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定神醒脑散加服磁珠丸治疗癫狂病100例临床观察
定神醒脑散是治疗癫狂病专方,经反复筛选整理配方应用于临床治疗,随访疗效观察,该药在治疗癫狂病100例中疗效满意.
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肠道传染病病原体可视化基因芯片检测技术的研究
[目的]研究建立能同时检测7种肠道传染病病原体的可视化的快速、高效的基因芯片检测技术.[方法]针对霍乱弧菌、副溶血弧菌、沙门菌、大肠埃希菌O157:H7、金黄色葡萄球菌、轮状病毒、诺瓦克病毒(Ⅰ型和Ⅱ型)等7种肠道传染病病原体,设计特异引物和探针,构建芯片.以链霉亲和素包被的磁珠为信号标记分子检测芯片上的特异杂交反应,结果采用裸眼观察或普通光学设施成像保存.测试构建芯片的特异性、重复性及灵敏度等参数.[结果]该芯片具有较好的特异性和重复性,检测灵敏度可达25ng/μl;对27份临床粪便样本分别进行PCR和芯片检测,芯片检测结果与PCR方法检测结果一致.[结论]本研究建立的基于磁珠标记的可视化芯片技术,能够用于快速筛查选定的7种主要的肠道传染病病原体.该技术对于进一步开发更多指标的微生物检测方法具有很好的示范作用.
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建立寄生虫纳米生物传感器技术的初步应用
[目的]采用生物分子技术更快更准确地检测食品中寄生虫,提高检测效率.[方法]应用纳米金标记磁珠分离电化学检测DNA方法.以纳米量子点为DNA标记,夹心法为目标捕获方法,通过磁珠分离富集途径,利用电化学方法检测纳米金标记在碳电极表面的还原信号,建立纳米生物传感器检测技术.[结果]目标DNA样品出现明显信号;非碱基配对样品中无信号.在无磁性的电极上检测也无信号,说明Au67没有非特异性吸附.[结论]纳米生物技术是纳米技术与生物技术相结合的分子水平的检测技术.它可以从复杂的样品中快速分离、纯化、浓集出目的物.它在寄生虫检测中的应用,具有广阔的发展前景,是一种值得推广的先进的检测技术.
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耳穴压丸配合放血治疗失眠32例临床观察
失眠又称"不寐",为临床常见病.表现为入睡困难、睡后易醒、多梦甚至彻夜不眠.在临床上用磁珠贴压耳穴配合中指指尖放血治疗失眠,取得满意疗效.资料与方法本组患者32例,男14例,女18例;年龄29～54岁,病程1周～2年.诊断标准:参照国家中医药管理局1995年批准实施的<中医内科病证诊断疗效标准>中有关"不寐"的诊断标准.
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耳穴埋压磁珠治疗小儿瞬目综合征
目的:探讨耳穴埋压磁珠治疗小儿瞬目综合征的临床疗效.方法:2010年2月～2012年8月收治小儿瞬目综合征患儿675例,取患者双侧耳部用酒精棉球消毒,用探穴棒探穴,以局部感到酸痛为佳.取磁珠放置于7mm×7mm的方形胶布中央,贴于相应耳穴位置.左右耳交替埋压.嘱家长每天给患儿按压穴位,3～5次/日,每次10分钟.3～5天换1次药.结果:痊愈469例(69.5%),好转137例(20.3%),无效69例(10.2%),总有效率89.8%.病程短的患儿经过5～7次换药症状明显减轻或消失.病程长的患儿需要10次或更长的时间.大多数患儿都有很好的疗效.结论:耳穴埋压磁珠治疗小儿瞬目综合征疗效显著.
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耳穴磁贴辅助麻醉及对术后机体功能恢复的影响
目的:验证耳穴磁贴在妇科开腹手术辅助麻醉的镇痛镇静效应和术后对机体功能恢复的作用.方法:将妇科开腹手术患者92例随机分为3组,耳穴组(31例)于手术前夜在双侧神门、皮质下、子宫及盆腔等相关耳穴区贴敷磁珠并按压;安慰组(31例)在所选耳穴区贴敷同样外观的无磁珠胶布;空白组(30例)不予任何干预措施.观察术前夜至术后3天的精神、胃肠功能等变化.结果:与安慰组、空白组比较,耳穴组的术后焦虑自评量表(SAS)评分较少(25.5±0.81 vs 28.9±3.19、28.3+2.36,均P<0.01),加用氟芬合剂的剂量较少[(2.5±1.1)mL vs (3.4±1.8)mL、(3.2±1.6)mL,均P<0.05),术后排气时间较早[(34.2±12.1)h vs (46.3±10.9)h、(43.2±14.8)h,均P<0.01],术前及术毕血清β-内啡肽水平较高(均P<0.05).结论:耳穴磁贴对妇科开腹手术具有一定的稳定情绪、镇痛及调整机体功能的作用.
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树突状细胞的培养与鉴定
目的 研究利用磁珠分离方法获取单核细胞,用细胞因子GM-CSF和IL-4联合诱导使之分化为树突状细胞(dendritic cells,DCs)的方法,并对培养的细胞从形态,表型,功能等三个方面进行鉴定,从而探索出一套较成熟的DCs的培养方法.方法 通过密度梯度离心的方法获取白细胞悬液中的白膜层,然后通过磁珠分离的方法,收集高纯度的单核细胞.在细胞因子GM-CSF和IL-4的刺激下,将细胞培养至7天左右,收集细胞进行流式分析,并进行淋巴细胞增殖实验,鉴定细胞是否为树突状细胞.结果 在倒置显微镜下观察,细胞培养第7天,大部分细胞呈单个悬浮,并有明显的毛刺样突起.流式分析发现细胞高表达DC表面特异性抗原CD80,CD86,HKA-DR,并且不再表达单核细胞表面抗原CD14,细胞纯度约为93.12%.淋巴细胞增殖实验显示DCs可明显刺激初始型淋巴细胞增殖.结论 通过磁珠分离的方法获得单核细胞并利用GM-CSF和IL-4细胞因子诱导可成功培养出纯度高的树突状细胞.
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探讨磁珠偶联血型抗体过程对抗体活性的影响
目的 探讨磁珠与血型抗体偶联过程对抗体活性的影响,为后续利用液相芯片技术检测血型提供实验依据.方法 分别将抗D血型抗体直接或者利用抗人IgG间接与磁珠偶联,再利用磁力架、显微镜观察其与D抗原阳性红细胞的反应情况.结果 IgM型抗D与磁珠偶联后与D阳性红细胞可反应,但IgG型抗D与磁珠偶联后与D阳性红细胞不反应;利用抗人IgG作为桥联间接偶联磁珠的IgG型抗D不能与D阳性红细胞结合;IgG型抗D与D阳性红细胞形成的抗原抗体复合物与磁珠可进一步偶联.结论 血型抗体与磁珠偶联后会对其活性产生一定影响,尤其是IgG型血型抗体.
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蛋白组学技术在检测肾血管平滑肌脂肪瘤血清差异蛋白中的应用
目的 应用WCX磁珠联合MALDI-TOF MS技术对肾血管平滑肌脂肪瘤进行血清差异蛋白实验,寻找显著性表达的差异蛋白,以提高肾血管平滑肌脂肪瘤的检出率.方法 应用磁珠联合MALDI-TOF MS技术对肾血管平滑肌脂肪瘤血清进行差异蛋白研究,筛选出肾血管平滑肌脂肪瘤多个血清差异蛋白,并应用遗传算法建立诊断模型.结果 筛选出肾血管平滑肌脂肪瘤与对照组之间差异蛋白峰142个,具有较明显差异的蛋白峰13个(P＜0.05).利用Clin-ProTools2.2软件通过遗传算法优化选择,筛选出符合条件的15个差异蛋白峰建立诊断模型,交叉验证识别能力为100％.结论 建立了肾血管平滑肌脂肪瘤血清差异蛋白的诊断模型,有助于提高肾血管平滑肌脂肪瘤的检出率.
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弱阳离子磁珠联合MALDI-TOF MS技术检测肾盂尿路上皮癌血清差异蛋白
肾盂尿路上皮癌术前诊断困难,需要与肾盂里的凝血块和息肉等进行鉴别,而尿找瘤细胞等确诊阳性率较低[1].本研究利用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱技术(ma-trix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)比较肾盂尿路上皮癌组和对照组的血清样本,寻找对于肾盂尿路上皮癌具有鉴别意义的血清差异蛋白峰,弥补尿找瘤细胞阳性率不高的缺点,提高肾盂尿路上皮癌的术前诊断率.
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应用组合抗体结合磁珠个体化分选调节性T细胞
调节性T细胞的分选和体外扩增是制约其临床治疗的瓶颈问题.目前广泛使用的商品化调节性T细胞分选试剂盒价格昂贵,无法针对不同生物品系进行个体化的调整,造成分选效果不稳定;本研究建立的个体化分选方法 基于相同原理,调整抗体用量和实验步骤,大大地节约了实验成本,并且可以针对不同生物品系,选配不同的抗体和调整抗体用量,以达到佳的分选效果.采用鸡尾酒分步分选方法 :先用不同抗体组合磁珠去除非目的 细胞来预富集CD4+T细胞,然后从富集的CD4+T细胞中阳性分选出CD25+细胞.
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影响磁珠共价偶联效率的因素分析
目的 研究不同条件下Dynabeads M-280 Tosylactivated磁珠与牛血清白蛋白(BSA)的偶联效率,探讨其影响因素.方法 分别取Dynabeads M-280 Tosylactivated磁珠与BSA混合,在不同的pH条件、不同的硫酸铵浓度和不同的BSA浓度下37℃振荡孵育18h,然后置于磁力架上静置2～3 min分离上清液.应用Bradford蛋白定量法对偶联前后的上清液进行蛋白定量分析,计算不同条件下的偶联效率.结果 当缓冲液pH值为9.5时偶联效率为1.12μgBSA/mg磁珠,pH值为7.4时偶联效率为0.41 μg BSA/mg磁珠；当反应体系中硫酸铵终浓度为1.2 mol/L时偶联效率为9.5 μg BSA/mg磁珠,硫酸铵浓度为0.8 mol/L时偶联效率为8μg BSA/mg磁珠；当偶联的BSA终浓度为0.4 mol/L时偶联效率为9.5μg BSA/mg磁珠,BSA浓度为0.6 mol/L时偶联效率为13 μg BSA/mg磁珠.结论 缓冲液pH值、硫酸铵浓度和BSA的浓度会影响Dynabeads M-280 Tosylactivated磁珠与BSA的偶联效率,该偶联过程在pH9.5、1.2 mol/L硫酸铵浓度和0.6 mol/L BSA的条件下进行较为适合.
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基于磁珠分离的生物质谱技术用于食管癌临床诊断
目的:基于磁珠分离的生物质谱技术,建立食管癌诊断的血清学检测方法.方法:收集血清样本123例(其中食管癌63例,正常人61例),随机分为建模组和验证组.运用弱阳离子纳米磁珠(magneticbead-weak cation exchange,MB-WCX)联合基质辅助激光解吸离子飞行质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS),建立食管癌与正常人血清蛋白质谱.用Flex Analysis 2.4软件收集数据,应用Clinpro Tools 2.2软件对建模组32例食管癌患者和30例正常人血清差异蛋白质谱进行定量分析,应用Support Vector Machine算法建立食管癌诊断模型,应用所获取的诊断模型对验证组样本(31例食管癌和31例正常人)进行分类诊断,以评价诊断模型的诊断价值.结果:通过比较分析食管癌与正常人血清蛋白质谱,发现共有21个差异蛋白峰(P＜0.05),其中在食管癌中表达上调12个,表达下调9个,利用其中3个差异峰(Mr分别为654.74、1 451.48、1 866.67 Dr)建立诊断模型,获得了93.75％(30/32)的敏感性和90.00％(27/30)的特异性,经独立样本双盲验证,其灵敏度为93.55％(29/31),特异度为90.32％(28/31).结论:基于磁珠分离和MALDI-TOF-MS技术能直接检测出食管癌患者血清差异表达蛋白,建立的诊断模型具有较高的敏感性和特异性,对提高食管癌的诊断具有一定的临床意义.
关键词： 食管癌 蛋白组学 磁珠 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术 -
磁珠联合基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱技术对肾透明细胞癌尿液差异蛋白的初步研究
目的 应用蛋白组学对肾透明细胞癌进行尿液差异蛋白研究,寻找显著性表达的差异蛋白,以提高肾透明细胞癌的检出率. 方法 2010年3-5月收治肾透明细胞癌患者11例,男10例,女1例.年龄46～ 78岁,平均63岁.所有患者手术或穿刺病理均确诊为肾透明细胞癌,临床分期:Ⅰa期3例,Ⅰb期6例,Ⅱ期1例,ⅣV期1例.正常对照组10例,均为男性,年龄25 ～ 32岁,平均29岁.应用磁珠联合基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术对两组的尿液进行差异蛋白研究,筛选出肾透明细胞癌的尿液差异蛋白,并应用遗传算法建立诊断模型. 结果 筛选出差异蛋白峰160个,具有显著性差异的蛋白峰1个,相对分子质量为2221.71(P=0.0304).利用ClinProTools 2.2软件通过遗传算法优化选择,筛选出符合条件的13个差异蛋白峰建立诊断模型,交叉验证的特异性和敏感性均为100％. 结论 应用磁珠联合MALDI-TOF MS技术和遗传算法建立的肾透明细胞癌尿液差异蛋白的诊断模型特异性和敏感性极高,有助于提高肾透明细胞癌的检出率.
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利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱联合磁珠技术寻找乳腺癌血清蛋白标志物
目的 探索乳腺癌与乳腺良性疾病和健康人血清蛋白质谱表达差异,寻找具有鉴别诊断意义的血清蛋白标志物.方法实验分为两大组:(1)决策树模型组共293例标本,包括3个亚组,分别为乳腺癌组110例标本、乳腺良性疾病组113例和健康组70例,建立决策树(乳腺癌诊断)模型;(2)盲法验证组共34例标本,包括3个亚组分别为乳腺癌组7例标本、乳腺良性疾病组13例及健康组14例,进行盲筛验证决策树模型.采用弱阳离子磁珠捕获乳腺癌患者血清中的蛋白,使用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)仪检测绘制蛋白峰.应用Biomarker Wizard TM 3.1软件和Biomarker Patterns TM 5.0 软件分析数据.统计分析采用方差分析法和秩和检验法.计算决策树模型诊断的准确率以及盲法验证模型诊断乳腺癌的敏感性和特异性.结果 在决策树模型组中检测到了47个差异有统计学意义的蛋白峰(P<0.050).应用BPS 5.0软件,以相对损失小的原则从这47个蛋白峰中选取了4个蛋白峰,分别为相对分子质量(Mr,本文中相当于质荷比m/z) 9292.5、Mr 11707.2、Mr 15504.5和Mr 16107.9,用其建立决策树模型(乳腺癌诊断模型).该模型判断乳腺癌、乳腺良性疾病及健康人的准确率分别为99.09%、95.58%、92.86%.盲法验证该模型诊断乳腺癌的敏感性为71.43%,特异性为88.89%.结论 应用MALDI-TOF-MS联合磁珠技术可以检测乳腺癌血清中差异蛋白峰并可以建立决策树(乳腺癌诊断)模型.选择的4个差异蛋白蜂建立的决策树模型诊断乳腺癌具有好的准确性和较好的敏感性及特异性.决策树模型能将乳腺癌与乳腺良性疾病及健康人相鉴别.寻找到的Mr 9292.54、Mr 11707.2、Mr 15504.5以及Mr16107.9的蛋白峰有望成为鉴别乳腺癌与乳腺良性疾病和健康人的有效的肿瘤血清蛋白标记物.
关键词： 乳腺肿瘤 蛋白质组学 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法 磁珠 差异蛋白峰 -
磁珠-流式细胞术SELEX技术的建立
目的:建立磁珠一流式细胞术SELEX技术方法.方法:不对称PCR扩增并制备ssDNA文库,选用商品化的、表面包被链霉亲合素的磁珠作为分离介质进行SELEX筛选,流式细胞术检测筛选得到的配基与链霉亲合素结合的特异性,及配基竞争生物素与链霉亲合素的结合情况.结果:筛选获得了特异识别链霉亲合素的ssDNA配基,流式细胞术检测确定:筛选得到的配基与链霉亲合索特异结合,并能竞争生物素与链霉亲合素的结合.结论:成功建立了磁珠一流式细胞术SELEX技术方法.
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基于时间分辨荧光纳米颗粒的磁分离均相免疫分析方法
目的 建立一种基于时间分辨荧光纳米颗粒的磁分离均相免疫分析方法并用于检测降钙素原(PCT)重组抗原.方法 以PCT单克隆抗体偶联铕离子荧光微球为检测抗体,另一株PCT单克隆抗体偶联生物素作为固相抗体,建立一种通过表面修饰有链霉亲和素的磁珠分离铕离子荧光微球-检测抗体-降钙素原-固相抗体-生物素复合物的均相免疫分析方法.用该法检测PCT重组抗原,通过SigmaPlot分析该法的低检测限.结果 PCT重组抗原的标准曲线匹配二次函数,函数方程为Y=19170.12+ 75493.74X-26.00X2(r=0.9986),PCT重组抗原检测灵敏度为0.04 ng/ml.结论 铕离子荧光微球可作为标记物应用于磁分离均相免疫分析方法,并在PCT重组抗原检测中获得较高的检测灵敏度.
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同一个体多种体液用于筛选卵巢癌早期诊断标志物的研究
目的 采用蛋白质组学方法在卵巢癌患者的多种体液中同时筛选出共同异常的多肽,用于卵巢癌早期诊断的研究,并在卵巢癌患者的血清中进行验证,加深对卵巢癌癌变机制的理解.方法 采用WCX磁珠结合MALDI - TOF - MS技术在卵巢癌患者的血清、腹水、尿液、囊液中进行比对筛选,将筛选出的异常改变的多肽峰在训练集和验证集血清中检验其诊断卵巢癌的灵敏度与特异度.结果 四种体液中筛选出来卵巢癌患者血清中下调和上调的多肽峰分别为6081 Da和4466DaP＜0.05),经留一法验证,诊断卵巢癌的特异度为100％,敏感度为100％,盲法检测的诊断特异度为100％,敏感度为87.5％.结论 同一个体的四种体液中同时筛选得到的肿瘤标志物具有较高的特异性,对卵巢癌的早期诊断具有一定价值.
关键词： 卵巢癌 早期诊断 磁珠 MALDI-TOF-MS -
流式磁珠反向SSOP杂交法误判HLA基因型的原因分析(附4例报告)
目前对人类白细胞抗原的基因分型技术有多种,包括序列特异性引物-聚合酶链反应(polymerase chain reaction with sequence-specific primers,PCRSSP),多聚酶链反应序列特异性寡核苷酸探针(PCR-sequence specific oligonucleotide probe,PCRSSOP)杂交法,基因芯片法和DNA直接测序法(sequence-based typing,SBT).基于Luminex的流式磁珠反向SSOP杂交法具有快速、高准确率、高通量、重复性好等优点,已广泛应用于骨髓库的大样本分型工作[1,2].我们使用流式磁珠反向SSOP法(One Lambda,美国)和DNA测序法(Atria,美国)法同时对临床1000例高分辨分型样本分型时,发现4例样本的SSOP分型结果与DNA测序结果不符,用另一种HLA高分辨试剂(Protrans,德国)对这4例样本进行验证,证明是SSOP误判,为分析误判原因,对本4例样本用相同批号的SSOP试剂进行复试,分析结果,报告如下.
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磁珠压耳穴联合中药热奄包治疗慢性支气管炎急性发作的效果观察
目的 探讨磁珠压耳穴联合中药热奄包治疗慢性支气管炎急性发作的临床效果.方法 选取本院2013年3月～2015年1月收治的142例慢性支气管急性发作患者作为研究对象,随机分为对照组(72例)和治疗组(70例).对照组采用西医常规治疗,治疗组在对照组的基础上采用磁珠压耳穴联合中药热奄包进行治疗.比较两组的总有效率,咳嗽、咳痰、喘息及哮鸣音好转时间.结果 治疗组的总有效率为94.29％,显著高于对照组的83.33％(P＜0.05);治疗组的咳嗽、咳痰、喘息及哮鸣音好转时间显著短于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);两组的不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 磁珠压耳穴联合中药热奄包治疗慢性支气管炎急性发作能提高西医常规治疗的临床效果,不良反应少.
