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胃癌SMAD4/DPC4杂合性丢失的研究
目的:探讨胃癌中SMAD4/DPC4杂合性丢失(loss ofheterozygosity,LOH)与胃癌临床病理的关系.方法:用多聚酶链反应-单链构相多态性(PCR-SSCP)银染法分析50例原发性胃癌SMAD4/DPC4的杂合性丢失.结果:D18S46 LOH为36.2%(17/47),D18S474 LOH为39.1%(18/46),DPC4LOH为59.2%(29/49).SMAD4/DPC4LOH的发生率随着胃壁浸润深度的加深而增高,随着TNM分期的增加而增高(P<0.05).胃癌直径≥5 cm时,SMAD4/DPC4 LOH要明显高于胃癌<5 cm时(P<0.05).SMAD4/DPC4 LOH在Borrmann分型中有显著性差异(P<0.05).结论:SMAD4/DPC4的杂合性丢失可能在胃癌的发展中起重要作用,是胃癌发展后期的重要分子事件.
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血小板糖蛋白受体IaC807T基因多态性与心肌梗塞的关系(摘要)
近年来研究发现,血小板糖蛋白(GP)受体基因多态性可能在冠状动脉疾病,尤其是心肌梗塞的发生中具有重要作用.本实验检测中国人群血小板GPIaC807T基因多态性,并探讨其与心肌梗塞发病之间的关系.1资料与方法选择2000年1月至2001年1月间住院男性心肌梗塞患者(心肌梗塞组)72例(包括急性、亚急性及陈旧性心肌梗塞),年龄小于60岁,均符合WHO心肌梗塞诊断标准;对照组70例,为本院体检者中与病例组年龄相匹配的非冠心病者.自全血中提取人基因组DNA.采用引物序列特异性多聚酶链反应(PCR)方法检测血小板GPIaC807T基因多态性.正义引物为5'-GACA~CATTAATAAATGTCTCCTCTG-3',序列特异性反义引物为5'-CCTTGCATATTGAATTGCTACA-807-3'及5'-CCTTGGATATTGAATTGCTACG-807-3'.2结果心肌梗塞组与对照组的平均年龄、高血压与糖尿病患者数、吸烟者数、体重指数、空腹血糖与血脂水平的差异均无显著性.
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肺炎衣原体与动脉粥样硬化关系的病理学探讨
目的近年来感染作为动脉粥样硬化(AS)发病的新的危险因素受到格外关注,特别是肺炎衣原体(C.pn)感染和AS两者是否具有因果关系一直是争议的焦点.本研究试从病理学的角度探讨C.pn在动脉组织检出的意义及其在AS发生发展过程中的作用.方法利用高灵敏度的nested PCR法对90例尸检材料采取的右冠状动脉(RCA)组织切片进行C.pn检测,同时根据美国心脏学会的AS组织学分类标准将所有标本进行分类.结果使用Nested PCR法除正常RCA之外在不同程度的AS病变组织中均有C.pn特异性DNA片段检出.90例中C.pn阳性检出率为48%(43/90),其中心脑血管病死因组为50%(15/30),其他死因组为41%(28/60),C.pn阳性检出组和阴性对照组的尸检患者临床特征如性别比例、死亡时的平均年龄及是否为心血管病死因等进行对照分析,结果显示均无显著性差异.在对90个标本4个病变内膜组中C.pn阳性检出率进行对照分析的结果显示,C.pn阳性检出率在病变初期组高于进展组,但随病变程度的增强却有意义的呈现低值.结论本研究结果提示C.pn普遍存在于AS的各类病变中,C.pn感染可能是AS形成初期阶段的启始因子,但对AS病变的发展没有直接的促进作用.
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促血管生成素1、2及Tie-2受体mRNA在肺腺癌中的表达
促血管生成素1(Ang-1)、促血管生成素2(Ang-2)及它们的内皮细胞特异性酪氨酸激酶受体(Tie-2)为肿瘤血管生成的重要调节因子[1].我们采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)结合计算机图像分析技术 , 对肺腺癌和癌旁肺组织Ang-1、Ang-2及Tie-2 的mRNA的表达进行半定量分析,观察Ang-1、Ang-2及 Tie-2在肺腺癌中表达水平,探讨3者在肺腺癌肿瘤血管生成中的作用.
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凝血因子V 1691 A基因突变在新疆地区的分布
凝血因子V(coagulation factor V,FV)在凝血过程中是重要的辅助因子,其基因中一个点突变1691G→A,使它对抗凝血系统中的一种血浆蛋白质C(APC)的失活作用产生抗性,使血栓发生的风险增大.本研究应用多聚酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP),对新疆地区219例(98例汉族、67例维吾尔族和54例哈萨克族)健康个体进行了研究.
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059 实时快速逆转录酶-多聚酶链反应(RT-PCR)用作术中淋巴结微转移的诊断
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030逆转录酶-多聚酶链反应测定pN0胃癌的淋巴结微转移和淋巴定位图
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培养法与多聚酶链反应杂交法检测结核分枝杆菌的临床应用
结核病是我国5大主要流行病之一,严重影响人类健康.据世界卫生组织(WHO)报道,西大洋地区每天有1000人死于结核病,其中仅中国就有700人.快速、准确地检测出结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,TB)对于患者的及时诊治至关重要.
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疱疹病毒感染与特发性肺纤维化关系的分子生物学证据
目的 探讨疱疹病毒感染和特发性肺纤维化(IPF)的关系.方法 采用体外基因扩增技术检测33例IPF患者(25例散发性和8例家族性)与25例对照组患者的肺组织人疱疹病毒及JC、BK病毒核酸,并经免疫组织化学、电镜检查及试验性治疗进一步确认.结果 IPF患者肺组织中巨细胞病毒、Epstein-Barr病毒以及人疱疹病毒8型的检出率显著高于对照肺组织,IPF患者肺组织检查到EBV和HHV-8病毒特异性抗原、直径近似于疱疹病毒的病毒样颗粒.IPF患者肺功能试验性治疗后获得改善.结论 疱疹病毒感染是IPF发生发展过程中重要的触发因子.
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住院患者人类疱疹病毒7型感染的调查
目的了解住院人群中人类疱疹病毒7型(HHV-7)的感染情况.方法以聚合酶链反应(PCR)检测唾液中的HHV-7,再以巢式PCR及酶切加以鉴别.结果检测120份唾液标本有97份阳性,PCR阳性结果示186bp处有一荧光带,经ECORI酶切后成为126bp和60bp两条荧光带,巢式PCR结果示94 bp处有一荧光带;复发性口腔溃疡(RAU)患者与非RAU患者HHV-7检出存在显著性差异,有HHV-7感染组OR=27.63.结论住院患者的唾液中HHV-7检出率高,HHV-7感染人群发生RAU的危险高于未感染人群.
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多聚酶链反应在肺炎支原体诊断中的应用
肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)是急性呼吸道感染的常见病原之一.1962年Chanock等[1]自非典型肺炎患者痰液中分离MP获得成功,近年来,MP的感染呈增多趋势.其感染发病率约占X线诊断肺炎的10%~20%,尤以幼儿和青少年发病居多,并且每隔3~5年有流行趋势[2].由MP引起的肺炎症状重,病程长,临床合并症复杂,临床表现和X线检查不具有特征性,临床上急需快速有效的诊断方法,PCR是1985年兴起的分子生物学技术.1989年Bernet等[3]和Jensen等[4]分别建立了检测MP特异片段的PCR实验室方法,对模拟标本进行了敏感性、特异性研究.1992年PCR方法开始用于临床标本的MP检测[5-7].
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重组pEGFP-Mfn2真核表达载体的构建及转染人乳腺癌细胞系MCF-7
目的:构建Mfn2基因真核表达载体,将此载体转染入人乳腺癌细胞系MCF-7,并观察高表达Mfn2对MCF-7增殖的影响.方法:1)设计pEGFP-Mfn2质粒,并将其用脂质体转染入人乳腺癌细胞系MCF-7; 2)DNA测序、RT-PCR法、流式细胞术及免疫细胞化学法鉴定以上述载体是否转染成功;3)MTT法检测转染后Mfn2对MCF-7细胞增殖的影响.结果:1)重组后的pEGFP-N1质粒已成功载入小鼠Mfn2的全长编码基因,DNA序列测定的结果与预期设计基本一致.普通PCR琼脂糖凝胶电泳显示转染后MCF-7细胞中存在外源性Mfn2的表达.2)琼脂糖凝胶电泳检测显示实验组中Mfn2较对照组明显升高,转染Mfn2后MTT法检测转染pEGFP-Mfn2组的MCF-7细胞数明显低于空白对照组与转染pEGFP-N1组,P<0.05.3)细胞免疫化学显示转染Mfn2后MCF-7细胞数目减少,癌细胞出现核碎裂现象.结论:成功构建了Mfn2基因真核表达载体,并成功转染MCF-7细胞.转染Mfn2后,MCF-7细胞的增殖受到明显抑制.
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RT-nested PCR和限制性酶切分析用于HV的检测和基因分型
为建立检测肾综合征出血热(HFRS)患者血清中汉坦病毒(HV)基因的RT-nested PCR方法,并进一步进行限制性酶切分型,设计并合成互补于HV S基因片段的引物,对78例HFRS患者血清进行RT-nested PCR检测,并对PCR产物进行酶切分析。结果显示,阳性率分别为76%(≤7天)、 67% (8~14天)、43%(15~21天)和29%(>21天)。48例检测阳性患者PCR产物酶切分型,47例为Ⅰ型,1例为Ⅱ型。提示RT-nested PCR用于早期HFRS患者的HV基因检测,具有直接、敏感、特异等优点,其产物的限制性酶切分型能快速准确地区分国内当前流行的主要HV毒株型别。
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肺癌p16基因缺失与P16蛋白失活的关系研究
抑癌基因p16是细胞增殖周期P16-CDK4-Cyclin D1-Rb调节环路的重要组件之一,P16蛋白的丢失,必将引起细胞周期的失控,导致肿瘤的发生[1,2].采用免疫组化和多重PCR技术,对肺癌组织P16蛋白的表达和p16基因的缺失进行了研究,探讨该基因的变化与肺癌发生发展的关系.
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人卵泡抑素在妊高征母血、羊水、胎盘中的 mRNA 表达
妊高征为危害母婴健康的重要疾病之一,其发病机制至今尚不清楚.有学者研究发现,妊高征孕妇血液成分中有某种毒性因子可直接损害血管内皮细胞.近年来国外研究发现:人卵泡抑素在高血压病及动脉粥样硬化病人的血管内皮、尤其在动脉血管平滑肌细胞中有高度的 mRNA 表达.1999年2月~2000年2月,我们应用多聚酶链反应(PCR)技术对正常妊娠及妊高征孕妇血清、羊水及胎盘胎膜进行研究,以探讨人卵泡抑素在妊高征发病中的作用.
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关键词:
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随机扩增多态性DNA鉴定酵母菌的初步探讨
目的:应用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对临床上常见的酵母菌进行分析,以选择合适的引物和实验条件对酵母菌进行鉴定.方法:选用四条长度为10个碱基的随机引物分别对酵母菌、丝状真菌及细菌进行扩增,并对扩增结果进行相似性分析.结果:所选三条引物可在种的水平上将所试菌株有效地区分开来,但同一引物对不同菌种的扩增结果存在明显的差异.在扩增同种内不同菌株时,各菌株间也存在着一定的差异.采用不同引物进行扩增时种内变异的程度有所不同.除个别菌株外,扩增所得指纹图型的种类差异远远小于不同的菌种间的差异,因而可将不同种的酵母菌有效地区分开来.结论:RAPD技术可用于酵母菌的种间鉴定.其中引物及实验条件的选择尤为重要,同时,将多条引物扩增结果共同用于结果分析将有助于提高鉴定的可靠性.
关键词: 随机扩增多态性DNA 酵母菌 多聚酶链反应 -
流式磁珠反向SSOP杂交法误判HLA基因型的原因分析(附4例报告)
目前对人类白细胞抗原的基因分型技术有多种,包括序列特异性引物-聚合酶链反应(polymerase chain reaction with sequence-specific primers,PCRSSP),多聚酶链反应序列特异性寡核苷酸探针(PCR-sequence specific oligonucleotide probe,PCRSSOP)杂交法,基因芯片法和DNA直接测序法(sequence-based typing,SBT).基于Luminex的流式磁珠反向SSOP杂交法具有快速、高准确率、高通量、重复性好等优点,已广泛应用于骨髓库的大样本分型工作[1,2].我们使用流式磁珠反向SSOP法(One Lambda,美国)和DNA测序法(Atria,美国)法同时对临床1000例高分辨分型样本分型时,发现4例样本的SSOP分型结果与DNA测序结果不符,用另一种HLA高分辨试剂(Protrans,德国)对这4例样本进行验证,证明是SSOP误判,为分析误判原因,对本4例样本用相同批号的SSOP试剂进行复试,分析结果,报告如下.
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原蛋白转化酶Furin P1启动区SNP-229 C/T影响HBV感染的转归
目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)自限感染和慢性感染与原蛋白转化酶Furin P1启动区SNP-229 C/T的关系.方法 收集112例抗-HBs和抗-HBc阳性的HBV自限感染者和300例HBV慢性感染者的外周全血,提取基因组DNA;采用竞争分化聚合酶链反应技术为基础的方法 对Furin P1启动区SNP-229 C/T进行基因分型.结果 全部患者中,C等位基因频率为74.6%(615/824),T等位基因频率为25.4%(209/824),CC、CT和TT基因型的频率分别为60.9%(251/412)、27.4%(113/412)和11.7%(48/412),不完全符合Hardy-Weinberg分布.与自限感染相比,HBV慢性感染者携带较高频率的T等位基因(28.2%vs 17.9%,P
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免疫球蛋白重链基因重排检测在原发性胃肠道B细胞非霍奇金淋巴瘤中的应用研究
目的:探讨多聚酶链反应(PCR)检测免疫球蛋白重链基因重排在原发性胃肠道淋巴组织增生性疾病中的良恶性鉴别中的应用价值。方法选取存档蜡块45例,采用HE常规染色及SP免疫组化方法进行组织学分类,运用PCR半巢式扩增免疫球蛋白重链基因重排,2%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。结果IgH FR3A和IgH FR3A+FR2A在MALT淋巴瘤的阳性检测率分别为60.7%(17/28)和75.0%(21/28),在DLBCL中的阳性检测率分别为60.0%(9/15)和73.3%(11/15),在MCL中的阳性检测率分别为100.0%(1/1)和100.0%(1/1)。IgH FR3A在胃肠道淋巴瘤中的阳性检测率为60.0%。IgH FR3A联合IgH FR2Ad在胃肠道淋巴瘤中的阳性检出率为73.3%(33/45)。结论采用PCR方法检测免疫球蛋白重链基因重排能够作为淋巴瘤诊断的有效辅助手段,有助于对原发性胃肠道淋巴组织增生性疾病的良恶性做出正确的诊断。