.392,P＜0.05);细胞层钙含量[(0.56±0.22) vs.(0.39±0.09),t=2.47,P＜0.05]明显增加,培养上清中钙含量[(0.82±0.22)vs.(1.20±0.17),t=-22.573,P＜0.05]明显减少.GK大鼠SMCs中ALP (t=12.963,P＜0.05)、OPN(t=8.305,P＜0.05)及Cbfα-1(t=10.109,P＜0.05)的基因表达增加,同时α-SMA(t=-8.219,P＜ 0.05)的基因表达减少.结论 高糖、高脂喂养的GK糖尿病大鼠的主动脉平滑肌细胞易发生钙化.
关键词： 细胞钙化 主动脉平滑肌细胞 Goto-Kakizaki大鼠 糖尿病 -
双眼视盘埋藏玻璃膜疣误诊为视神经炎1例
视盘玻璃膜疣(optic disc drusen,ODD)是发生在视盘上崩解的神经纤维轴突线粒体内非细胞钙化沉积.神经纤维的轴浆流改变和轴突变性是主要形成原因.1858年,Müller首次对ODD作了组织学描述[1],1868年,Liebrich[2]报道了第1例临床病例.本文报道我科收治的双眼视盘埋藏玻璃膜疣1例,并结合相关文献对ODD作一介绍.
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糖基化终产物对人血管平滑肌细胞表达及分泌甲状旁腺激素相关肽和血管钙化的影响
目的：观察糖基化终末产物（AGEs）对人血管平滑肌细胞表达及分泌甲状旁腺激素相关肽（PTHrP）功能的影响，探讨PTHrP影响血管平滑肌细胞钙化发生的相关机制。方法：不同浓度的AGE-BSA分别与人血管平滑肌细胞孵育相同时间后，检测各组细胞钙含量及碱性磷酸酶（ ALP）活性判断钙化程度；酶联免疫吸附法检测各组细胞PTHrP的分泌量；实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测PTHrP、核心结合因子（ cbfα1）及骨形态发生蛋白2（ BMP-2）在各组细胞中的表达量。结果：随AGEs浓度增加，细胞中的钙含量及ALP活性增加（P＜0．05），而细胞分泌的PTHrP量逐渐减少（P＜0．05），且AGEs可促进cbfα1、BMP-2及PTHrP在血管平滑肌细胞的表达，这在较高浓度组较为显著（ P＜0．05）。结论：适当浓度的晚期AGEs可影响人血管平滑肌细胞PTHrP的表达水平及分泌量，促进钙含量增加，进而有助于血管钙化的发生。
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AGE-LDL对人主动脉瓣间质细胞钙化和炎症反应的诱导作用及其机制
目的 观察糖基化终产物修饰的低密度脂蛋白(AGE-LDL)对人主动脉瓣膜间质细胞(HAVICs)钙化和炎症反应的诱导作用,并探讨其机制.方法 非CAVD瓣膜组织(non-CAVD组)取自手术治疗的主动脉瓣脱垂患者,CAVD瓣膜组织(CAVD组)取自因钙化性主动脉瓣狭窄而进行主动脉瓣膜置换术的患者.采用免疫组化法检测non-CAVD组和CAVD组中的AGE.取non-CAVD组的主动脉瓣膜组织,分离HAVICs,分为对照组、LDL组、AGE-HSA组和AGE-LDL组.对照组给予M199培养液,LDL组给予100μg/mL的LDL,AGE-HSA组给予100μg/mL的AGE-HSA,AGE-LDL组分别给予50、100、200μg/mL的AGE-LDL.取对照组和AGE-LDL组细胞培养21 d后进行茜红素染色,镜下观察细胞钙化情况.给药48 h后检测各组细胞中的细胞间黏附分子1(ICAM-1)、IL-6蛋白及细胞上清液中的IL-6、IL-8.用100μg/mL的AGE-LDL分别刺激HAVICs 0.5、1、2、4、8 h,以只加DMSO的细胞作为对照,检测HAVICs中NF-κB磷酸化水平.将HAVICs随机分为5个组,对照组给予M199培养液;LDL组给予100μg/mL的LDL;DMSO组给予含有1‰DMSO的M199培养液;AGE-LDL组给予100μg/mL的AGE-LDL;Bay11-7082组予2.5μmol/L的Bay11-7082干预30 min,然后给予100μg/mL的AGE-LDL;给药48 h后检测各组细胞中的ICAM、IL-6蛋白.结果 与对照组相比,AGE-LDL组(100μg/mL亚组)细胞中钙盐沉积明显,形成钙结节.AGE-LDL组细胞中ICAM-1、IL-6蛋白相对表达量及培养液上清中IL-6、IL-8水平均高于对照组、LDL组、AGE-HSA组,且AGE-LDL组的50μg/mL亚组、100μg/mL亚组、200μg/mL亚组ICAM-1、IL-6蛋白相对表达量及IL-6、IL-8水平也依次增高(P均<0.05).AGE-LDL可呈时间依赖性方式刺激HAVICs中的NF-κB/p65磷酸化,于作用2 h后达到峰值,4 h后开始减弱.AGE-LDL组、Bay11-7082组细胞中ICAM、IL-6蛋白相对表达量高于对照组、LDL组、DMSO组,且Bay11-7082组ICAM、IL-6蛋白相对表达量低于AGE-LDL组(P均<0.05).结论 AGE-LDL可诱导HAVICs发生钙化及炎症反应,其机制可能与NF-κB信号通路活化有关.
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淫羊藿苷对大鼠血管平滑肌细胞钙化的抑制作用
人体内的钙主要以羟基磷灰石形式存在于骨骼和牙齿中，当钙以磷酸钙的形式沉积在动脉系统时，会导致动脉钙化。钙化血管的弹性较差，钙化斑易导致血管狭窄，从而改变血管系统的血流动力学，引起高血压、中风和心肌肥厚等疾病[1-3]。
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BMP信号通路在华法林诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化中的作用
目的 探讨骨形态发生蛋白(BMP)信号通路在华法林诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)钙化中的作用.方法 体外分离培养大鼠胸主动脉VSMC,将其随机分为正常对照组、高磷组、华法林(10 μmol/L)干预组及华法林(10μmol/L)+维生素K(10 μmoL/L)干预组.对细胞进行钙含量和碱性磷酸酶(ALP)活性检测,茜素红染色检测钙结节,Western blot检测细胞中Runx2蛋白的表达变化,RT-PCR检测细胞中骨形态发生蛋白2(BMP-2)、Smad1及Runx2的表达变化.结果 茜素红染色结果显示,与正常对照组和高磷组相比,华法林干预组钙化结节明显增多;钙含量测定结果与茜素红染色结果基本一致.与正常对照组和高磷组相比,华法林干预组ALP活性明显增加(P＜0.05),Runx2 mRNA和蛋白表达水平及BMP-2、Smad1 mRNA表达明显增高(P＜0.05);与华法林干预组相比,华法林+维生素K干预组细胞钙含量、ALP活性及BMP-2、Smad1、Runx2的表达均明显降低(P＜0.05).结论 BMP信号通路参与了华法林促进的大鼠VSMC钙化,其可能的作用机制是介导了VSMC的表型转化.
关键词： 血管平滑肌肌细胞 华法林 细胞钙化 骨形态发生蛋白信号通路 -
外源性硫化氢对人脐静脉平滑肌细胞钙化的影响及其可能机制
目的 探寻外源性硫化氢对人脐静脉平滑肌细胞(HUSMC)钙化的影响及机制.方法 在成功复制HUSMC钙化模型基础上,给予硫氢化钠(NaHS)进行培养,实验分为6组(n=6):对照组、钙化组、单纯NaHS组(8.0×10-6mol/L NaHS)、钙化+NaHS高剂量组(4.0×10-5 mol/L NaHS)、钙化+NaHS中剂量组(8.0×10-6mol/L NaHS)、钙化+NaHS低剂量组(1.6×10-6 moL/L NaHS).对各组HUSMC进行Von Kossa染色、显微图像分析,并检测各组碱性磷酸酶活性、钙离子含量,荧光定量PCR法检测细胞中骨桥蛋白mRNA的表达,放射免疫法检测培养液中骨桥蛋白含量.结果 硫化氢可明显减少HUSMC钙结节的聚集生长,Yon Kossa染色显示细胞聚集处棕褐色钙结节较钙化组明显减轻,差异有统计学意义(P＜0.05);钙化+ NaHS高剂量组、钙化+NaHS中剂量组、钙化+ NaHS低剂量组钙化细胞百分比、细胞钙含量和碱性磷酸酶活性较钙化组明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05),培养液中骨桥蛋白含量及其细胞内骨桥蛋白mRNA表达均较钙化组减少,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 硫化氢可以减轻HUSMC钙化的程度,其机制可能是通过下调细胞内骨桥蛋白mRNA的表达,进而导致骨桥蛋白生成减少而实现的.
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钙调神经磷酸酶对钙化细胞Ⅰ型三磷酸肌醇受体表达的影响
目的 探讨大鼠血管平滑肌细胞钙化过程中钙调神经磷酸酶对Ⅰ型三磷酸肌醇受体蛋白和mRNA表达的影响.方法 大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞经传代培养后随机分为对照组、钙化组和环孢素A组,采用磷酸二氢钠诱导大鼠动脉血管平滑肌细胞钙化.应用免疫印迹法及实时荧光定量RT-PCR法测定钙调神经磷酸酶B亚基、Ⅰ型三磷酸肌醇受体的表达变化,同时测定Ca2+浓度及碱性磷酸酶、钙调神经磷酸酶活性.结果 与对照组比较,钙化组钙调神经磷酸酶B亚基、Ⅰ型三磷酸肌醇受体蛋白和mRNA表达显著增加(P＜0.01)；与钙化组比较,环孢素A组钙调神经磷酸酶B亚基、Ⅰ型三磷酸肌醇受体蛋白和mRNA表达显著降低(P＜0.01).钙化组Ca2+浓度、钙调神经磷酸酶活性、碱性磷酸酶活性较对照组显著增高(P＜0.01)；环孢素A组碱性磷酸酶活性、Ca2+浓度较钙化组显著增加(P ＜0.05或P＜0.01),钙调神经磷酸酶活性较钙化组显著降低(P＜0.01).结论 钙调神经磷酸酶能够增强钙化细胞中Ⅰ型三磷酸肌醇受体mRNA和蛋白的表达.
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糖基化终末产物促进大鼠血管平滑肌细胞钙化
目的 观察糖基化终末产物对体外培养的血管平滑肌细胞钙化的影响.方法 在含10 mmol/Lβ-甘油磷酸钠培养液中加入不同浓度(0、50、100、200 mg/L和400 mg/L)的糖基化终末产物与大鼠血管平滑肌细胞孵育不同时间.采用磷酸苯二钠法检测碱性磷酸酶活性,甲-酚酞络合酮方法测定钙含量,实时定量逆转录聚合酶链反应检测成骨细胞特异性核心结合因子、碱性磷酸酶以及骨桥蛋白基因表达,蛋白免疫印迹检测成骨细胞特异性核心结合因子及骨桥蛋白蛋白表达.结果 与对照组相比,糖基化终末产物随作用时间延长和浓度增加,细胞钙含量增加(P<0.05),升高碱性磷酸酶活性和基因表达(P<0.05),促进成骨细胞特异性核心结合因子及骨桥蛋白基因及蛋白表达(P<0.01).结论 糖基化终末产物可促进体外培养的大鼠血管平滑肌细胞钙化.
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TLR4／NK－κB信号介导氧化型低密度脂蛋白诱导的人血管平滑肌细胞钙化
目的：探讨Toll样受体4（TLR4）在氧化型低密度脂蛋白（Ox－LDL）诱导的血管平滑肌细胞钙化中的作用。方法：用Ox－LDL诱导体外培养的人血管平滑肌细胞钙化，real－time PCR和Western blot检测TLR4，血管平滑肌细胞收缩型蛋白SMA和SM22α，以及成骨样分化相关蛋白Msx2、osterix和BMP2的表达水平，细胞免疫荧光检测细胞核内NK－κB的表达水平。结果：Ox－LDL可促进TLR4的表达上调以及激活其下游分子NK－κB向细胞核内转移。 TLR4 siRNA转染细胞可减轻Ox－LDL诱导的血管平滑肌细胞钙化，抑制血管平滑肌细胞成骨样分化相关蛋白Msx2、osterix和BMP2的表达水平，升高收缩型蛋白SMA和SM22α的表达水平，阻断NK－κB核内转移。另外，NK－κB抑制剂PDTC可抑制Ox－LDL诱导的血管平滑肌细胞钙化。结论：TLR4通过激活NK－κB促进Ox－LDL诱导的血管平滑肌细胞钙化，提示TLR4可作为干预血管钙化的潜在靶点。
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高磷对牛血管平滑肌细胞钙化及其骨桥素分泌的影响
血管钙化是一种类似于骨和软骨形成过程,具有可调节性,其中高磷具有促进血管钙化发生和进展的作用[1,2],然而,其机制尚未完全清楚.为此,我们进行牛血管平滑肌细胞体外培养,观察不同磷浓度对钙沉积影响,并探讨其与骨桥素(OPN)的关系.
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大鼠钙化血管平滑肌细胞IP3RⅠ表达的变化
目的 检测大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化过程中1,4,5 三磷酸肌醇受体Ⅰ型(IP3R Ⅰ)表达水平的变化.方法 采用磷酸二氢钠(NaH2PO4)诱导大鼠动脉VSMCs钙化,应用Western blot法及实时荧光定量反转录PCR法测定细胞钙化时IP3RⅠ表达的变化.结果 在VSMCs 钙化时IP3RⅠ表达水平明显增高(P<0.01).结论 VSMCs的IP3RⅠ表达增强可能参与了细胞钙化的发生.
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引导牙周组织再生膜根间隙中细胞钙化与膜放置时间的关系
目的:研究在引导牙周组织再生技术中膜根间隙中再生组织钙化与时间的关系,为不可吸收膜放置时间和可吸收膜的吸收时间提供依据.方法:4只狗的24颗牙用于实验,人工形成牙周骨缺损,国产e-PTFE膜覆盖,分别在2、4、8周刮取膜根间隙的再生组织进行细胞培养及稀释法克隆化,28 d后进行钙化染色,对不同时间组的钙化数量进行分析;结果:2周和4周时钙化细胞的量基本相同(P＞0.05);而2周和4周的钙化细胞数量远大于8周(P＜0.01).结论:不可吸收膜的取出时间和可吸收膜开始降解时间不应少于6周,4周时将膜取出,可能会对组织再生产生一定的影响.
