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饮用水中病毒浓缩与检测方法的建立及应用
目的 建立饮用水中病毒浓缩与检测方法并对实际水样进行人腺病毒污染状况监测.方法 以f2噬菌体为水中肠道病毒代表,投加于受试水样中,评价NanoCeram滤芯对原水和饮用水初次浓缩及不同浓度PEG 8000对初次浓缩液进行二次浓缩的效果.采用T-A克隆制备人腺病毒荧光定量PCR标准品,对所得质粒测序,应用Blast序列类似性检索工具将其与目的基因片段进行一致性检测,建立荧光定量PCR检测人腺病毒的方法.应用上述方法,于2011年对武汉两家自来水厂原水和饮用水采用NanoCeram滤芯进行现场初次浓缩,聚乙二醇(PEG)/NaCl法进行二次浓缩,提取浓缩液中病毒DNA后进行荧光定量PCR检测,监测原水和饮水中人腺病毒污染状况.结果 所建立的NanoCeram滤芯初次浓缩法对原水中的f2噬菌体回收率为(51.63±26.60)％,对饮用水中的f2噬菌体回收率为(50.27±14.35)％.当PEG 8000浓度达到0.13 kg/L时,二次浓缩回收率可达(90.09±10.50)％.所构建的人腺病毒荧光定量PCR标准品与目的基因片段序列一致度为99％,可用于人腺病毒的绝对定量.2011年,武汉市两家自来水厂原水中的人腺病毒浓度范围为(4.13×103～2.20×106)拷贝/L,出厂水中的人腺病毒浓度范围为(5.57×102 ～7.52×1O5)拷贝/L,饮用水处理过程对人腺病毒的清除率为(75.49±11.71)％.结论 NanoCeram滤芯联合PEG/NaCl法可对水环境中病毒进行有效浓缩,应用所建立的荧光定量PCR法检测发现自来水厂原水中存在人腺病毒,目前的水处理措施不能将其完全去除.
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重组人p53腺病毒治疗恶性胸腔积液的疗效
目的 探讨重组人p53腺病毒治疗非小细胞肺癌并发恶性胸腔积液的疗效.方法 2006年1月至2009年12月广州医学院第一附属医院肿瘤血液中心和广州呼吸疾病研究所的96例恶性胸腔积液患者完全随机分为治疗组(46例,常规GP方案化疗,抽胸水后用重组人p53腺病毒胸腔注入)和对照组(50例,常规GP方案化疗,抽胸水后用A群链球菌胸腔注入),观察两组患者的疗效和不良反应.结果 治疗组与对照组疗效差异无统计学意义,治疗组近期有效率71.7%(33/46),但局部不良反应胸痛和咳嗽加重明显小于对照组(4.3%比20.O%,4.3%比22.O%,均P＜0.05).结论 应用重组人p53腺病毒治疗恶性胸腔积液安全有效,不良反应比A群链球菌低.
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重组腺相关病毒介导HLA-A2基因转导肝癌细胞增强杀伤性T细胞抗肿瘤免疫应答
目的 本研究旨在探讨重组腺相关病毒(rAAV)介导HLA-A2基因转导肝癌细胞增强杀伤性T细胞(CTL)抗肝癌免疫应答.方法 利用携带人类甲胎蛋白(AFP)基因的rAAV(rAAV-AFP)转导人树突状细胞(DC)体外诱导AFP特异性抗肝癌CTL免疫应答.利用携带人类HLA-A2基因的rAAV(rAAV-HLA-A2)体外转导肝癌细胞提高HLA-A2分子表达水平,增强肝癌细胞对rAAV-AFP转导DC疫苗诱导的AFP特异性CTL免疫反应的敏感性.结果 rAAV-AFP转导DC疫苗能够有效诱导AFP特异性抗肝癌CTL免疫应答.rAAV-HLA-A2能够提高肝癌细胞HLA-A2分子表达,并增强肝癌细胞对rAAV-AFP转导DC疫苗诱导的CTL免疫反应的敏感性.结论 通过rAAV-HLA-A2提高肝癌细胞HLA-A2分子表达是增强CTL抗肝癌免疫应答的有效途径.为AFP表达阳性但HLA-class I分子表达低下的肝癌患者的主动性免疫治疗提供了新的解决方案.
关键词： 腺病毒科 甲胎蛋白类 树突细胞 肝肿瘤 人类白细胞抗原-A2 -
人超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4基因重组腺病毒构建心脏生物起搏的实验研究
目的 对心肌细胞标记分子和与起搏活动相关的人超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4(hHCN4)的表达进行检测,并进行细胞电生理学研究.方法 将20只成年新西兰大白兔分为对照组(10只)和实验组(10只),对照组经心外膜注射腺病毒至左心室心尖部,实验组则注射hHCN4重组腺病毒.术后3d内每天描记两组大白兔体表心电图,术后第7天分离颈部双侧迷走神经干并进行双侧或单侧电刺激,以标测电极在心尖部进行起搏(刺激脉宽2～4 ms,刺激电压5～8V,刺激频率20 ～ 30次/s),并记录同步肢体6导联心电图.免疫荧光检测两组大白兔心脏组织和实验组大白兔肝、肾、肺组织的hHCN4表达.膜片钳记录实验组大白兔基因转染后心尖部心肌单细胞动作电位起搏相关离子流If和LCa.结果 术后3d内心电图都没有记录到两组大白兔的室性心律失常事件.在术后第7天进行颈部迷走神经干电刺激时,实验组大白兔室性逸搏节律的频率明显快于对照组[(60±8)次/min比(42±6)次/min,P＜0.05],其室性逸搏节律起源于注射部位附近.实验组大白兔注射局部的心脏组织较对照组hHCN4蛋白表达明显增强,其肝、肾、肺组织未检测到该蛋白的表达.膜片钳记录到实验组大白兔基因转染后心尖部心肌单细胞存在起搏电流If和LCa.结论 hHCN4导入心肌可以使通道蛋白在局部过度表达,提高室性异位起搏点的频率.
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携带miR29c重组腺病毒的制备及其促骨髓瘤细胞凋亡作用
目的 制备携带miR29c的重组腺病毒Ad5F 11 p-miR29c,评价miR29c对骨髓瘤细胞凋亡的影响.方法 巢式PCR扩增得到hsa-miR29c,将hsa-miR29c基因克隆到腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV,得到pShuttle-CMV-miR29c.鉴定正确后,PmeI线性化并转化含Ad5F11p骨架质粒的BJ5183感受态细胞,重组获得腺病毒载体.PacI线性化的重组腺病毒质粒转染HEK293细胞,制备重组腺病毒Ad5F11p-miR29c.以对照病毒Ad5F11p-EGFP感染人骨髓瘤细胞系SKO-007、U266和XG7,通过流式细胞术确定佳感染复数.Ad5F 11p-miR29c以佳感染复数感染骨髓瘤细胞,流式细胞术检测miR29c对细胞凋亡的影响.结果 PCR扩增获得miR29c基因,成功将其连接到腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV,经测序鉴定正确.采用Ad-easy系统,成功构建并制备了CMV启动的重组腺病毒Ad5F11p-miR29c.流式细胞术结果显示,Ad5F11p-EGFP对SKO-007和U266细胞的佳感染复数为150 MOI;而XG7为100 MOI.Ad5F11p-miR29c以佳感染复数感染细胞48 h后,细胞凋亡率升高.SKO-007细胞的凋亡率达到26.5％,XG7细胞的凋亡率达到46.9％.结论 成功制备重组腺病毒Ad5F11p-miR29c,并证实miR29c能够诱导骨髓瘤细胞凋亡.
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Ubc9基因重组腺病毒的构建及其在HeLa细胞中的表达
目的 构建携带Ubc9基因的重组腺病毒质粒pAdEasy-1/Ubc9,制备含13bc9基因的重组腺病毒Ad-Ubc9,并使Ubc9在HeLa细胞中高效表达.方法 PCR法扩增目的 Ubc9基因:用pemⅠ酶切将穿梭质粒pAdTrack-CMV-Ubc9线性化;将线性化的穿梭质粒pAdTrack-CMV-Ubc9与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在感受态BJ5183菌内进行同源重组,筛选阳性重组子pAdEasy-1/Ubc9;再用PacⅠ酶切pAdEasy-1/Ubc9使之线性化,线性化的重组腺病毒质粒经脂质体转染HEK293细胞,进行重组腺病毒的包装和扩增.收集重组腺病毒,感染HeLa细胞,用Western blot方法检测Ubc9在HeLa细胞中的表达.结果 通过Pac Ⅰ酶切证实携带Uboc9基因的腺病毒载体构建成功,包装出携带Uboc9基因的腺病毒能有效感染HeLa细胞.结论 利用细菌内同源重组方法成功地构建了携带Ubc9的重组腺病毒载体,并能在HeLa细胞中高效表达.
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重组溶瘤腺病毒Ad-CD80-TPE-GM对Hep2细胞移植瘤的杀伤效应
目的 研究自行构建的重组溶瘤腺病毒Ad-CD80-TPE-GM对裸鼠Hep2细胞移植瘤的杀伤效应.方法 裸鼠皮下接种Hep2细胞悬液建立荷人喉癌动物模型.将裸鼠分为单次治疗组和连续治疗(每天1次、连续5 d)组,每组据治疗药物不同再分为PBS组、携带增强型绿色荧光蛋白报告基因的复制缺陷型5型重组腺病毒(Ad-GFP)组、Ad-CD80-TPE-GM组,以PBS、Ad-GFP组为对照组.单次治疗组于治疗后4 d取外周血并剥离肿瘤,分别用有限稀释法、BCA蛋白质定量试剂盒和流式细胞术检测肿瘤组织中的病毒感染滴度、总蛋白浓度和CD80表达阳性率,ELISA法检测血清和肿瘤组织中粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CS)表达水平,并计算肿瘤组织中病毒感染滴度量和总蛋白中GM-CSF的表达量.连续治疗组于首次给药后观察裸鼠肿瘤体积的变化,待对照组肿瘤直径>1 cm,或肿瘤表面出现明显溃疡时剥离肿瘤,计算Ad-CD80-TPE-GM组分别与2个对照组相比的相对肿瘤增殖率和抑瘤率.结果 单次治疗组中,Ad-CDS0-TPE-GM组肿瘤组织中病毒感染滴度量(IU/tumor)为1.13×106(1.40×105～7.25×107),明显高于Ad-GFP组[1.17×102(7.80×101～2.40×102),P=0.01],而PBS组未检测到病毒;GM-CSF表达量(pg/mg)为397.32±179.67,明显高于PBS组(4.02 4±0.93,P<0.01)和Ad-GFP组(6.92±2.79,P<0.01):CD80表达阳性率为31.6%±9.0%,而PBS和Ad-GFP组均基本不表达(均P<0.001).连续治疗组中,Ad-CD80-TPE-GM组与PBS和Ad-GFP组相比,相对肿瘤增殖率分别为31.8%(P<0.05)、25.9%(P<0.01);抑瘤率分别为73.4%、77.9%(均P<0.001).结论 Ad-CD80-TPE-GM能在端粒酶阳性的人喉癌Hep2细胞移植瘤组织内大量复制并有效表达目的 基因,具有明显的抗肿瘤效应.
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重组腺病毒介导的BCL-Xl基因过表达治疗急性肝衰竭大鼠的研究
目的 明确肝细胞凋亡与急性大鼠肝衰竭模型肝组织损伤程度的关系;明确BCL-Xl过表达对急性肝衰竭大鼠肝脏的治疗保护作用.方法 将60只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、处理组三组.正常对照组及模型组给予门静脉注射生理盐水,处理组予门静脉注射重组BCL-Xl腺病毒.预处理7 d后模型组及处理组予D-氨基半乳糖+脂多糖建立肝衰竭模型,观察各组大鼠的BCL-Xl蛋白的表达、ALT、AST水平、肝细胞凋亡率及死亡率.结果 BCL-Xl基因在处理组的表达高于在模型组中的表达;建立大鼠肝衰竭后6 h,处理组的血清ALT、AsT水平低于模型组(P<0.05).处理组的肝细胞凋亡率低于模型组(P<0.05).处理组的大鼠死亡率低于模型组(P<0.05).结论 在急性肝衰竭大鼠中,肝细胞的凋亡率与大鼠的死亡率呈正相关;BCL-Xl在肝组织中的过表达能减少急性肝衰竭模型大鼠的肝细胞凋亡率,降低急性肝衰竭大鼠的死亡率.
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重组腺病毒AdEGFP/hVEGF165快速构建及在骨髓移植小鼠体内的分布和表达效率
目的研究增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的人血管内皮细胞生长因子165(hVEGF165)重组腺病毒载体的快速构建及在骨髓移植后小鼠体内的分布和表达效率.方法利用细菌内质粒间同源重组法快速构建EGFP标记的重组腺病毒Ad-EGFP/hVEGF165;通过体外试验观察病毒的形态、滴度和安全性;经尾静脉注射3×108PFU的重组腺病毒给同基因骨髓移植BALB/c小鼠,在不同时间检测重组腺病毒在小鼠体内分布和hVEGF165的表达.结果通过细菌内质粒间同源重组法在短期内成功构建了复制缺陷型重组腺病毒载体Ad-EGFP/hVEGF165;纯化的病毒颗粒在电镜下成分均一,滴度可达1010～1011PFU/ml.Hela细胞感染病毒后经多次传代未见细胞病变.借助于荧光显微镜在不同时期观测到小鼠心、肺、肝、脾、肾、小肠组织EGFP;RT-PCR分析和免疫组化染色显示脏器内有显著VEGF表达.各脏器未见明显毒性反应.ELISA法检测小鼠血浆中VEGF水平升高可达(866.67±97.13)pg/ml.结论本研究结果证实细菌内同源重组法构建腺病毒载体具有高效、省时、省力的特点,并成功介导了hVEGF165基因在骨髓移植小鼠体内的安全、稳定表达,为今后在骨髓移植过程中开展基因治疗奠定了基础.
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rAd5和rAAV2/1载体疫苗诱导载体特异性和外源基因特异性免疫反应的研究
目的 在小鼠体内比较携带相同外源基因的rAd5和rAAV2/1载体疫苗诱导的载体特异性和外源基因特异性免疫应答的差异.方法 分别用携带HIV-1 gag基因的rAd5和rAAV2/1疫苗免疫BALB/c小鼠,在免疫后不同时间点用Elispot方法和ELISA方法检测小鼠体内的rAd5或rAAV2/1载体特异性及HIV-1 gag特异性细胞免疫反应和抗体反应.结果 rAd5-gag能够诱导较强的gag特异性细胞免疫反应,显著高于针对Ad5载体的细胞免疫反应；而rAAV2/1 -gag诱导的gag特异性及AAV2/1载体特异性细胞免疫反应水平都较低.rAd5-gag诱导的P24特异性和Ad5特异性IgG抗体水平都较高,并且二者相当；与rAd5-gag相比rAAV2/1 -gag可诱导更高水平的P24 IgG抗体,而且rAAV2/1 -gag诱导的P24 igG高于AAV2/1载体特异性IgG水平.结论 rAd5载体可诱导强的外源基因特异性细胞免疫和抗体反应,针对载体的细胞免疫反应较弱而抗体反应较强；rAAV2/1载体可诱导强的外源基因特异性抗体反应,明显高于针对载体的抗体反应,外源基因特异性和载体特异性细胞免疫反应水平都很低.
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重组质粒pVR-S与重组腺病毒rAdV-S诱导特异性免疫反应的研究
目的 研究表达HBsAg的重组质粒pVR-S与表达HBsAg的重组腺病毒rAdV-S在不同免疫策略下的免疫效果.方法 使用BALB/c小鼠,在比较电击与肌注两种方法后,分别单独免疫pVR-S和rAdV-S,使用ELISA和Elispot方法分别检测体液免疫和细胞免疫水平;然后采用联合免疫pVR-S和rAdV-S,比较联合免疫与单独免疫对小鼠产生免疫应答的不同影响.结果 与肌内注射相比较,电击注射pVR-S能更快诱导较高的HBsAb抗体水平.当pVR-S和rAdV-S分别单独免疫时,pVR-S引起体液免疫应答的速度较慢,而rAdV-S可在第2周迅速诱导产生体液免疫应答,rAdV-S诱导的体液免疫应答和细胞免疫应答水平均高于pVR-S;联合免疫pVR-S和rAdV-S时,联合免疫产生的细胞免疫应答是单独免疫的2～3倍,同时还可诱导出相同或更高水平的体液免疫应答.结论 rAdV-S的单独免疫效果高于pVR-S,联合免疫可比单独免疫诱导产生更强的免疫应答,有助于提高机体抗病毒能力.
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密码子优化提高重组腺病毒中人轮状病毒VP6基因表达量的研究
目的 通过密码子优化提高重组腺病毒中人轮状病毒VP6基因的表达量.方法 人工合成按照人的优势密码子优化的人轮状病毒VP6基因,包装重组腺病毒后,与未优化的相同基因的重组腺病毒用免疫荧光和Western Blot方法比较其表达量.结果 密码子优化的人轮状病毒VP6基因,与未优化的相同基因的重组腺病毒比较,其蛋白表达量大大提高.结论 密码子优化确实提高了重组腺病毒中人轮状病毒VP6基因的表达量,可望满足腺病毒载体疫苗的研发需要.
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非复制型重组腺病毒在293细胞上连续传代的遗传稳定性
目的 观察基于AdEasy系统的重组腺病毒在体外连续传代过程中的遗传稳定性.方法 以基于AdEasy系统的4种表达轮状病毒基因的复制缺陷型重组腺病毒为模型,在293细胞上对其进行连续传代20代.每隔5代用PCR方法检测目的基因的存在和回复突变的复制型腺病毒(RCA)的产生,用Western Blot方法检测重组腺病毒携带的目的基因的表达.结果 在20代的连续传代过程中,插入的轮状病毒基因一直稳定存在和表达.重组腺病毒rvAdG2VP7(o)在连续传代15代后,重组腺病毒rvAdGlVP7(o)和rvAdG2VP7(o)在连续传代20代后检测到复制型腺病毒的存在.结论 重组腺病毒在293细胞中连续传代具有良好的遗传稳定性,传代10代以内一般检测不到RCA,可望满足基因治疗药物和腺病毒载体疫苗的研发需要.
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含HIV-1 gag基因的重组腺病毒5型与35型嵌合病毒免疫效果研究
目的 探讨含HIV-lgag基因的重组腺病毒5型与35型嵌合病毒(rAd5/F35)在BALB/c小鼠中的免疫效果.方法 PCR,间接免疫荧光鉴定HIV-1 gag基因在重组腺病毒(rAd5/F35-mod.gag)的正确插入和体外细胞水平的表达,用rAd5/F35-mod.gag以不同的方式免疫BALB/c小鼠,ELISA检测小鼠血清中的p24特异性抗体,细胞内细胞因子染色法检测小鼠的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答.结果 重组腺病毒rAd5/F35-mod.gag在体外细胞水平可以很好的表达目的基因gag;在小鼠体内重组腺病毒rAd5/F35-mod.gag可诱导特异性的CTL应答和血清IgG抗体反应,用rAd5/F35单独免疫2次,所诱发的CTL和血清IgG反应强.但Ad5初次感染后,产生的抗Ad5抗体可以抑制rAd5/F35疫苗的特异性免疫反应.结论 重组腺病毒rAd5/F35-mod.gag单独免疫可在小鼠体内诱导特异性的CTL应答和血清IgG抗体反应.只改变Ad5纤突蛋白Fiber,不能避免抗Ad5抗体的抑制作用.
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表达HIV-1 gag-pol△和gp 140 TM蛋白复制缺陷型重组腺病毒的构建及免疫效果研究
目的构建表达人免疫缺陷病毒Ⅰ型gag-pol△和gp140TM基因的非复制型重组腺病毒.方法首先将HIV-1的gag-pol△和gp140TM基因插入穿梭载体,再与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化E.coli BJ5183,获得重组子.转化293细胞后获得重组病毒.重组腺病毒与DNA疫苗联合免疫小鼠,ELISA检测小鼠血清中的抗体.结果获得两株重组腺病毒vAd-gag-pol△和vAd-gp140TM,能正确表达Gp140TM、Gag蛋白以及经剪切加工的P24蛋白,与DNA疫苗联合免疫小鼠后能产生高滴度的HIV-1特异性的抗体.结论成功构建了表达HIV-1结构基因的重组腺病毒,能有效诱导HIV-1特异性抗体.
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离子型聚丙烯纤维对病毒的吸附作用研究
目的 研究新型离子型聚丙烯纤维以防止病毒感染.方法 构建四种离子型表面活性聚丙烯纤维,与表达GFP的重组腺病毒分别相互作用,通过观察GFP的表达和病毒六邻体壳粒基因的表达来判断纤维对病毒的吸附能力.结果 四种纤维对腺病毒具有一定的吸附或灭活能力.金属离子纤维和两性离子聚丙烯纤维具有更好的灭活病毒能力.结论 提示金属离子纤维和两性离子聚丙烯纤维可以作为实验室防护装备的原材料.
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腺病毒载体介导EB病毒潜伏期膜蛋白2A基因转染树突状细胞对其功能的影响
目的探讨腺病毒载体介导EB病毒(EBV)潜伏期膜蛋白2A(LMP2A)基因转染树突状细胞(DC)对其功能的影响.方法通过同源重组法构建带有EBV-LMP2A基因的重组腺病毒Ad5-LMP2A,用不同感染滴度(MOI)的Ad5-LMP2A转染成熟的DC,用流式细胞术(FACS)检测DC的LMP 2A蛋白表达细胞百分率及用台盼蓝染色计数DC死亡百分率,选择佳MOI;用佳MOI的Ad5-LMP2A转染成熟的DC,FACS检测转染前后DC表面分子CD1a、CD83、CD40、CD80及HLA-DR的变化;并用3H-TdR掺入法检测转染前后DC刺激同种淋巴细胞增殖能力及荧光定量PCR检测表达IL-12 P40 mRNA等功能的改变.结果 MOI 200为Ad5-LMP2A转染DC的佳滴度,此时约80%的DC表达LMP2A蛋白及92%以上细胞为活细胞.Ad5-LMP2A转染成熟DC前后对细胞表面共刺激分子及特征性表面标志无影响;转染后的DC仍具有较强的刺激同种异体淋巴细胞增殖能力和表达IL-12 P40 mRNA的功能.结论腺病毒载体能高效介导EBV LMP2A基因在DC中表达,Ad5-LMP2A转染成熟DC对其功能无明显影响,便于进一步用于EBV相关肿瘤的免疫治疗.
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Ad5F35-LMP2重组腺病毒修饰DC体外诱导特异性T细胞免疫的研究
目的 了解含有EB病毒潜伏膜蛋白2的非复制型重组腺病毒(AdSF35-LMP2)修饰的DC能否在体外诱导LMP2特异性细胞毒性T淋巴细胞免疫.方法 人外周血单个核细胞在细胞因子诱导下生成树突状细胞,Ad5F35-LMP2感染树突状细胞后激发同源的T细胞,MTT法检测其对T细胞的增殖作用,及激活的特异性CTL对表达LMP2的人CNE-2细胞的特异性杀伤效应.结果Ad5F35-LMP2能有效感染树突状细胞.其激活的特异性CTL对CNE-2细胞有特异性杀伤活性,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01).结论 重组腺病毒Ad5F35-LMP2感染的DC可以有效的诱导产生EBV-LMP2特异性细胞毒效应.
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含密码子优化的SIV gag基因的DNA疫苗与rAd5疫苗构建及免疫原性评价
目的 构建含有SIVgag基因的DNA疫苗和重组腺病毒疫苗,为后期在SIV感染的猴模型中进行多载体疫苗联合免疫策略的治疗效果评价奠定基础.方法 将SIV gag基因按照哺乳动物偏嗜密码子进行优化并构建至pVR载体,作为DNA疫苗.以Western Blot方法比较优化前后gag基因表达水平.将优化后的gag基因插入重组腺病毒载体,构建rAd5-SIVgag疫苗.在BALB/c小鼠中分别比较DNA疫苗及rAd5-SIV.gag疫苗单独及联合免疫的效果.结果 密码子优化的SIVgag基因的表达水平远高于野生型SIVgag基因.重组腺病毒疫苗免疫一次或两次诱导的细胞免疫反水平分别高于DNA疫苗免疫一次或两次.两种疫苗联合免疫的反应水平与腺病毒疫苗免疫两次的水平相当,高于DNA疫苗单独免疫及腺病毒疫苗单独免疫一次的结果.结论 成功优化了SIV gag基因,使其不依赖Rev高水平表达；成功构建了表达优化后SIV gag基因的DNA疫苗和rAd5疫苗,可以在小鼠体内诱导较强的gag基因特异性CTL应答.
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深圳市儿童呼吸道腺病毒4型暴发流行的病原学研究
目的 探讨深圳市某幼儿园一起急性呼吸道感染暴发的流行特征及病因.方法 使用荧光定量PCR方法对采集的17份患儿咽拭子进行流感样病例筛查,筛查后的阴性样本进一步进行呼吸道腺病毒核酸检测,对检测出的5份腺病毒阳性标本进行病毒分离,感染Hep-2受体细胞后共获得4份ADV稳定细胞毒株,用腺病毒六邻体基因作为靶基因进行序列扩增及测定,测序结果在GenBank上进行序列比较,确定其病毒亚型并进行系统进化分析.结果 17份咽拭子中5份为腺病毒PCR阳性,阳性率5/7,用分型引物检测并分析序列确定均为腺病毒4型.结论 本次急性呼吸道病毒疫情暴发由腺病毒4型引起.
