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异常表达的miRNA对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响
下调miR-221改变细胞周期,增加G0/G1期细胞,减少S期细胞,但对细胞活性无明显影响;miR-221和miR-21共同下调后,细胞活力则明显下降.其他miR转染对细胞生长和凋亡的影响不明显.结论 部分在胰腺癌中异常表达的miRNA对胰腺癌细胞的生长有一定影响,选用一定组合的联合转染,对细胞生长和凋亡的影响比单独转染时加强.
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粪便microRNAs检测用于胰腺癌筛查诊断的价值评价
目的 检测胰腺癌患者粪便microRNAs,评价其诊断价值.方法 收集29例胰腺癌患者、22例慢性胰腺炎(CP)患者以及13例健康志愿者的粪便标本,抽提粪便总RNA,应用实时定量PCR法检测各组样本miR-21、miR-155、miR-181a、miR-181b、miR-196a、miR-210的表达量,以miR-16作为内参基因.应用接受者操作特征(ROC)曲线(AUC)评估microRNAs对胰腺癌的诊断价值.结果 粪便总RNA抽提及microRNAs检测方法具有稳定及可重复性.胰腺癌组miR-181b、miR-196a、miR-210的表达量分别为2.22±0.64、2.78±0.14、5.55±0.38;CP组为1.42±0.39、3.88±0.85、5.39±0.69;对照组为0.32±0.40、1.14±0.98、4.23±0.99.胰腺癌组和CP组均较对照组显著增加(P值均＜0.05);而胰腺癌组与CP组间无显著差异.胰腺癌组对对照组的miR-181b AUC为0.745(95%CI 0.597～0.894),诊断胰腺癌的敏感性和特异性分别为84.6%和51.7%;miR-210的AUC为0.772(95%CI 0.629～0.914),对胰腺癌的诊断敏感性和特异性分别为84.6%和65.5%.两组比较差异均有统计学意义(P值均＜0.05).miR-196a对胰腺癌无诊断意义,但胰腺癌患者粪便miR-196a的表达与肿瘤直径相关(r=0.516,P=0.041).结论 粪便RNA的抽提和microRNAs检测为无创性,且具有可重复性.miR-181b和miR-210在胰腺癌患者粪便中的表达增高,有可能是胰腺癌潜在的分子标志物.
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糖尿病分子生物学研究的新领域:微RNAs(miRNAs)与β细胞生物学、胰岛素抵抗、糖尿病及其并发症
微RNAs是由19～23个核苷酸组成的RNA分子.它们能够中止mRNAs的翻译或降解mRNA,从而成为蛋白质表达的调控者.微RNAs能有力推进细胞的分化和发育.这种调节的异常相关β细胞生物学、胰岛素抵抗和糖尿病及其并发症.微RNA-375直接参与胰岛素分泌的调控.本研究证明,微RNAs密切相关于疾病的表现.近年新鉴定出一大批与疾病致病有关的微RNAs.本文所提供31种微RNAs的应用,仅作为研究案例如糖尿病肾病发病的趣谈,旨在引起《中国糖尿病杂志》读者和作者研究微RNAs的浓厚兴趣.
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微小RNA和长链非编码RNA作为心脏疾病生物标志物的研究进展
人类基因组中有超过85%的基因转录为核糖核酸(RNA),但只有约2%的基因转录成编码蛋白质的信使核糖核酸(mRNA),其余均为非编码RNA(ncRNA).ncRNA根据长度分为短链ncRNA[如微小RNA(miRNA)]和长链ncRNA(lncRNA).目前研究发现ncRNA可以通过不同的机制调节心脏功能,同时其调节异常与心血管疾病的发生和发展有很大联系.研究显示,循环血中某些ncRNA稳定性良好,其表达水平异常变化与心血管疾病的病程进展密切相关,提示循环血中的ncRNA具有作为心脏疾病生物标志物的潜在价值.故本文对循环血液中miRNA和lncRNA作为心脏疾病生物标志物的进展进行综述.
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循环miR-19a/b作为心肌缺血再灌注损伤标志物的研究
目的:探讨miR-19a/b在调节心肌缺血再灌注损伤中的作用及临床意义.方法:实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测miR-19a/b在经过10 h缺氧、2 h复氧后的H9c2心肌细胞中的表达,通过荧光素酶实验分析miR-19a/b的潜在靶基因.同时,以40例健康者的血清作为对照,采集40例急性心肌梗死(AMI)患者发病24 h内的外周血标本,分离血清后采用实时荧光定量PCR法检测血清中miR-19a/b表达水平,并采用化学发光免疫分析法检测血心肌肌钙蛋白I(cTnI)含量;免疫抑制法测定肌酸激酶同工酶(CK-MB)的酶活力.结果:miR-19a和miR-19b在经过10 h缺氧、2 h复氧的H9c2心肌细胞中的表达比在正常H9c2细胞中分别增加了5.876倍和2.761倍(P均<0.01).转染miR-19a/b类似物和miR-19a/b抑制剂分别上调和下调细胞中miR-19a/b的表达.荧光素酶报告基因实验发现,miR-19a/b与第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)蛋白3'UTR区有靶向作用关系.转染miR-19a/b类似物上调miR-19a/b的表达后,PTEN的表达降低;转染miR-19a/b抑制剂下调miR-19a/b的表达后,PTEN的表达增加.与健康受试者比较,miR-19a/b在AMI患者血清中的表达增加(P均<0.01);AMI患者胸痛发作后0~3 h开始升高,6~12 h达高峰;血清CK-MB酶活力和cTnI水平在AMI发作后2~6 h开始升高,24 h左右达高峰.结论:miR-19a/b在心肌缺血再灌注过程中高表达,PTEN是miR-19a/b的潜在靶基因;循环miR-19a/b可作为心肌缺血再灌注损伤新的无创性诊断标志物.
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微小 RNA 与炎症相关心血管疾病的研究进展
微小 RNA(microRNA,miRNA)是一类进化上高度保守,长度约18~22个核苷酸的不编码蛋白质的单链小分子RNA,能够通过与靶 mRNA 特异性的碱基配对引起靶 mRNA的降解或者抑制其翻译,从而对基因进行转录后表达的调控[1]。炎症是具有血管系统的活体组织对损伤因子所发生的防御反应。近年,心血管疾病发病率和死亡率呈上升趋势,严重威胁人类的生命健康。已知多种心血管疾病都与炎症反应有关,而炎症与 miRNA 之间又存在不可忽视的联系,因此本文就近年来 miRNA 与炎症相关心血管疾病的研究进展进行综述,旨在更好理解并利用 miRNA 进行疾病的诊疗。
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microRNAs在结直肠癌中的研究进展
microRNAs(miRNAs)是一类长约22个核苷酸的内源性非编码RNA,通过与靶基因3’端非编码区结合,抑制靶miRNAs翻译或直接使其降解,参与调节多种生理和病理过程.近年来大量研究表明,miRNAs在结直肠癌发生与发展过程中扮演着促癌或抑癌基因的角色,可作为诊断标志物和治疗靶点.结直肠癌是一类高发病率和高死亡率的肠道肿瘤.本文对miRNAs在结直肠癌中的作用机制、诊断、治疗及耐药性等新研究进展予以阐述.
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循环微小RNA-21水平与稳定性心绞痛患者侧支循环形成的关系
目的 探讨冠状动脉严重狭窄的稳定性心绞痛(SAP)患者循环微小RNA-21(miR-21)与冠状动脉侧支循环(CCC)形成的关系.方法 连续入选本院心内科住院的SAP患者130例,患者冠状动脉至少1支血管≥90％狭窄,根据Rentrop分级分为CCC良好组(2～3级)64例和CCC不良组(0～1级)66例,并选同期门诊健康体检者50例为对照组.检测血浆miR-21及血清血管内皮生长因子(VEGF)水平,分析miR-21和VEGF水平与CCC的关系及miR-21与VEGF的相关性.结果 CCC不良组和CCC良好组血浆miR-21及血清VEGF水平均明显高于对照组(P＜0.05,P＜0.01),且CCC良好组显著高于CCC不良组[(0.86±0.10)2△△c1 vs (0.74±0.10)2-△△ct,P＜0.01;(336.7±62.8)ng/L vs (286.2±63.3) ng/L,P＜0.01];血浆miR-21的ROC曲线下面积(AUC)为0.833,血清VEGF的AUC为0.844.CCC良好组血浆miR-21与血清VEGF水平呈正相关(r=0.645,P＜0.05).CCC不良组血浆miR-21与血清VEGF水平无相关性(r=0.146,P＞0.05).血浆miR-21和血清VEGF水平是SAP患者CCC良好的独立预测因素(P＜0.05).结论 SAP患者血浆miR 21及血清VEGF水平与CCC形成良好相关,miR-21通过影响VEGF水平表达,可能是促进患者CCC形成的重要机制之一.
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急性冠状动脉综合征患者外周血微小RNA-24表达与细胞凋亡及炎性因子的相关性研究
目的 探讨急性冠状动脉综合征(ACS)患者外周血单核细胞(PBMC)微小RNA-24(miR-24)表达与细胞凋亡及炎性因子的相关性.方法 选择在首都医科大学附属北京中医院住院治疗的稳定性心绞痛(SAP)组33例,不稳定性心绞痛(UAP)组42例,急性心肌梗死(AMI)组32例,另选择20例胸痛综合征(CPS)患者(CPS组).采集患者外周静脉血并分离PBMC,RT-PCR检测PBMC miR-24表达,ELISA检测血浆可溶性Fas(sFas)、可溶性Fas配体(sFasL)、白细胞介素6(IL-6)、TNF-α.并采用Gensini积分法对各冠状动脉狭窄程度及狭窄节段做定量评分.结果 AMI组PBMC miR-24表达显著低于SAP组(1.68±0.41 vs 3.78±0.38,P=0.035);随着冠状动脉病变程度加重,患者miR-24表达逐渐降低;血浆sFas(r=-0.630,P=0.006)、sFasL(r=-0.372,P=0.015)、IL-6(r=-0.642,P=0.006)、TNF-α(r=-0.596,P=0.008)与miR-24水平均呈显著负相关.结论 ACS患者外周血miR-24表达水平下调,且与细胞凋亡及炎性因子水平呈显著负相关.
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老年稳定性心绞痛患者循环微RNA-92a表达的影响因素研究
目的 了解循环微RNA(miR)-92a在老年稳定性心绞痛(SAP)患者中的表达.方法 选择SAP患者116例,分为老年组(年龄≥60岁)66例,非老年组(年龄＜60岁)50例.比较老年SAP患者循环miR-92a表达,方差成分分析2组患者一般临床资料及其交互效应项对SAP患者循环miR 92a表达的贡献.比较2组合并及未合并糖尿病患者循环miR-92a表达.结果 SAP患者年龄与循环miR 92a表达呈正相关(相关系数0.217,P＜0.05).老年组循环miR-92a表达明显高于非老年组(P=0.056).方差成分分析显示,年龄、糖尿病影响SAP循环miR-92a表达.老年组合并糖尿患者循环miR-92a表达明显高于未合并糖尿病患者(P＜0.01),非老年组合并糖尿病患者循环miR-92a表达明显高于未合并糖尿病患者(P＜0.05).老年组合并糖尿病发生率33.3％明显高于非老年组16.0％(P＜0.05).结论 老年患者循环miR 92a表达升高不是年龄升高所致.提示老年SAP患者循环miR-92a表达升高要特别注意引发血管内皮损伤的糖尿病.
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循环hsa-微小RNA-199a-5p在缺血性脑卒中患者中的表达及意义
目的 探讨缺血性脑卒中患者血清hsa-miR-199a-5p表达及临床意义.方法 收集2011年1月～2015年5月在成都市双流区中医医院内科住院的缺血性脑卒中患者68例(脑卒中组),健康体检者40例(对照组).通过qRT-PCR检测血清hsa-miR-199a-5p表达,采用ROC曲线评价其敏感性和特异性,分析其表达与美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分及C反应蛋白表达的关系.结果 与对照纽比较,脑卒中组血清hsa-miR-199a-5p表达明显增高,差异有统计学意义(P＜0.01).缺血性脑卒中急性期患者血清hsa-miR-199a-5p与NIHSS评分不相关(r=0.490,P＞0.05),与C反应蛋白呈正相关(r=0.765,P＜0.01).采用ROC曲线,以2.32为界值,hsa-miR-199a-5p诊断缺血性脑卒中的敏感性为95.4％,特异性为94.7％,阳性似然比为27.17,阴性似然比为0.022,ROC曲线下面积为0.805(95％CI=0.609～0.927,P=0.003).结论 缺血性脑卒中患者急性期血清hsa-miR-199a-5p水平升高,hsa-miR-199a-5p可以作为缺血性脑卒中早期诊断的生物标记物.
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心房颤动患者冠状窦血小分子RNA表达差异与价值
目的 探讨非瓣膜性心房颤动(房颤)患者冠状窦血小分子RNA(microRNA,miRNA)表达差异及其调控房颤的机制,早期预警诊断和干预的价值.方法 选择15例房颤患者作为房颤组,其中阵发性房颤、持续性房颤和永久性房颤各5例,选择健康体检者5例作为正常对照组.导管射频消融术前和术中分别取外周血和冠状窦血,使用miRNA芯片进行全基因组miRNA表达谱微阵列分析,Volcano Plot法获得差异表达miRNA,通过mirbase、miranda、targetscan数据库进行靶基因分析.结果 房颤组自身冠状窦血与外周血比较,有14个miRNA表达差异显著,其中6个表达上调:miR-1266、miR-4279、miR-4787 5p、miR-4666a-3p、kshv-miR-K12-6-3p、miR-3150a-5p;8个表达下调:miR-892a、miR-3149、miR-3171、miR-3664-5p、miR-3591-3p、miR-4423-5p、miR-4473、miR-574-3p.miR-1266在阵发性房颤、持续性房颤和永久性房颤患者均明显升高,而miR-3171则显著降低.房颤组冠状窦血和外周血与正常对照组比较,miRNA表达有明显差异(P＜0.05).结论 房颤患者冠状窦血更能反映心脏miRNA的代谢与调控状况;外周血miR-3171、miR-892a、miR-3149在房颤发生早期出现,且持续差异表达,有可能成为房颤诊断的标记物;miR-1266、miR-4279、miR-4666a 3p有可能成为未来房颤治疗的干预靶点.
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糖代谢异常对冠心病相关血清微小RNA表达的影响
目的 检测相关血清微小RNA(miRNA)在冠心病及糖尿病合并冠心病患者中的表达水平,探讨糖代谢异常对冠心病相关血清miR-126 、miR-146表达的影响.方法 选择患者48例,分别为对照组15例,冠心病组17例,糖尿病合并冠心病组(合并组)16例.采用TaqMan探针实时定量PCR技术,检测各组血清miR-126 、miR-146;采用TaqMan实时荧光定量PCR对血清中靶miRNA丰度进行定量.结果 与对照组比较,冠心病组及合并组患者miR-126基因表达明显上调(P<0.05),而miR-146基因表达虽有下调趋势,但差异无统计学意义(P>0.05).Spearman相关分析显示,CT miR-126与空腹血糖、餐后2 h血糖水平呈负相关(r=-0.686,P=0.002;r=-0.723,P=0.001).结论 糖代谢异常对冠心病相关血清miR-126的表达产生影响,从而在一定程度上为 miR-126成为糖尿病大血管病变的血清学检测指标提供理论依据.
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微小RNA-208b在急性心肌梗死中的诊断价值
目的 通过观察外周血microRNA-208b(miR-208b)在急性心肌梗死(AMI)患者中表达水平的变化,探讨miR-208b作为AMI诊断及预测预后生物标记物的价值.方法 连续选择2014年1月～2015年1月于我院就诊的100例AMI患者(AMI组),80例不稳定性心绞痛患者(UAP组)及80例健康体检者作为对照组(HC组).检测3组miR-208b表达水平.在术后1周及6个月进行随访,随访中8例AMI患者失访,14例AMI患者发生左心室重构归为重构组,37例AMI患者为非重构组;20例AMI患者发生主要不良心血管事件(MACE)为MACE组,31例AMI患者未发生MACE为非MACE组.结果 AMI组患者外周血miR-208b相对表达水平明显高于UAP组及HC组[(4.41±2.32) vs (2.01±0.79) vs (0.43±0.28),P=0.000].行PCI术后患者外周血中miR-208b水平明显低于术前[(1.50±0.50) vs (2.96±2.34),P=0.001].重构组及MACE组外周血miR-208b浓度均明显高于非重构组[(7.15±2.50) vs (3.52±1.25),P=0.018]及非MACE组[(4.80±2.97) vs (4.02±2.09),P=0.046].结论 外周血microRNA-208b作为诊断AMI及预测AMI患者预后的生物标记物具有临床意义.
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稳定性心绞痛患者血糖水平与循环微小RNA-92a表达关系的研究
目的 探讨稳定性心绞痛(SAP)患者循环微小RNA-92a(microRNA-92a,miR-92a)表达与血糖的关系.方法 将93例SAP患者分为A组:降糖治疗+空腹血糖(FPG)＜7.0 mmol/L 18例,B组:降糖治疗+FPG≥7.0 mmol/L8例,C组:非降糖治疗+FPG＜7.0 mmol/L 61例,D组:非降糖治疗+FPG≥7.0 mmol/L 6例.比较4组患者血糖水平与循环miR-92a表达的关系.结果 SAP患者合并2型糖尿病发病率为34.4％,降糖治疗后,仍有30.8％FPG≥7.0 mmol/L.A组与B组miR-92a是否＞-0.1或＞0.5水平的OR值分别为2.67或0.17,C组与D组OR值分别为0.36、0.48.A组miR-92a＞-0.1的患者为88.9％,显著高于C组的41.0％(P＜0.01).B组miR-92a＞0.5的患者为75.0％,高于A组的33.3％(P＞0.05).结论 单纯测定FPG诊断2型糖尿病漏诊率高.循环miR-92a有助于FPG＜7.0 mmol/L的SAP合并2型糖尿病的诊断及疗效评价.
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射频消融术改变心房颤动患者外周血微小RNA表达谱
目的 探讨心房颤动(房颤)射频消融术是否通过对调控离子通道蛋白的微小RNA(microRNA,miRNA)的影响,实现心房离子流再平衡和逆重构,并试图发现有价值的调控miRNA.方法 选择行房颤射频消融术患者(阵发性、持续性和永久性房颤各10例)30例作为房颤组,健康体检者10例作为正常对照组.正常对照组体检时,房颤组射频消融术前和术后3个月分别取外周血,使用miRNA芯片(miRNA v18.0)进行全基因组miRNA表达谱微阵列分析,2组miRNA表达比值≥1.5倍为显著上调,实时定量PCR验证miRNA表达差异结果,并通过mirbase、miranda、targetscan数据库进行靶基因分析.结果 与正常对照组比较,房颤组射频消融术前主要参与离子通道蛋白调控的21个miRNA差异表达均有显著意义(P＜0.01);房颤组术后3个月与自身术前比较,上述21个miRNA表达亦有明显差异(P＜0.01).其中miR-1266等5个miRNA术前表达上调≥1.5倍,术后明显下调≥10倍;仅miR-3664-5p术前下调8.88倍,术后进一步下降46.06倍;其余15个miRNA均术前表达下调,术后显著上调.结论 房颤射频消融术通过影响调控离子通道蛋白的主要miRNA,实现了心房离子流逆重构.调控多个离子流的miR-1266,miR-377-5p,miR-101-5p和miR-151-3p有望成为房颤治疗新靶点.
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退行性心脏瓣膜病患者血清微小RNA-222和白细胞介素6水平变化及其临床意义
目的 探讨退行性心脏瓣膜病患者血清微小RNA-222(miR-222)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)水平变化及其临床意义.方法 选择2016年1～11月徐州医科大学附属淮安医院老年科住院的退行性心脏瓣膜病患者100例,其中单瓣膜病变组48例,多瓣膜病变组52例;健康体检者30例作为对照组.比较3组血清miR-222和IL-6水平.直线相关性分析退行性心脏瓣膜病患者血清miR-222与IL-6的相关性.结果 单瓣膜病变组和多瓣膜病变组血清miR-222和IL-6水平明显高于对照组[0.136±0.013、0.205±0.018 vs 0.029±0.005,(3.814±0.108)ng/L、(4.479±0.104)ng/L vs (2.351±0.116)ng/L,P＜0.01],且多瓣膜病变组血清miR-222和IL-6水平明显高于单瓣膜病变组,差异有统计学意义(P＜0.01).退行性心脏瓣膜病患者血清miR-222与IL-6呈正相关(r=0.586,P＜0.01).结论 血清miR-222和IL-6可能参与了退行性心脏瓣膜病的发生、发展.
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心房颤动相关微小RNA1266调控钠通道蛋白
目的 采用双荧光素酶报告基因分析微小RNA 1266(miR-1266)与心房颤动相关离子通道蛋白的靶向关系.方法 利用TargetScan、miRanda和miRDB数据库预测出miR-1266的4种靶基因,分别为电压门控钠通道α亚基(SCN5A)、电压门控钾通道eag相关H家族2型(KCNH2)、电压门控钾通道E家族β1亚基(KCNE1)和内向整流钾通道J家族5型(KCNJ5),并针对靶基因构建3'非编码区的重组荧光素酶报告质粒,4种靶基因(SCN5A、KCNH2、KCNE1和KCNJ5)分别分为miR-1266转染组、阴性对照组和空白对照组,miR-1266转染组和阴性对照组分别将SCN5A、KCNH2、KCNE1和KCNJ5的重组荧光素酶报告质粒与miR-1266及阴性对照质粒共转染于人胚肾HEK293细胞,48 h后检测各组荧光素酶活性.结果 SCN5A转染中,与阴性对照组比较,miR-1266转染组相对荧光素酶活性显著降低(o.100±0.007 vs 0.209±0.011,P=0.002);而KCNH2、KCNE1和KCNJ5转染中,与空白对照组和阴性对照组比较,miR 1266转柒组相对荧光素酶活性无明显变化(P=0.1269,0.0652,0.2326).结论 SCN5A是miR-1266的直接靶基因,而KCNH2、KCNE1和KCNJ5并非miR-1266的直接靶基因,miR-1266可能通过抑制SCN5A表达参与房颤电重构,有可能成为未来干预治疗靶点.
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微小RNA对内皮细胞炎性反应过程中血管内皮细胞黏附分子1表达的影响
目的 研究微小RNA(miRNA,miR-126)及血管细胞黏附分子1(VCAM-1)在脂多糖刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的表达,探讨miR-126对内皮细胞炎性反应过程中VCAM-1表达的影响.方法 HUVEC培养后分6组,空白对照组,模型组,miR-126mimic组,miR-126 inhibitor组,A组和B组,后4组用Lipofectamine 2000脂质体分别转染miR-126 mimic、miR-126 inhibitor及miRNA mimics control、miRNA inhibitor control 24 h后,加脂多糖1 μg/ml刺激,在8h时,用实时荧光定量PCR检测miR-126、VCAM-1 mRNA表达;Western blot法测VCAM-1蛋白表达,并进行比较.结果 模型组miR-126 mRNA较空白对照组降低,为(0.056±0.004)倍(P＜0.01),而VCAM-1 mRNA较空白对照组升高(l2.50±2.55)倍(P＜0.01),VCAM-1蛋白表达明显升高(P＜0.01).miR-126mimic组miR-126 mRNA相对表达较A组升高(51.18±2.30)倍(P＜0.01),VCAM-1 mRNA相对表达为A组(0.81±0.04)倍(P＜0.01),VCAM-1蛋白表达较A组明显降低(P＜0.01);miR-126 inhibitor组miR-126mRNA表达较B组降低(0.032±0.011)倍(P＜0.01),VCAM-1 mRNA水平较B组高(1.42±0.10)倍(P＜0.05),VCAM-1蛋白表达较B组明显升高(P＜0.05).结论 过表达miR-126在8h时下调VCAM-1的表达,提示miR-126可能通过抑制VCAM-1的表达,参与抑制脂多糖诱导的HUVEC的炎性反应.
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大鼠微小RNA-22腺病毒载体的构建和鉴定
目的：构建并鉴定大鼠miR-22腺病毒载体，制备具有一定滴度含miR-22基因的重组腺病毒，为后期研究miR-22在心肌缺血再灌注损伤中的作用及分子机制奠定基础。方法化学合成目的基因序列（含酶切位点），对目的基因进行PCR扩增、酶切，酶切后的目的基因与酶切后的GV202载体连接产生miR-22腺病毒表达载体，将连接好的产物转化大肠杆菌DH5a感受态细胞获得大量阳性克隆，对阳性克隆进行酶切鉴定及测序鉴定。利用脂质体2000试剂，让成功构建的miR-22重组腺病毒载体和腺病毒包装质粒共转染人胚肾293细胞，得到重组腺病毒，完成重组腺病毒扩增、纯化及滴度测定。结果成功构建了大鼠miR-22腺病毒载体。经重组腺病毒扩增、纯化及滴度测定，终获得的重组腺病毒滴度为1×109 PFU/ml。结论成功构建制备获得了具有一定滴度含miR-22基因的重组腺病毒，为后期顺利开展有关miR-22在心肌缺血再灌注损伤中的作用及分子机制研究提供了可能。
