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肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体基因在糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡中的作用
目的探讨肿瘤坏死因子(TNF)相关的凋亡诱导配体(TRAIL)基因在糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡中的表达及其作用.方法应用链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,采用原位末端标记法和流式细胞术检测4组(对照组、糖尿病4周组、8周组和12周组)大鼠肾脏细胞凋亡情况;免疫组化和流式细胞术检测肾脏TRAIL基因及其死亡受体DR4、DR5的蛋白表达.结果与正常对照组相比,各糖尿病组较对照组肾小球、肾小管凋亡细胞数明显增多,TRAIL、DR4、DR5的表达亦显著增强.结论在高糖环境的诱导下,TRAIL基因及其死亡受体出现的高表达,可能部分参与了糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡.
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肿瘤治疗新策略:调节凋亡
20多年来,对细胞凋亡进行选择性调节一直是肿瘤药物研究者的目标.凋亡途径包括外源性和内源性途径.外源性途径通过细胞表面死亡受体(DRs)起作用,内源性途径由BCL-2蛋白家族控制.
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抗体芯片筛选黄芩苷诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的作用靶点
目的 采用凋亡抗体芯片筛选黄芩苷诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的作用通路和靶点,探讨黄芩苷诱导胃癌细胞凋亡的相关机制.方法 采用MTT法检测黄芩苷对SGC-7901细胞的增殖抑制作用;采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用人凋亡抗体芯片双抗体夹心检测法筛选出黄芩苷(120 μmoL· L-1)组与对照组的差异表达蛋白;采用Western Blot法对筛选出的差异蛋白Caspase-3、Caspase-8、FasL、XIAP进行验证,增加对Fas、Caspase-9、TRAIL蛋白的检测.结果 与对照组比较,20 ～ 320 μmoL·L-1的黄芩苷在24～96 h不同时间点可抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001),且呈浓度和时间依赖性;80,120,160 μmoL·L-1黄芩苷均可诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡(P＜0.01),且呈浓度依赖性;凋亡抗体芯片检测结果表明,120μmoL·L-1黄芩苷组的bad、Caspase-3、Caspase-8、FasL、HSP60、TRAIL R4、IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ、p21、p27、p53和SMAC等蛋白表达明显上调,而XIAP蛋白表达显著下调,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜ 0.01).Western Blot验证实验结果表明,160 μmoL·L-1浓度组的FasL蛋白相对表达量显著上升(P＜0.001);120,160 μmoL· L-1浓度组的Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Fas、TRAIL蛋白相对表达量显著上升(P＜0.01,P＜0.001),XIAP蛋白相对表达量显著下调(P＜ 0.001).结论 黄芩苷诱导胃癌细胞凋亡的抗肿瘤作用机制与FasL、TRAIL介导的死亡受体有关;抗体芯片是有效的靶点筛选手段,可用于药物作用靶点和药理机制研究.
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溃疡性结肠炎患者DR4和DR5基因单核苷酸多态性分析
目的:探讨死亡受体(DR)4和DR5基因单核苷酸多态性(SNP)与溃疡性结肠炎(UC)的关系.方法:选取163例UC患者和252例对照者,采用直接测序法检测DR4(rs20575)和DR5(rs1047266)的基因多态性. 结果: 与对照组相比,UC组中DR4 (rs20575) 突变等位基因G和基因型CG + GG的频率显著升高(6.75%vs. 1.39%,P < 0.001,OR = 5.138;8.59% vs. 2.78%,P = 0.008,OR = 3.289). 分层分析发现重度UC患者中DR4(rs20575)突变基因型CG + GG的频率显著高于轻中度患者(20.83% vs. 6.47%,P = 0.020,OR =3.801);广泛结肠炎患者中DR4(rs20575)突变等位基因G的频率较远端结肠炎显著降低(2.34%vs. 9.60%,P=0.011, OR = 0.226). DR5(rs1047266)的突变等位基因和基因型频率在UC组和对照组之间比较差异无统计学意义(均P > 0.05). 结论:DR4(rs20575)基因多态性与UC易感性密切相关,并且可能影响UC的疾病严重程度和病变部位. DR5(rs1047266)基因多态性与UC易感性无关.
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TRAIL对人喉癌Hep-2细胞生长及凋亡的影响
目的:研究TRAIL对人喉癌Hep-2细胞生长及凋亡的影响,并探索其相关机制.方法:用MTT法和流式细胞仪检测不同浓度TRAIL对喉癌细胞Hep-2,成纤维细胞MRC-5生长及凋亡率的影响.用western blotting对比两种细胞DR-4,DR-5的表达情况.检测Hep-2细胞TRAIL干预前后caspase-8,caspase-3,caspase-9表达的变化.结果:随着TRAIL浓度的升高,Hep-2细胞存活率逐渐降低,而凋亡率逐渐提高.MRC-5细胞对TRAIL不敏感.Western blotting检测发现Hep-2细胞DR-4、DR-5表达明显高于MRC-5.TRAIL干预Hep-2细胞后caspase-8、caspase-3、caspase-9活化分解明显增多.结论:喉癌细胞Hep-2由于DR-4、DR-5的高表达,对TRAIL促凋亡作用具有特异敏感性,其促凋亡作用是通过激活线粒体依赖性通路实现的.
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肾癌PD-1／PD-L1的作用及抗体治疗的研究现状
肾细胞癌虽具有肿瘤免疫原性，但其可诱导树突状细胞分化，并诱导T细胞产生耐受肿瘤的相关基因，从而使得免疫细胞的抗肿瘤功能受损［1］。新型的免疫调节剂，如PD-1抗体，能显著增强抗肿瘤免疫功能。PD-1（程序性死亡受体-1）是ISHIDA等［2－3］在1992年发现的一种免疫抑制性受体，属于CD28／CTLA-4家族，可调节抑制性信号，在肿瘤微环境中T细胞活化的效应阶段发挥其抑制活性［4］。 PD-1有PD-L1和PD-L2两种配体。 PD-L1表达于静息T细胞、B细胞、巨噬细胞、树突状细胞、血管内皮细胞和胰岛细胞，可调节外周组织中T细胞的功能。PD-L1通过与PD-1结合起到抑制T细胞的作用［5］。
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Fas/Fas-L介导血管细胞凋亡的研究进展
凋亡是一系列主要以Caspase-8、Caspase-3为主的半胱氨酸蛋白酶激活的程序性死亡过程,Caspase可被Fas等细胞表面死亡受体和细胞内线粒体介导的级联反应这两种基本的信号转导通路激活.随着研究的深入,Fas/Fas-L介导的血管细胞的凋亡越来越受到学者的关注,已经成为血管疾病领域的研究热点之一,本文主要概述目前有关Fas/Fas-L介导的血管细胞凋亡的作用、调节机制及对血管疾病影响的研究进展.
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乙肝患者外周血单个核细胞中凋亡分子表达量与肝功能、炎症反应程度的关系
目的:研究乙肝患者外周血单个核细胞中凋亡分子表达量与肝功能、炎症反应程度的关系.方法:选择2014年5月~2016年5月期间在湖北省荆州市中心医院首次确诊为乙型肝炎的56例患者作为研究的CHB组,同期体检的75例健康者作为对照组,采集外周血单个核细胞并测定凋亡分子FAS、FASL、CASP3、CASP8、CASP9的表达量,采集血清并测定肝功能指标ALT、AST、γ-GT、TBIL以及炎症反应指标TNF-α、IL-6、IL-10、IL-17.结果:CHB组患者外周血单个核细胞中FAS、FASL、CASP3、CASP8、CASP9的mRNA表达量和蛋白表达量均显著高于对照组;CHB组患者血清中ALT、AST、γ-GT、TBIL、TNF-α、IL-6、IL-10、IL-17的含量均显著高于对照组且与外周血单个核细胞中FAS、FASL、CASP3、CASP8、CASP9的蛋白表达量呈正相关.结论:乙肝患者外周血单个核细胞中FAS/FASL凋亡通路过度激活且与肝功能损伤程度、炎症反应程度密切相关.
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死亡受体信号传导途径研究进展
死亡受体途径是细胞凋亡的3条主要信号传导通路之一.死亡受体属于肿瘤坏死因子受体(TNFR)基因超家族,其胞外部分有一富含半胱氨酸的区域,胞质区有一由同源的氨基酸残基构成的具有蛋白水解功能的"死亡区域"(death domain,DD),目前已知死亡受体有5种,其凋亡诱导信号途径有3条:CD95/CD95L、TRAIL和TNFR信号转导通路.CD95与其三聚体配体的相关死亡结构域(Fas-associated death domain,FADD)结合再募集caspase-8形成死亡诱导信号复合体(death-inducing signaling complex,DISC),启动凋亡.TRAIL在胞膜上与相应受体结合,经过FADD传递信息后与MORT结构域等一起激活caspases发生凋亡.TNFR通路与NF-κ B等有关.本文将详细阐述它们各自的凋亡诱导过程.
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和厚朴酚通过激活JNK信号通路强化TRAIL的抗肝细胞癌HepG2细胞作用的机制
目的 研究和厚朴酚(HNK)强化肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)抗肝细胞癌HepG2细胞的作用及其机制.方法 常规培养HepG2细胞,首先给予梯度浓度HNK处理,观察其对肿瘤细胞活力的影响;Western blot法检测c-Jun氨基末端激酶(JNK)、死亡受体4(DR4)、 DR5表达水平变化.进而联合应用HNK与TRAIL,观察联合用药对肿瘤细胞活力的影响;检测凋亡相关蛋白表达水平明确凋亡情况.然后釆用JNK抑制剂SP600125阻断JNK通路,明确DR4、 DR5水平变化是否由JNK信号通路介导.后构建裸鼠皮下肿瘤模型,明确在体内水平下,HNK对TRAIL的强化效果.结果 梯度浓度HNK处理细胞后细胞活力剂量依赖性降低(P＜ 0.05);联合应用TRAIL与HNK效果优于单纯用药(P ＜ 0.05);蛋白检测发现,HNK处理后pJNK水平上升,同时TRAIL受体DR4、DR5表达上调.联合应用HNK与TRAIL后,B淋巴细胞瘤因子2(bc12)显著下降而Bc12相关X蛋白(Bax)显著升高.SP600125阻断JNK通路后,与HNK + TRAIL组相比,DR4、DR5表达下降(P＜ 0.05),Bax表达下降而Bc12表达升高.在体内结果显示, TRAIL抑制了皮下肿瘤的生长,联合应用TRAIL与HNK抑制作用增强.结论 HNK可能通过激活JNK通路进而上调DR4、DR5表达来强化TRAIL对HepG2细胞的抑制作用.
关键词： 癌 肝细胞 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 和厚朴酚 c-Jun氨基末端激酶 死亡受体 -
死亡受体途径在丙烯酰胺致PC12细胞凋亡中的影响
[目的] 研究丙烯酰胺诱导神经细胞凋亡及其神经毒作用机制.[方法] 不同浓度水平(0.5 mmol/L,1mmol/L,5 mmol/L,10 mmol/L)的丙烯酰胺染毒后,用免疫细胞化学法检测PC12细胞Fas、Fas-L、TNFR1蛋白表达情况;流式细胞仪定量检测Fas、Fas-L、TNFR1蛋白含量及PC12细胞凋亡情况.[结果] 丙烯酰胺各剂量染毒后PC12细胞凋亡率及Fas、Fas-L、TNFR1蛋白表达与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05).[结论] 丙烯酰胺可能通过死亡受体Fas诱导PC12细胞调亡.
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花椒毒素通过死亡受体途径诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究
目的:探讨花椒毒素对人胃癌SGC-7901细胞体外增殖抑制作用,并从死亡受体途径对其进行机制研究.方法:不同浓度花椒毒素作用于胃癌SGC-7901细胞48h后,MTT法检测花椒毒素对胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制作用;Hoechst 33258染色及AnnexinV-FTTC/PI双染法观察花椒毒素诱导细胞凋亡的形态学变化和早中晚期凋亡的区别;流式细胞术检测死亡受体及其配体Fas/FasL、DR5/TRAIL及Bid蛋白,Caspase-8检测试剂盒检测Caspase-8活性.结果:花椒毒素呈剂量依赖性抑制SGC-7901细胞的增殖,IC50为75.6 μg/ml;花椒毒素作用后贴壁细胞减少,凋亡小体的数量增加,且呈剂量依赖性;给药48h后,DR5/TRAIL的表达升高,在一定浓度范围内Fas/FasL蛋白的表达升高,Caspase-8的活性增强,Bid蛋白活化增多.结论:花椒毒素通过上调DR5/TRAIL的表达,在一定浓度范围内上调Fas/FasL蛋白的表达,启动死亡受体途径,促进Caspase..8的活化,进而激活下游效应因子;活化的Caspase-8可激活Bid蛋白,进入线粒体发挥作用,可能是花椒毒素诱导SGC-7901细胞凋亡的途径之一.
关键词： 花椒毒素 SGC-7901细胞 死亡受体 凋亡机制 -
抗人DR5单克隆抗体mDRA-6对HL-60细胞的诱导凋亡作用
目的 观察抗死亡受体5(DR5)单克隆抗体nDRA-6对HL-60细胞的凋亡作用.方法 制备抗人DR5单克隆抗体mDRA-6;荧光显微镜下观察mDRA-6作用后HL-60细胞的形态变化;MTT法测定不同浓度mDRA-6在不同作用时间对HL-60细胞存活的影响;通过FITC-Annexin V及PI标记细胞,以流式细胞仪检测mDRA-6对HL-60细胞凋亡率的影响;琼脂糖凝胶电泳检测mDRA-6对HL-60细胞DNA片段化的影响.结果 mDRA-6导致HL-60细胞染色质浓缩、断裂,细胞出芽,凋亡小体形成;mDRA-6对HL-60细胞具有明显的杀伤作用,24ng/mL mDRA-6作用HL-60细胞10 h,细胞死亡率达21.2%;1μg/mL的mDRA-6作用8 h,可使HL-60细胞死亡44.1%;Annexin V及PI双染显示,10μg/mL mDRA-6作用2 h,HL-60细胞的凋亡率达48.1%;20μg/mLmDRA-6作用HL-60细胞3 h,DNA琼脂糖凝胶电泳显示明显的"梯形"条带.结论 抗DR5单克隆抗体mDRA-6具有诱导HL-60细胞凋亡作用.
关键词： 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 死亡受体 凋亡 抗体 -
肿瘤坏死因子受体超家族成员死亡受体在病毒感染中的作用
死亡受体是一组具有死亡结构域的膜受体,属于肿瘤坏死因子受体超家族成员.表达死亡受体的细胞与其相应的配体结合后可引发细胞凋亡,因此死亡受体参与机体的多种生理和病理过程,特别是在多种病毒感染中发挥着双重作用,本文就新发现的死亡受体在肝炎病毒、HIV以及巨细胞病毒等多种病毒感染中的作用作一综述.
关键词： 肿瘤坏死因子受体超家族 死亡受体 病毒感染 -
肝脏中死亡受体的生物学和病理生物学作用
死亡受体通过细胞内信号传导途径可诱导细胞凋亡,与机体的生长、发育、病变和死亡有关.本文对新近研究发现的死亡受体的种类、结构特征及其诱导细胞凋亡的机理进行了综述,并讨论了这些死亡受体在肝脏中的生物学和病理生物学作用.
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死亡受体DR4和DR5基因多态性与克罗恩病的相关性
目的 探讨死亡受体(death receptor,DR)4和DR5基因多态性与克罗恩病(Crohn's disease,CD)的相关性.方法 收集295例CD患者和490名对照者,采用SNaPshot技术检测DR4(rs13278062和rs20575)及DR5 (rs1047266)3种单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP).经非条件Logistic回归分析各SNP的突变等位基因和基因型频率在CD组与对照组之间的差异,以及对CD患者临床病理特征的影响.采用Haploview 4.2和R语言软件包进行连锁不平衡及单倍型分析.构建基因-基因交互模型,分析上述3个SNP是否对CD具有协同影响.结果 CD组中DR4 (rs13278062)的突变等位基因(T)和基因型(GT+TT)频率均高于对照组(37.12％ vs.32.04％,P=0.040,95％CI:1.010～1.550;62.71％ vs.54.90％,P=0.032,95％CI:1.028～1.855),而DR4 (rs20575)和DR5 (rs1047266)的突变等位基因和基因型频率在两组之间比较差异均无统计学意义(均P＞0.05).CD患者按"蒙特利尔分型标准"分层,经两两比较校正检验水准后(P＜0.0125),与回结肠型CD相比较,结肠型和回肠末段型CD中DR4 (rs13278062)的突变等位基因(T)和基因型(GT+TT)频率均显著偏高[(结肠型/回结肠型:41.04％ vs.25.64％,P=0.002,95％CI:0.315～0.778;66.04％ vs.41.03％,P=0.001,95％CI:0.196～0.655);(回肠末段型/回结肠型:41.44％ vs.25.64％,P=0.002,95％CI:0.311～0.762;74.77％ vs.41.03％,P＜0.001,95％CI:0.126～0.437)].与穿透型CD相比,狭窄型CD中DR4 (rs13278062)的突变等位基因(T)和突变基因型(GT+TT)频率均显著降低(32.29％ vs.48.91％,P=0.007,95％CI:0.300～0.828;57.29％ vs.86.96％,P=0.001,95％CI:0.078～0.520);非狭窄非穿透型CD中DR4 (rs13278062)的突变基因型(GT+TT)频率亦显著降低(58.82％ vs.86.96％,P=0.001,95％CI:0.086～0.536).单倍型分析发现DR4 (rs20575)-DR4 (rs13278062)构建的单倍型CT在CD组中的频率高于对照组(37.1％vs.31.8％,P=0.029,OR=1.279,95％ CI:1.022～1.600).基因-基因交互模型分析显示DR4(rs13278062)的突变基因型(GT+TT)与DR5 (rs1047266)的突变基因型(CT+TT)可能对CD具有负交互影响(B=-0.483,OR=0.617,P=0.030).结论 DR4 (rs13278062)基因突变不仅可能增加CD的发病风险,还可能影响CD患者的疾病部位和疾病行为.DR4 (rs20575)和DR4 (rs13278062)两个SNP位点构建的单倍型CT可能是CD的危险因子.DR4 (rs13278062)和DR5 (rs1047266)两个SNP位点的基因突变可能对CD具有负交互影响.
关键词： 克罗恩病 死亡受体 TNF相关凋亡诱导配体 基因多态性 -
地榆皂苷Ⅱ抑制肿瘤细胞增殖和诱导其凋亡的作用
目的 检测地榆皂苷Ⅱ对多种肿瘤细胞的体外增殖抑制作用,研究地榆皂苷Ⅱ诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制.方法 采用SRB法检测地榆皂苷Ⅱ对肿瘤细胞的体外增殖抑制,通过Western blot来研究地榆皂苷Ⅱ对三大凋亡通路的影响.结果 地榆皂苷Ⅱ可上调MDA-MB-231细胞中活性氧的水平,上调CHOP的表达,激活内质网应激途径;下调Bcl-2的表达,上调Bax的表达,激活线粒体凋亡途径;上调DR4、DR5的表达,激活TRAIL外源凋亡通路.结论 地榆皂苷Ⅱ通过激活三大细胞凋亡通路来抑制肿瘤细胞的增殖,促进肿瘤细胞的凋亡.
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TRAIL选择性诱导细胞凋亡的作用机理及意义
TNF为一庞大的家族，到目前为止发现的TNF家族成员主要有：TNFα、TNFβ、LTα、LTβ、CD30L、CD27L、CD40L Fas、OX-40L、4-IBBL，以及TRANCE(TNF-Related Activation-Induced Cytokine)和TRAIL(TNF-Related Apoptosis-Inducing Ligand)等。其中TRANCE和TRAIL是新近发现的TNF家族成员。大多数TNF家族成员为II型跨膜蛋白质，即C末端在胞外区，且C末端有一同源三聚体。TNF家族成员具有多种多样的生物学功能，如具有细胞毒性及抗病毒活性，并参与免疫应答和免疫调节等。在这些功能中，有的是通过TNF成员诱导凋亡来实现的，如TNF就是通过诱导B细胞、CD＋４T细胞、CD＋８T细胞的凋亡来发挥其免疫应答和免疫调节作用的。TRAIL是新近几年发现的TNF家族成员之一。它也可以引起细胞凋亡，而且它引起的凋亡具有选择性，主要引起肿瘤细胞的凋亡，而不影响正常体细胞的生长分化。本文拟就其在诱导细胞凋亡中的作用机制和意义作一综述。1 通过受体途径实现其选择性诱导细胞凋亡的作用1.1 TFAIL［1］ TRAIL又称Apo-2L(Apoptosis-2 Ligand)，1996年由Pitti RM等人首先分离和鉴定。它含有281个氨基酸残基，分子量为32.5KD，等电点为7.63，在传染的细胞株中以II型跨膜蛋白的形式表达在细胞的表面，其胞外区(C末端)有一同源三聚体的亚单位结构，可水解形成可溶性TRAIL，可溶性的TRAIL缺少跨膜区和胞内区，N末端无信号肽结构。TRAIL与其它TNF家族成员具有较高的同源性，其同源性为：Fas23%、CD40L 20.8%、TLα 20.2%、LTβ 19.6%、TNF 10%、CD30L、CD27L各15.5%、OX-40L 14.3%、4-IBBL 13.7%)，并在许多正常组织中均有表达。体外实验表明，TRAIL在体外可存在各种来源的细胞株，如婴儿的肝、肾、肺；成人的脾、淋巴结、小肠、结肠、前列腺等。另外在T淋巴细胞、NK细胞等表面都存在着TRAIL。当然，在不同的肿瘤组织中均有TRAIL表达。但为什么TRAIL可以诱导肿瘤细胞凋亡，而对正常细胞的生长分化却没有影响呢?［2］这与TRAIL的受体分布有关。1.2 TRAILR(TRAIL Receptor) 目前发现的TRAILR共有四种：TRAILR1、TRAILR2、TRAILR3和TRAILR4。其中TRAILR1和TRAILR2因含有死亡结构域(Death Domain DD)而分别被称为死亡受体4(Death Receptor4)和死亡受体5(Death Receptor5)，目前研究比较清楚的死亡受体还有DR3为一细胞因子受体，分布于富含淋巴细胞的组织和器官中，表现出诱导细胞凋亡和激活转录因子NFkB两种生物活性。TRAILR3又称诱捕受体1(Decoy Receptor1)，TRAILR4又称诱捕受体2(Decoy Receptor2)。 TRAILR1［3］由468个aa组成，其N端具有信号肽结构。胞外区含有两个半胱氨酸丰富的重复区，胞内区含有死亡结构域，这是一个由77个aa组成的功能区，与TNFR1、DR3和FAS的死亡功能区具有较高的同源性。TRAILR1中死亡功能区的氨基酸序列相对保守。它在正常组织如脾，外周血白细胞、小肠、甲状腺、活化的T细胞等以及肿瘤组织中均有表达。TRAILR1可以选择性地结合TRAIL，同时有实验表明，过度表达的TRAILR1能够不依赖相应配体而直接诱导细胞的凋亡。 TRAILR2［4-7］含有411个氨基酸，为I型跨膜糖蛋白结构。与TRAILR1相似，其N端为信号肽，胞外区也存在两个富含半胱氨酸的重复区，胞内为死亡结构域，与TRAIL-R1有很高的同源性，它在MCF7细胞和Hela细胞中过度表达能诱导这些细胞凋亡。其诱导凋亡作用可以被Caspase的抑制剂CrmA和2-VAD-fmk抑制，提示它可能通过激活Caspase家族引起凋亡。 TRAILR3［6］由259个aa组成，其显著的结构特点是没有胞内区即不含有死亡功能区，而只有信号肽、含有两个半胱氨酸丰富的重复区的胞外区以及跨膜区，实验表明它与TRAIL的亲合力与TRAILR1和TRAILR2相近，可溶性的TRAILR3能够抑制TRAIL诱导的凋亡，当其过度表达时则不能在体外诱导细胞的凋亡。该受体在人的正常组织分布广泛，常分布于心脏、肺、肝、肾、骨髓、脾、胎盘中而多数癌细胞上则不存在该受体。 TRAILR4［8，9］由386个氨基酸组成，胞外功能区与其它3个TRAIL受体具有高度同源性，可达58%左右。其C末端的胞内仅含有死亡功能区的1/3，故与TRAIL结合之后不能介导凋亡，而有实验表明其有抑制TRAILR1和TRAILR2介导的凋亡的作用。TRAILR4在许多正常组织具有表达而在许多肿瘤组织中表达缺如。1.3 TNF受体结合蛋白FADD(TNFR1 Associated Death Domain Protein)［10］ FADD又称MORT-1，它含有208个氨基酸残基，分子量23kD，其C端含有一个死亡结构域，它可以通过这一死亡结构域与TRAILR1和TRAIL受体的死亡结构域相互识别和结合。在其N端含有一个特异的结构域，该结构域称为MORT结构域或死亡效应结构域，通过它可以和ICE/CED3蛋白酶家族的新成员——MACH/FLICE(caspase 8)［11-13］结合，从而诱导细胞凋亡。研究表明MORT结构域具有转导细胞凋亡信号的作用。1.4 TRAIL受体途径诱导肿瘤细胞凋亡的机理 TRAIL的生物学效应是通过与结合于细胞膜上的相应受体而产生的。TRAILR与TRAIL结合后常形成形成寡聚体(多为三聚体)，这种寡聚体可使胞浆内的死亡功能区彼此靠近、聚集，从而诱使胞浆内的Caspase级联式反应发生。Walczak henning等人的实验表明：TRAILR是通过FADD来传递信号的，其可能机制是：被激活的TRAILR通过死亡结构域之间的相互识别和作用与FADD结合，FADD再通过它的MORT结构域同MACH/FLICE(caspase8)结合，从而激活caspase8的ICE/CED3蛋白活性，后者再激活其它的ICE/CED3蛋白酶。此外，FADD的表达尚可引起神经酰胺［14］浓度的升高，后者可以作为第二信使传递信号，起到激活CED-3/ICE样蛋白激酶CPP32的作用。 对正常的组织细胞而言，在表达TRAILR1和TRAILR2的同时也表达TRAIL3和TRAILR4，由于RAILR3没有死亡功能区所以不能诱导细胞凋亡；TRAILR4的死亡功能区不完整，所以也不能诱导细胞凋亡，实验表明二者还能抑制TRAILR1和TRAILR2诱导的凋亡，因而TRAIL对正常的组织细胞没有明显的损伤作用。而在肿瘤细胞中，TRAILR3和TRAILR4则常常缺乏表达，所以容易出现凋亡。这种死亡受体和诱捕受体表达上的差异性正是导致肿瘤细胞凋亡，而正常细胞受诱捕受体的保护免遭凋亡的原因。
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标记死亡受体5、诱捕受体2地高辛探针
目的 标记死亡受体5(death receptor-5,DR5/TRAILR2)和诱捕受体2(death decoy receptor 2,DcR2/TRAILR4)地高辛探针.方法 查阅核酸序列数据库上DR5和DcR2的基因全序列,计算机辅助设计引物,RT-PCR扩增目的条带,用地高辛(Digoxin,DIG)进行标记,制作DR5和DcR2地高辛探针.结果 地高辛标记的DR5和DcR2电泳能力下降,标记成功.结论 死亡受体5,诱捕受体2地高辛探针的标记成功为进一步研究其与喉鳞状细胞癌的关系奠定了一定的基础.
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热诱导肿瘤细胞凋亡的机制研究进展
热疗是新兴的肿瘤疗法,已应用于临床,其主要是基于热疗可导致肿瘤细胞发生凋亡的作用.热疗在分子水平是如何实现促进肿瘤细胞凋亡的,目前仍没有定论.汇总近期相关研究,旨在探讨热疗促进肿瘤细胞凋亡的分子机制.
