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李斯特菌选择性培养基的研究
单增李斯特菌是一种重要的食源性致病菌,目前李斯特菌受到了越来越多的关注,虽然近些年来应用分子生物学方法对李斯特菌进行诊断的技术不断增多,但传统的细菌分离培养仍然是李斯特菌实验室检测的金标准.本文对各种李斯特菌选择培养基的原理进行阐述,并且比较其分离效果及不足之处,为发展新的分离培养方法和研制新的选择培养基提供了基础.
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离子色谱的食品饮料分析中的几点应用
作为近20年来发展快的分析技术之一,如今离子色谱的应用已经渗透到众多领域.本论述了离子色谱在分析食品饮料中无机阴离子和阳离子、有机酸、碳水化合物和生物胺等的常见应用.离子色谱自70年代问世以来发展迅速.80年代前,离子色谱仅限用于离子交换分离和电导检测,分析简单的阴阳离子,目前发展成为多种分离方法和检测方法,灵敏的电化学和光学检测器,梯度泵和耐腐蚀的全速系统,微机处理系统和智能系统.与传统的分析方法相比,离子色谱法突出的优点是同时分离多组分,样品前处理简单,因此成为分析食品和饮料中阴阳离子、阴阳离子、有机酸、胺、醇类和氨基酸等的较好方法.
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沙棘抗氧化活性物质提取方法的初步研究
近年来广泛栽植于黄土高原及三北地区,用于减少水土流失、恢复植被、改善生态环境的沙棘是一种兼具生态效益、经济效益和社会效益的优良树种,其籽主要用于提取沙棘油,其活性成分的提取分离方法普遍采用萃取法与超声提取这两种方法.
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贝(甲)壳类海产品中致病性气单胞菌检测方法的比较
为提高贝(甲)壳类海产品中致病性气单胞菌检出率,对直接分离和增菌分离法两种方法进行了比较,结果表明直接分离法用于致病性气单胞菌检测时,受温度影响较为明显,提示夏、秋季宜用直接分离法。冬、春季宜用增菌分离法。
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HPLC测定不同产地黄芩中黄酮化合物的含量
黄芩为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根,具有清热燥湿,泻火解毒,止血安胎等作用[1].黄芩中含有多种黄酮类化合物,其中含量较高的成分有黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素等.2005年版药典一部只对黄芩中黄芩苷进行含量测定,由于黄芩中苷类与其苷元在极性和含量上的差异,很难用单一的方法使几种成分都达到满意的分离和测定效果.本研究采用2种分离方法并用HPLC[2-4]分析了不同产地黄芩中黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的含量,以为有效控制生药质量及合理利用该药用植物资源提供参考.
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丙肝患者外周血单个核细胞分离方法的改进
据陈良标等报道,丙型肝炎病毒(HCV)可感染慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞并在其中复制.但从外周血中提取单个核细胞(PBMC)进行免疫组化染色时,常有血小板的干扰,影响观察结果;另外,在检测HCV抗原(HCV-Ag)过程中,还存在血浆中HCV对PBMC的污染问题.为此,我们对分离方法进行了改进取得了满意的效果,现介绍如下.
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两种粉螨分离方法的对比研究
目的比较电热集螨法和振筛分离法分离粉螨的效果.方法以25 W和60 W灯泡作电热集螨器的热源,分别收集3、6、9、12、15、18、21和24 h 8个时间段分离出的螨;分别收集5、10、15、20、25和30 min 6个时间段振筛分离法分离出的螨.结果25 W和60 W电热集螨器24 h集螨数分别为(11642.74±4 155.62)只/份和(19 824.57±2 168.33)只/份,差异有非常显著性(t=9.56,P<0.01);60 W灯泡作为电热集螨器的热源,分离30份样本,前2个时间段(3、6 h)分离螨数为528 131只,占24 h获取螨数(594 737只)的88.80%;以振筛分离法分离30份样本,前4个时间段(5、10、15和20 min)分离出螨575 563只,占30 min所获螨数(587 820只)的97.91%;30份样本以60 W灯泡为电热集螨器热源分离6 h获螨(17 604.37±2 826.54)只/份,30份样本采用振筛分离法分离20 min获螨(19 185.43±3 287.62)只/份,差异无显著性(t=2.00,P>0.05).结论电热集螨器以60 W灯泡为热源分离6 h较适宜,振筛分离法以20 min为适宜分离时间;两种方法收集螨的数量差异无显著性,但振筛分离法耗时短、收集到的螨纯度高,适宜粉螨抗原制备过程中使用.
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人骨髓间充质干细胞分离鉴定方法的改进
本研究的目的是建立一种基于临床移植需要的分离、培养、鉴定人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stemcells,MSC)的方法,为配合造血干细胞移植的临床应用提供实验基础.采用Percoll分离液(1.073/gml)从新鲜成人骨髓穿刺液中分离MSC,应用贴壁筛选法传代培养,流式细胞仪检测细胞表面抗原,成骨诱导体系(地塞米松0.1 μmol/L、β-甘油磷酸钠10 mmol/L、抗坏血酸磷酸盐50μmol/L)及脂肪诱导体系(地塞米松1μmol/L、牛胰岛素5 mg/L、1-甲基-3-异丁基-黄嘌呤0.5 mmol/L、消炎痛60μmol/L)分别诱导MSC定向分化,通过细胞形态观察及免疫化学染色进行鉴定.结果表明:从成人骨髓液中分离培养出MSC,稳定表达CD73、CD105、CD166,不表达CD34、CD45.定向诱导的成骨细胞表达碱性磷酸酶活性,脂肪细胞内出现明显的脂滴.结论:采用密度梯度离心联合贴壁筛选法并通过流式细胞术检测及定向诱导分化,能够从成人骨髓液中分离出MSC,并完成细胞表型及多向分化潜能的初步鉴定.本操作方案具有一定的临床应用价值.
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人羊膜上皮细胞分离的正交法研究
目的:研究人羊膜上皮细胞(hAECs)分离的适宜条件.方法:采用正交试验的方法.以L9(34)正交表安排影响hAECs分离的几个主要因素.每组实验所得细胞计数并培养24h后,收集悬浮细胞计算细胞贴壁率.培养7d计算扩增细胞数,以此为指标分析各因素对hAECs分离的影响.结果:胰蛋白酶的浓度及消化次数对细胞得量均有显著影响(P<0.05).结论:应用正交试验法得出hAECs分离的适宜条件为:胰蛋白酶液与羊膜组织体积比为1:1,胰蛋白酶浓度0.25%,消化时间10min/time,消化4次.
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增菌法分离嗜肺军团菌的研究及应用
嗜肺军团菌(Legionella pneumophila, LP)常引起人类军团菌肺炎散发和暴发.在临床诊断和流行病学调查中,病原体LP的分离较重要. 国内外常用分离方法[1,2]操作过程复杂、酸预处理抑制LP生长、标本中含菌量少、杂菌抑制等诸因素导致阳性检出率低.本实验建立的增菌法分离LP和研制的选择性增菌培养基(ABYE),可提高阳性分离率和减少常规分离方法实验步骤.
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色谱技术及其相关知识
色谱技术属于分离科学的范畴.分离科学中的各种分离方法,按其原理可分为"物理分离"和"化学分离"两大类."物理分离"是以被分离对象所具有的不同物理性质为依据,采用合适的物理手段进行分离,这类方法中常用的有:气体扩散法、离心分离法、色谱分离法、过滤、萃取、精馏等."化学分离"主要按被分离的对象在化学性质上的差异,通过合适的化学过程使它们获得分离,这类方法常见的有:沉淀和共沉淀、制备衍生物法、离子交换法等.色谱技术是分析化学领域中的一场革命性改变,可以同时测定复杂混合物中的多组分,这是其他方法无法比拟的.
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大鼠骨髓间充质干细胞原代培养换液频度与细胞增生的关系
目的:探索成体大鼠的骨髓间充质干细胞(MSCs)的分离、体外培养方法,观察采用不同的换液频度与细胞增生和生长的关系,为其应用提供实验依据.方法:从大鼠股骨获取骨髓,采用梯度离心的方法进行分离,在含10 mL/L胎牛血清的DMEM中常规培养,以MTT法检测不同的时间换液时细胞的生长曲线,并用碱性磷酸酶(AKP)检测的方法对分离的细胞进行鉴定.结果:采用梯度离心方法分离的骨髓间质干细胞的纯度较高,细胞活性佳,AKP染色为强阴性.首次换液后,每天更换培养液比每隔3-4 d换液一次更有利于MSCs的增生,原代长满培养瓶底比每隔2-3 d换液一次平均提前2 d.结论采用梯度离心的方法分离可获得纯度较高的骨髓间质干细胞,是简单易行的分离方法,每天更换培养液比每隔3-4 d换液一次更有利于MSCs的增生和形成形态均一的细胞集落.
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环维黄扬星D对糖尿病大鼠心肌细胞内游离钙的影响
目的:研究环维黄扬星D(CVB-D)对糖尿病大鼠心室肌细胞内游离钙的影响。
方法:以四氧嘧啶复制SD大鼠,体重(220±20)g糖尿病模型,随机分为8组,每组6只大鼠。在糖尿病大鼠的第6周,用酶解分离方法分离糖尿病大鼠的单个心室肌细胞,采用细胞内双波长荧光钙检测系统测定心室肌细胞内游离钙的浓度,记录给药前后糖尿病大鼠心室肌细胞内游离钙及钙瞬变,并与对照组比较。 -
人胰岛分离和纯化技术要点以及移植后主要问题
胰岛移植是胰岛素依赖型糖尿病的一种有效的治疗方法[1],分离胰岛的数量和质量决定着胰岛移植的成败.虽然胰岛的分离和纯化是在Ricordi等[2]所建立的胰岛分离方法的基础上发展起来的,并被认为是一种比较成熟的技术,但是目前真能很好掌握这项技术的胰岛移植中心为数不多,以至于埃德蒙顿胰岛移植方案并不能在大多数胰岛移植中心得到完美的重复[3-4].因此,进一步完善胰岛分离和纯化技术是每个胰岛中心需要不断探索的课题.
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肝脏移植的受体手术的难点及对策
原位肝移植手术技术难度大,尤其是受体病情重,已多次手术,合并门静脉血栓等特殊情况,富有挑战性,外科手术相关的并发症仍较高.首先要充分暴露,可大大缩短手术时间,减轻手术难度,起到事半功倍的效果;其二,晚期肝病受体,凝血机制多出现紊乱,应尽量予以纠正,以减少术中出血,维持血液循环稳定;其三,切除病肝,一般可采用常规循序渐进的方法,先解剖肝门,然后肝周,但有时由于术前已多次手术,粘连严重者,常规的分离方法可造成大量失血,可采用非常规方法,切除病肝.其四,术中细致操作,减少出血,准确进行各种管道的重建,减少各种外科并发症.
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人胰腺星状细胞的新型分离方法
目的 探讨人胰腺星状细胞(PSCs)的新型分离方法.方法 通过gentle MACSTM组织处理器-恒温震荡消化制备正常胰腺组织、胰腺癌组织的单细胞悬液.通过密度梯度离心法分离获得静息态和活化态的PSCs.结果 通过新型的分离法,1 g人正常胰腺组织能够获得约(2.6±0.7)×106个静息态PSCs,平均活率约为90.0%,细胞形态符合典型的静息态特征,328 nm激发波长下可观察到短暂蓝绿色自发荧光;1g人胰腺癌组织能够获得约(4.1±1.1)×106个活化状态的PSCs,平均活率约为92.0%,活化态的细胞均表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(vimentin)、成纤维细胞特异性蛋白1(FSP-1)等特征性标记.结论 本研究所用新型分离方法,适用于静息态与活化态两种表型的PSCs,不但分离纯度较高,分离时间亦极大缩短,值得推广借鉴.
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肝内胆管细胞的分离与培养
肝内胆管细胞是许多肝胆疾病的攻击目标,如原发性硬化性胆管炎、原发性胆汁性肝硬化、肝移植物慢性排斥反应等;其生理功能和在肝再生、胆管癌发生过程中的变化也日益得到重视.与此相关的研究带动了胆管细胞分离与培养技术的发展.本文报道我们用免疫磁性分离方法分离肝内胆管细胞和其体外培养.
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中药化学“武功秘籍”
对于中药化学这门课程,如果备考时间在2个月以上,建议从化合物结构分类、特征性化合物结构记忆、常用鉴别反应及鉴别机理、分离方法、紫外红外图谱进行整理,通过其逻辑性进行掌握,并通过真题检验、纠错.如果备考时间在1个月左右,建议与真题相结合,掌握常考化合物(薄荷醇、青蒿素、大黄素、紫杉醇、麻黄碱、人参皂苷)的结构及常见鉴别反应、特征性分离手段,其中黄酮、挥发油、三萜皂苷、甾体皂苷、生物碱是常考内容,需要特别注意,同时,积累记忆相应化合物具有的共性物化特征,在考试时可以起到举一反三的效果.
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毛细管电泳及其在滥用物质检测中的应用
毛细管电泳( capillary electrophoresis, CE)是 20世纪 80年代出现的一种灵敏度高、应用范围广的分离技术,被广泛应用于化学、医学、生化和药理学等各个领域。现以“ CE”为主题词在“分析化学文摘”数据库查到的引文量超过 4000篇,用同样的主题词和 Altavista搜索引擎,可在网络上查到 2000余篇文献 [1] 。 CE的原理是基于 Tiselius [2]的电泳理论,但在此基础上加快了分离速度,扩宽了分离物的范围,节省了试剂和分离液。 Weinberger等 [3]在 20世纪 90年代首先将 CE引入司法领域,他们证明了用这一技术分离包括纯化和非纯化的海洛因在内的 18种违禁和管制药品的可能性。随着这一技术的推广应用, CE已成为违禁药品检测中的热点。本文简单介绍 CE的特点、分离原理和分离模式,并就常见生物样品中滥用物质及其代谢产物的 CE分离方法作一回顾。
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β-内酰胺类抗生素中高分子杂质的分离与检测方法进展
β-内酰胺类抗生素中的高分子杂质是导致不良反应的主要因素,关于用SephadexG10凝胶色谱法控制β-内酰胺抗生素中高聚物的研究已有较多报道,但对其他质量控制方法的研究报道较少。本文主要对β-内酰胺抗生素中高分子杂质的检测方法包括高效凝胶色谱法、高效液相色谱法、LC-MS、柱切换技术等进行综述。