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Hsa-miR-145对人三阴性乳腺癌细胞侵袭和迁移的影响
目的 探讨Hsa-miR-145对人三阴性乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响,并初步分析其影响三阴性乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的可能机制.方法 运用脂质体介导的转染方法将miR-145阻遏物(miR-145 inhibitors)转染人三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231,以inhibitor negative control(inhibitor NC)作为阴性对照,通过MTT法和Transwell侵袭实验检测细胞的增殖能力和侵袭力;采用Transwell迁移实验及划痕试验检测细胞的迁移能力;利用生物信息学方法预测miR-145的靶基因,并对其靶基因进行基因功能分析.结果 (1)miR-145 inhibitors组细胞增殖活性明显高于inhibitor NC组(P<0.05);(2)划痕后miR-145 inhibitors组细胞迁移能力比inhibitor NC组明显增强(P<0.05);(3)Transwell侵袭及迁移实验均显示转染miR-145 inhibitors后,MDA-MB-231细胞的侵袭及迁移能力明显增强(P<0.01,P<0.05);(4)生物信息学方法预测miR-145的靶基因中,部分发挥了促进细胞增殖、侵袭及迁移的生物学功能.结论 (1)miR-145对人三阴性乳腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力可能存在负性调控作用;(2)miR-145可能通过多种靶基因发挥其对肿瘤的调控作用.
关键词： 乳腺肿瘤 微RNAs MiR-145 Transwell侵袭及迁移 -
MicroRNA let-7与MMP-2在非小细胞肺癌中的表达及相关性研究
目的 分析非小细胞肺癌中MicroRNA let-7与基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达及临床意义,探讨其在肺癌发生及发展中的作用及相关性.方法 采用免疫组化和Western blot检测46例肺癌及配对的癌旁组织中MMP-2的表达,用实时定量PCR检测46例肺癌组织及配对的癌旁组织中let-7和MMP-2的表达,Spearman等级相关分析检测两者的相关性.结果 免疫组化结果示46例非小细胞肺癌组织中MMP-2阳性表达30例(65.2%).MMP-2表达与患者性别、年龄、肿瘤类型无关(P>0.05),与肿瘤临床分期有关(P<0.05),与淋巴结转移有关(P<0.05).Western blot示MMP-2在肺癌中表达高于癌旁正常组织.实时定量PCR示let-7在非小细胞肺癌组织中与配对的癌旁组织比较表达降低的为29例(63.0%),MMP-2高表达的为31例(67.4%).46例肺癌组织中,let-7与MMP-2表达负相关(rs=-0.433,P<0.05).结论 MMP-2及let-7在肺癌中的表达存在异常,let-7作为抑癌因子它的低表达可能与MMP-2的高表达有关,两者之间可能存在某种协调关系.
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筛选舌鳞癌中差异表达的miRNA
目的：应用miRNA芯片技术检测舌鳞癌组织中差异表达的miRNA，高通量筛选与舌鳞癌相关的miRNAs。方法应用Agilent miRNA芯片比较舌鳞癌和正常舌组织中miRNAs差异表达谱，然后在扩大的样本中用荧光定量PCR（qRT-PCR）对部分差异表达的miRNAs进行验证。结果与正常舌组织相比，有95个miRNAs在舌鳞癌中异常表达（差异4倍以上），其中52个基因表达水平增高，43个基因表达水平下降。hsa-let-7a、hsa-let-7c、hsa-let-7d经qRT-PCR验证与miRNA芯片结果一致，即在舌鳞癌中表达下降。结论 hsa-let-7a、hsa-let-7c、hsa-let-7d可能参与了舌鳞癌的发生过程。
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肾小管上皮细胞转分化时MicroRNA表达变化和丹酚酸B干预效应
目的 观察转化生长因子(TGF)-β1诱导肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)时microRNA(miRNA)表达谱的变化及丹酚酸B的干预效应.方法 体外培养人近端肾小管上皮细胞系细胞(HK-2),分为3组:(1)对照组:细胞培养基中未加入丹酚酸B或者TGF-β1; (2) TGF-β1组:细胞培养基中加入TGF-β1; (3)丹酚酸B干预组:细胞培养基中分别加入丹酚酸B(50 μmol/L)和TGF-β1(浓度为5 ng/ml).采用基因芯片和RT-PCR检测各组细胞miRNA的表达变化.结果 (1)与正常HK-2细胞比较,TGF-β1组有118种miRNA的表达出现显著改变,其中28种表达下调2倍以上,90种表达上调2倍以上.(2)与TGF-β1组比较,丹酚酸B干预组有256种miRNA的表达出现显著改变,其中172种表达下调2倍以上,84种表达上调2倍以上.(3)有19种miRNA表达在两组同时出现显著改变,其中8种在TGF-β1组明显下调,而在丹酚酸B干预后明显上调,11种在TGF-β1组明显上调,而在丹酚酸B干预后则明显下调.结论 肾小管EMT时伴有miRNAs表达谱的明显变化,部分miRNA的表达变化与丹酚酸B的干预密切相关,可能成为治疗肾间质纤维化新的靶点.
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微小 RNA29调节小鼠肝脏缺血再灌注损伤的研究
目的探讨微小RNA29（miR-29）在小鼠肝脏缺血再灌注损伤（IRI）模型中的保护作用及机制。方法建立小鼠肝脏缺血再灌注模型，将16只雄性成年ICR小鼠随机分为两组：假手术组（对照组，n＝8）和缺血再灌注损伤组（IRI组，n＝8）。通过比较两组血清谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）变化以及光镜观察肝脏组织病理学改变鉴定模型；采用定时定量PCR法（ real time PCR ）比较两组肝脏组织的miR-29表达；蛋白免疫印迹法（ Western blot ）检测肝脏组织中miR-29的潜在靶向抑制基因A20的蛋白表达水平。结果与对照组相比IRI组ALT和AST明显升高（ P＜0.01），肝组织呈现明显的IRI病理改变；IRI组肝脏miR-29表达较对照组降低约20％（ P＜0.05），而A20表达水平明显上调。结论小鼠肝脏IRI后miR-29显著下降，伴随A20的表达上调，miR-29的降低可能通过对靶基因A20的负调控减弱IRI，从而对肝脏起保护作用。
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MicroRNAs 的失调在高转移肝细胞癌中的作用
目的：筛选在高转移肝细胞癌中差异表达的miRNAs图谱。方法利用Agilent miRNA array芯片技术平台分析比较了4对高转移肝细胞患者的癌组织样本与其相对应的正常组织之间的差异miRNAs。通过生物信息学方法分析了这些候选差异 miRNAs。结果与正常组织相比，我们在高转移肝细胞癌中发现了22个失调的miRNAs，其中包括13个上调的miRNAs（miR-200a、miR-425、miR-221和miR-20b等）和9个下调的miRNAs（miR-762、miR-638和miR-1305等）。其中，一些miRNAs已经被报道与肿瘤的发生和转移相关。靶基因预测分析也表明，这些基因在肿瘤的发生和转移过程中扮演着重要的作用。结论我们在高转移肝细胞癌中发现了一些表达失调的 miRNAs，生物信息学分析也发现这些 miRNAs 在肿瘤的发生和转移中发挥着重要的作用，可以作为肝细胞癌在临床治疗上的一个新的肿瘤标志物。
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microRNA-181b 影响 U87胶质瘤细胞干细胞对替莫唑胺化疗耐受性的实验研究
目的本研究旨在建立miR-181 b慢病毒载体感染U87胶质瘤干细胞模型后，检测其对TMZ化疗耐受性的变化，并探讨miR-181 b对于恶性脑胶质瘤（ GBM ）辅助化学治疗的意义。方法通过miR-181 b慢病毒表达载体转染U87胶质瘤干细胞，提高miR-181 b在U87胶质瘤干细胞中的表达。进一步通过RT-PCR、二次神经球形成实验、琼脂糖集落形成实验、MTT实验来分析miR-181 b对于 U87胶质瘤干细胞在TMZ化疗耐受性方面的作用。结果 miR-181 b慢病毒表达载体转染U87胶质瘤干细胞后，U87胶质瘤干细胞中的miR-181b明显上调，而且U87胶质瘤干细胞的生长受到明显抑制；miR-181b可以加强TMZ抑制U87胶质瘤干细胞的生长的作用。结论 miR-181b可以加强TMZ抑制U87胶质瘤干细胞的生长，miR-181b可能对于提高U87胶质瘤干细胞对TMZ的敏感性，降低化疗耐受性起到一定作用。
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miR-223对结肠癌SW480细胞生物学行为的影响
目的 观察miR-223对结肠癌SW480细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响.方法 PLL3.7-miR-223和PLL3.7-miR-EV质粒转染SW480细胞,Real-time PCR检测转染24h后miR-223的表达变化,CCK-8试剂盒检测转染12、24、48 h后细胞的增殖能力,流式细胞仪分析转染48 h后细胞周期和凋亡情况,Western blot检测IGF-1R、AKT蛋白表达情况.结果 转染24 h后,Real-time PCR检测结果显示PLL3.7-miR-223转染组miR-223的表达量(6.55±2.04)较PLL3.7-miR-EV(以其miR-223的表达量为1)明显上调(P＜0.01).与对照EV组相比,SW480细胞在转染miR-223后生长明显受到抑制,细胞周期在G1期发生阻滞[(61.61±4.02)％vs.(35.99±1.62)％],凋亡增加明显[(67.43±4.75)％vs.(44.23±3.11)％],均P＜0.01,并且能够降低生长相关蛋白IGF-1R及细胞凋亡相关蛋白AKT的表达.结论 miR-223可以通过调节IGF-1R和AKT的表达影响结肠癌细胞SW480的增殖、细胞周期和凋亡.
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磁性分选肺腺癌始动细胞的异常miRNAs验证
目的：利用磁性活细胞分选法（magnetic activated cell sorting，MACS）从人A549肺腺癌细胞中分离得到CD133＋标记细胞，通过CD133/CD326双阳性检测探讨分离效果，初步分析差异表达miRNAs对该亚群细胞的调控功能。方法将对数生长期的A549细胞离心收集，重悬于无血清培养基中，培养至第二代后利用CD133磁珠标记后分选，流式细胞术及免疫荧光验证分选后细胞的CD133/CD326双阳性率；结合前期实验miRNA芯片结果，挑选兴趣分子进行定量PCR验证。结果利用CD133磁珠分选得到的阳性细胞亚群高表达CD133/CD326分子，结合前期miRNA芯片结果，选出在CD133＋/CD326＋细胞亚群中表达上调的miR-663，miR-183，miR-125a-5p，miR-127，miR-520h及表达下调的miR-18b，miR-29ab，miR-17和miR-155行定量PCR检测证实miR-29ab，miR-155，miR-183，miR-127-3p及miR-17的表达趋势与芯片结果相符。结论利用磁珠分选方式能获得CD133＋/CD326＋高表达肺腺癌始动细胞亚群且包括miR-183等在内的6条分子与芯片结果一致，可能在肺腺癌始动细胞生物学行为的调控中发挥重要作用。
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微小RNA-21和转化生长因子β1在急性呼吸窘迫综合征大鼠肺纤维化组织中的表达变化
目的：检测微小RNA-21（miR-21）和转化生长因子β1（TGF-β1）在脓毒症诱导急性呼吸窘迫综合征（ARDS）大鼠肺纤维化组织中的表达变化。方法将72只大鼠分为对照组和实验组，每组36只。对照组大鼠仅开腹后关腹处理；实验组大鼠采用盲肠结扎-穿孔法建立ARDS模型。每组大鼠分别于术后12h、1d、2d、3d、4d、5d时间点各处死6只大鼠。取大鼠左肺组织用于苏木精-伊红（HE）染色，镜下观察肺组织结构变化，免疫组织化学法检测TGF-β1表达。取右肺组织，应用PCR法检测大鼠肺组织miR-21表达情况。结果各实验组大鼠术后较相应对照组出现活动明显减少，反应迟钝，呼吸急促。显微镜下，对照组大鼠肺组织未见明显炎症细胞浸润和肺实质胶原沉积。实验组大鼠肺组织可见大量炎症细胞及红细胞渗出，成纤维细胞明显增多并可见纤维组织增生。实验组大鼠肺组织miR-21表达水平术后2~5 d与同时间对照组相比均显著增高（t=7.121、5.330、6.513、19.371，P均＜0.05）。对照组各时间点阳性细胞数均为0，实验组大鼠术后1~5 d肺组织TGF-β1表达阳性率分别为22.64％、32.69％、36.20％、38.32％、45.64％。结论miR-21和TGF-β1在ARDS所致的肺纤维化组织中表达升高，提示miR-21和TGF-β1在ARDS大鼠的肺纤维化形成中起着重要作用。
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微小RNA-320检测在体外循环所致急性呼吸窘迫综合征中的临床价值及其机制研究
目的 研究微小RNA(microRNA)在体外循环(CPB)诱导的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者中表达,并初步探讨其机制.方法 设定体外循环转流开始前(T1)、转流结束后4 h (T2)、术后8 h(T3)、术后16 h(T4)等4个时间点,采用microRNA微阵列芯片分析32例因CPB诱发ARDS患者microRNA变化,并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术加以验证.酶联免疫分析法检测患者肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)在T1~T4等4个时间点的水平变化,同时计算呼吸指数和氧合指数.Pearson相关性分析研究microRNA-320(miR-320)与TNF-α、IL-6、呼吸指数、氧合指数、Murray急性肺损伤评分以及急性病生理学和长期健康评价(APACHE)Ⅱ评分的相关性.体外培养人肺腺癌A549细胞,并转染pcDNA3.1-miR-320,采用细胞增殖检测试剂盒8(CCK-8)法和流式细胞术分析pcDNA3.1-miR-320转染对A549细胞48 h存活和凋亡率的影响.结果 在T1与T4时间点,ARDS患者血液标本中共有8个microRNA表达差异有统计学意义(t=28.313、30.014、25.313、20.312、29.442、21.443、18.427、22.369,P均<0.001),其中5个出现降低,3个出现增高,其中miR-499的降低程度(0.28 ± 0.09)为显著,而miR-320的增高程度(1.62 ± 0.12)为显著(P均<0.05).qRT-PCR证实从T1至T4时间点,miR-320相对表达水平(1.00、1.14 ± 0.07、1.34 ± 0.06、1.71 ± 0.08)逐渐升高,差异有统计学意义(F=20.648,P<0.05).CPB诱发ARDS的患者T1与T4时间点相比,TNF-α[(110 ± 10)ng/L vs.(254 ± 16)ng/L]、IL-6[(86 ± 8)ng/L vs.(165 ± 11)ng/L]、呼吸指数[(0.182 ± 0.021)vs.(0.381 ± 0.032)]均增高,氧合指数[(350 ± 22)vs.(245 ± 18)]下降,差异均有统计学意义(P均<0.05).Pearson相关性分析发现,miR-320的表达水平与Murray急性肺损伤评分,APACHEⅡ评分,T4时间点TNF-α、IL-6、呼吸指数均呈正相关(r = 0.685、0.744、0.737、0.711、0.846,P 均 < 0.05),而与氧合指数呈负相关(r =-0.745, P<0.05).pcDNA3.1-miR-320转染的A549细胞组与对照组48 h细胞存活率 [(82% ± 8%)vs. 100%]、凋亡率[(20.0% ± 1.1%)vs.(9.4% ± 0.8%)]相比,差异均具有统计学意义(P均<0.05).结论 miR-320水平与TNF-α、IL-6等肺部损伤指标具有相关性,miR-320的高表达可能介导CPB导致的ARDS,作用机制为诱导肺泡上皮细胞的凋亡,因此miR-320具有临床诊断、评估ARDS生物学指标的潜能.
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冠状动脉粥样硬化性心脏病患者血浆的miR-125b-5p水平与病变程度相关性初探
目的探讨冠状动脉粥样硬化性心脏病患者血浆中miR-125b-5p表达水平用于评估冠状动脉病变程度的临床价值.方法采用病例对照研究,选取南通大学附属医院2014年2月至2015年8月冠状动脉粥样硬化性心脏病住院患者80例,根据冠状动脉造影结果分为冠状动脉无狭窄组31例,冠状动脉狭窄组49例.所有患者又分为稳定型心绞痛组20例,不稳定型心绞痛组25例,非ST段抬高性心肌梗死和ST段抬高性心肌梗死组35例.在入院行冠状动脉造影前采集血浆应用实时荧光定量PCR技术检测miR-125b-5p的表达水平,采用独立样本t检验和方差分析比较各组间血浆miR-125b-5p的表达差异.结果冠状动脉无狭窄组miR-125b-5p的表达水平(0.95±0.12)明显高于冠状动脉狭窄组(0.35±0.10)(t=24.179,P<0.0001);随着冠状动脉病变支数的增多,miR-125b-5p的表达水平逐渐降低;非ST段抬高性心肌梗死和ST段抬高性心肌梗死组与不稳定型心绞痛组、稳定型心绞痛组等患者血浆miR-125b-5p差异有统计学差异(t=8.399,P<0.0001;t=13.067,P<0.0001).miR-125b-5p表达水平与Gensini积分呈负相关(R2=0.822,P<0.05).miR-125b-5pROC曲线下面积(AUC)为0.86(95％CI0.67～0.90),当取0.66为诊断界值时,诊断敏感度为81.22％,特异度为78.62％.结论血浆miR-125b-5p随冠状动脉粥样硬化性心脏病狭窄支数增多,其表达水平逐渐降低,并且miR-125b-5p的表达水平与冠状动脉Gensini积分呈负相关,提示miR-125b-5p的表达水平可能是评估冠状动脉病变程度的潜在标志物.
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MiR-25对三阴乳腺癌侵袭转移的影响及其潜在机制
目的 探讨微小RNA-25(miR-25)在三阴乳腺癌患者血浆、组织和细胞系中的表达情况及其对三阴乳腺癌侵袭转移影响的潜在分子机制.方法 横断面研究.运用实时荧光定量PCR检测86例三阴乳腺癌患者和38名正常对照者血浆中miR-25的水平;应用LinkedOmics网站分析平台分析三阴乳腺癌与非三阴乳腺癌样本中miR-25的水平;同时用定量PCR检测三阴乳腺癌细胞系中miR-25的表达情况;运用划痕和Transwell实验检测miR-25抑制剂或对照转染后,三阴乳腺癌细胞系迁移和侵袭能力的变化;应用荧光素酶报告基因技术验证1-磷酸鞘氨醇磷酸化酶SGPP1是否为miR-25的靶基因;采用SGPP1过表达质粒和miR-25过表达质粒共同转染MDA-MB-231细胞,运用划痕和Transwell实验检测其对细胞迁移和侵袭能力的影响;免疫印迹Western blot检测SGPP1蛋白水平的变化.正态分布的组间样本均数比较用Student′s t检验.结果 86例三阴乳腺癌患者血浆中miR-25的水平明显高于正常对照组(P为0.031);LinkedOmics网站分析平台分析显示,三阴乳腺癌标本中的miR-25表达水平明显高于常见的非三阴乳腺癌Luminal A型和Luminal B型(P分别为<0.001和0.006);在三阴乳腺癌细胞系HS578T、HCC1806、MDA-MB-231和BT549中miR-25的表达均明显高于乳腺上皮细胞系HBL-100(P分别为0.006、0.01、0.029和0.046);划痕实验显示,在MDA-MB-231和HS578T细胞中转染miR-25抑制剂后,较对照组相比,伤痕愈合率受到明显抑制(P分别为0.035和0.001);Transwell实验表明,转染miR-25抑制剂的MDA-MB-231和HS578T的细胞侵袭能力明显低于阴性对照组(P分别为0.002和0.001);LinkedOmics平台分析显示,三阴乳腺癌患者癌组织中miR-25与SGPP1表达呈负相关(P为0.037);双荧光素酶报告基因证实,SGPP1是miR-25的直接靶基因;抑制miR-25能增加SGPP1的蛋白水平;共转染SGPP1过表达质粒和miR-25过表达质粒能明显削弱miR-25过表达引起的细胞迁移和侵袭能力的促进作用(P均为0.002).结论 miR-25在三阴乳腺癌患者血浆、组织和细胞系中均高表达;抑制miR-25能明显抑制三阴乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力;miR-25可通过靶向SGPP1参与到其对三阴乳腺癌迁移和侵袭的调控中.
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肝细胞肝癌患者循环 microRNA－21水平的研究
目的：探讨肝细胞肝癌患者血浆microRNA－21（ miR－21）水平的变化及其临床意义。方法病例对照研究，采用实时荧光定量PCR检测河南省人民医院2014年1至6月收治的60例肝细胞肝癌（ HCC）患者、71例肝硬化（ LC）患者及52名健康体检者（ HV）血浆miR－21表达量并计算miR－21相对表达量。通过分析受试者工作特征曲线（ ROC）判断miR－21表达水平在肝癌诊断中的敏感度和特异度。两样本均数比较采用t检验。结果 HCC组患者血浆miR－21相对表达量（2．6±1．1）均高于LC组（1．6±0．9）和HV组（1．0±0．6），差异有统计学意义（HCC组与LC组比较t＝5．322，P＝0．004；HCC组与HV组比较t＝8．349，P＝0．0003）。 HCC患者血浆miR－21相对表达量与肿瘤分化和大小相关，差异有统计学意义（tdif ＝3．366，P＝0．019；tsize ＝3．490，P＝0．012），与TNM肿瘤分期、肿瘤数量、AFP浓度无相关，差异无统计学意义（ tTNM ＝1．103，P＝0．274；tnum ＝1．682，P＝0．097；tAFP ＝1．756，P＝0．084）。 ROC分析miR－21相对表达量在HCC组与HV组比较中敏感度为89．5％，特异度为81．8％，曲线下面积（ AUC）为0．934；miR－21在HCC组与LC组比较中敏感度为70．0％，特异度为65．3％，AUC为0．796。结论肝细胞肝癌患者血浆中miR－21高表达，可能对肝细胞肝癌的临床诊断有意义。（中华检验医学杂志，2015，38：484－486）
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甲状腺结节组织和血浆miRNAs的差异表达及相关性分析
目的：研究甲状腺结节组织、血浆中miRNA表达谱的差异变化，分析甲状腺结节组织、血浆中miRNA表达的相关性，探讨血浆miRNA作为甲状腺结节标志物的潜在价值。方法病例对照研究。选择2015年5至7月在北京中医药大学东直门医院进行甲状腺结节手术女性患者5例；同期来院体检的女性，B超诊断为甲状腺结节的患者16例，无甲状腺结节的正常健康女性15名。采用miRNA芯片技术，对正常甲状腺组织（ n＝5）及甲状腺结节组织（ n＝5）中miRNA的表达谱进行比较，筛选甲状腺结节组织中差异性表达的miRNA。利用qRT－PCR的方法，在甲状腺结节患者（ n＝16）及无结节的健康人（ n＝15）的血浆中验证差异表达的miRNA。两组均数比较采用t检验；相关分析采用Pearson相关分析法。结果与正常甲状腺组织相比，在甲状腺结节组织中有57个miRNAs发生了差异性表达（ t＝3．637，3．821，4．907，3．383，－5．516，4．332，－4．993，3．980，5．208，－2．981，2．840，4．945，4．945，－2．927，－3．561，－4．665，3．161，3．363，4．846，3．834，2．826，－3．868，3．816，2．802，5．511，3．772，－4．424，3．420，3．199，4．320，4．053，4．997，－3．292，5．304，－3．281，－3．262，－4．128，－2．963，4．228，2．949，4．436，2．796，3．199，－4．636，4．091，3．633，3．481，－5．344，4．753，－3．766，－5．340，4．888，－4．631，5．511，2．921，－3．042，－4．935， P＜0．05），34个miRNA表达上调，23个miRNA表达下调。其中表达上调＞1．5倍的有：miR－30d， miR－141， miR－196a， miR－181b， miR－126－5p， miR－494， miR－29b， miR－155， miR－106a*， miR－181a，miR－20a，miR －10a和miR－106a－5p；表达下调＜0．6倍的 miRNA有2个： miR－199a－5p和miR－31。甲状腺结节患者血浆中具有同样差异表达的miRNA有miR－181b，miR－494及miR－106a*。经Pearson相关性分析，miR－181b， miR－494及miR－106a*在组织及血浆中的表达有相关性，r值分别为0．713、0．878和0．751，且差异有统计学意义（ P＜0．05）。结论甲状腺结节组织与正常甲状腺组织的miRNA的表达谱具有明显差异；miR－181b、miR－494及 miR－106a*在甲状腺结节患者血浆中miRNA变化与甲状腺结节组织miRNA变化具有高度一致性，提示这3个miRNA可能具有作为甲状腺结节早期诊断标志物的潜在价值。（中华检验医学杂志，2016，39：837－842）
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尿液exosomal miR-375在前列腺癌诊断中的价值初探
目的 研究尿液exosomal miR-375在前列腺癌中的表达及临床应用价值.方法 收集45例前列腺癌患者、24例前列腺增生患者、24名健康对照者的尿液,提取尿液中的exosomal RNA.应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测尿液exosomal miR-375的表达量,并采用全面的统计方法探讨miR-375对前列腺癌的临床价值.结果 前列腺癌尿液exosomal miR-375的表达量较BPH和健康对照组明显下调,差异有统计学意义(P＜0.01).但miR-375在BPH组和对照组中的表达差异无统计学意义(P＞0.05).尿液exosomal miR-375的表达与临床分期和骨转移相关(P＜0.05),随着临床分期的增加,miR-375的表达水平降低;但miR-375的表达量与患者年龄、Gleason评分和血清前列腺特异性抗原水平相关性不强(P＞0.05).ROC曲线显示尿液exosomal miR-375较PSA能够更好地区分前列腺癌与BPH,曲线下面积分别为0.715(95％ CI:0.589 ～0.842)、0.632(95％ CI:0.492 ～0.771).结论 尿液exosomal miR-375可作为前列腺癌非侵入性的分子诊断标志物.
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血清miR-21与CA199联合检测对胰腺癌诊断的临床意义
目的探讨血清miR-21与CA199联合检测对胰腺癌的临床价值,以期为胰腺癌诊断提供一种潜在的鉴别方法.方法收集2014年1月至2015年12月期间陆军总医院263临床部检验科检测的134例胰腺癌患者、97例良性胰腺疾病患者及106名健康者中CA199的含量和miR-21的相对表达值,评价其单独检测和联合检测对于胰腺癌的诊断价值.采用受试者工作特征曲线,灵敏度和特异度评价指标的诊断价值.受试者工作特征曲线下面积的比较采用z-score检验.结果与健康对照组相比,良性胰腺疾病组和胰腺癌组的CA199和miR-21均显著升高;与良性胰腺疾病组相比,胰腺癌组的CA199和miR-21也均显著升高.区分健康对照组和胰腺癌组时,当CA199和miR-21两者联合检测后其敏感度和特异度分别为77.61％和69.81％,其曲线下面积为0.85,与CA199、miR-21比较,均显著升高(P=0.021,P=0.036).区分良性胰腺疾病组和胰腺癌组时,当CA199和miR-21两者联合检测后其敏感度和特异度分别为69.40％和65.98％,其曲线下面积为0.78,与CA199、miR-21比较,均显著升高(P=0.017,P=0.023).结论miR-21对于胰腺癌的诊断具有一定辅助价值,与CA199联合检测可为临床提供一种潜在的辅助方法.
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基于链置换分子探针的miRNA高特异性检测研究
目的 建立一种新型分子探针设计方法,用于提高microRNA检测灵敏度和特异性.方法 实验研究.利用链置换原理将靶标杂交序列部分设计在分子信标茎端,在此基础上再利用核酸结构分析软件DNAman优化分子探针的二级结构设计出新的探针,分别称为链置换优化探针(MB-D)和链置换二级结构优化探针(MB-D plus),将MB-D和MB-D plus与传统分子信标(MB-C)对比检测microRNA-21及其单碱基突变体,分析不同探针对于microRNA检测的低检出限、重复性和特异性等.结果 MB-C对microRNA-21的低检出限为1 nmol/L,MB-D和MB-D plus的低检出限分别为0.1 nmol/L和0.01 nmol/L;所建立的MB-D plus探针可以显著区分miR-21与单核苷酸突变靶标.结论 基于链置换原理并通过二级结构优化的分子探针可显著提高探针对于microRNA检测的灵敏度和特异性.
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MiR-181a和miR-181b靶向调控FUT1对结直肠癌进展的影响
目的 通过研究miR-181a及miR-181b与岩藻糖基转移酶FUT1的相关性,阐明miR-181a和miR-181b靶向调控FUT1在结直肠癌转移中的功能机制.方法 收集2014年3月至2016年1月大连医科大学附属第一医院经手术切除的结直肠癌及其癌旁组织共32对组织标本,男性18例,女性14例;采用RT-PCR方法检测了32对结直肠癌患者癌组织、癌旁组织、结直肠癌患者和健康人血清及结直肠癌高转移细胞株SW620、低转移细胞株SW480中miR-181a和miR-181b的表达.通过皮尔森"Pearson"相关曲线得出FUT1与miR-181a、miR-181b表达相关趋势.通过生物信息学网站TargetScan、microRNA.org和Starbase v2.0预测及双荧光素酶实验报告验证miR-181a、miR-181b与FUT1的靶向关系;通过CCK8,划痕实验,transwell小室及血管形成进一步检测SW480、SW620细胞中miR-181a和miR-181b表达调控对肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭及血管形成的影响.两独立样本间的比较采用t检验,多个样本间的比较采用单因素方差分析,相关分析采用Pearson相关系数分析.结果 miR-181a、miR-181b在结直肠癌组织中的表达明显低于癌旁组织(3.12±1.88 vs 6.44±2.32,t=11.74;3.16±1.77 vs 5.52±2.45,t=3.24,P均<0.05);miR-181a、miR-181b在结直肠癌患者血清的表达量明显低于健康人血清中的表达量(1.32±0.25,2.57±0.48,t=10.26;0.91±0.14,1.63±0.29,t=5.19;P均<0.05);在结直肠癌细胞株SW480和SW620中的表达明显低于正常结直肠上皮细胞株FHC[(0.65±0.10、0.50±0.09)vs 1.0,(0.60±0.12、0.42±0.03)vs 1.0;t=3.08,P均<0.05];FUT1在结直肠癌组织及SW620中高表达(t=5.23,P<0.05).TargetScan、microRNA.org和Starbase v2.0软件预测FUT1与miR-181a、miR-181b具有靶向结合位点,双荧光素酶实验验证FUT1为miR-181a、miR-181b的共同靶基因.特异性上调SW620细胞中miR-181a、miR-181b,细胞的增殖、迁移、侵袭、血管形成能力明显降低且FUT1的表达量显著下降.干扰SW480细胞中的miR-181a、miR-181b,细胞的增殖、迁移、侵袭、血管形成能力明显增加且FUT1的表达显著增强.干扰FUT1的表达逆转了miR-181a和miR-181b对SW480细胞侵袭能力的抑制作用.结论 miR-181a、miR-181b通过靶向调控FUT1的表达抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭及血管形成.
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microRNAs 在结直肠癌患者血清中的表达及其诊断价值
目的：探讨mir-16、mir-21、mir-29a、mir-92a及mir-143在结直肠癌（ CRC）患者血清中的表达特征，评价血清中上述miRNAs表达水平对CRC的诊断价值。方法采用病例对照研究方法，对2011年12月至2012年12月在广东医学院附属深圳南山医院住院的50例CRC患者及27例健康对照者进行研究，应用实时荧光定量PCR技术检测血清中mir-16、mir-21、mir-29a、mir-92a及mir-143的表达水平，并比较8例CRC根治术患者手术前1天和术后7天血清中miRNAs表达的变化情况；应用受试者工作特征（ receiver operating characteristic ，ROC）曲线分析血清miRNAs的表达对CRC诊断的灵敏度和特异性。结果 CRC患者血清中mir-16、mir-21、mir-92a的表达水平分别为（75.55±37.73）、（35.96±23.81）、（24.79±8.97）fmol/ml，明显高于健康对照组的（32.73±18.94）、（24.36±13.27）、（16.36±5.58）fmol/ml，差异均有统计学意义（tmir-16＝2.77， tmir-21＝2.34， tmir-92a ＝3.85，P＜0.05）；而mir-29a、mir-143在 CRC 患者及健康对照血清中的表达，差异无统计学意义（ tmir-29a ＝-0.17， tmir-143＝1.59，P＞0.05）；miR-16、miR-21、miR-92a在低分化和中分化CRC患者血清中表达水平，差异无统计学意义（tmir-16＝1.72， tmir-21＝1.49， tmir-92a ＝1.48，P＞0.05），在CRC患者肿瘤切除后7天血清miR-16和miR-92a表达水平分别（36.02±19.95）、（14.82±7.78） fmol/ml，明显低于术前的（62.18±34.17）、（24.06±12.99）fmol/ml，差异均有统计学意义（tmir-16＝3.59， tmir-92a ＝2.60，P ＜0.05）。 mir-16、mir-21、mir-92a联合检测的ROC曲线下面积（area under curve，AUC）为0.877，对CRC诊断的敏感度和特异性分别达到88％和85％，均优于单一miRNA及传统肿瘤标志物CEA对CRC的诊断效能。结论 mir-16、mir-21、mir-92a联合检测对CRC的诊断具有良好的灵敏度和特异度，有望作为新的肿瘤标志物应用于结直肠癌的无创诊断和病情监测。（中华检验医学杂志，2014，37：691-695）
