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  • 冠心病患者血清miRNA表达与糖代谢异常的相关性分析

    作者:秦凤;张惠莉

    目的 探讨冠心病患者血清miRNA表达与糖代谢异常的相关性.方法 选取我院心内科收治的45例患者为研究对象,分为对照组、冠心病组和合并组(糖尿病并冠心病),各15例.采用实时定量PCR技术对不同分组患者血清中miR-126及miR-146进行检测,比较三组患者的miR-126及miR-146表达水平.结果 冠心病组及合并组患者较对照组miR-126在体内的表达水平明显较高(P<0.05),miR-146表达水平三组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 冠心病患者血清miRNA表达水平与糖代谢异常的存在一定的相关性,血清miRNA检测可在临床中作为指导糖尿病大血管病变诊断的参考依据.

  • 肺结核患者外周血单核细胞中差异表达miRNA的筛选

    作者:张立群;孙照刚;高孟秋;马丽萍;吴晓光;刘菲

    目的 研究肺结核患者外周血单个核细胞中miRNA的差异表达.方法 选择10例肺结核患者和10例健康人.每人抽取5 ml静脉血,提取外周血单个核细胞(PBMC),分别将肺结核患者组和健康对照组的PBM混合,提取总RNA和miRNA,进行miRNA荧光标记和纯化,用芯片筛选差异表达的miRNA,以校正后的两个样本间杂交信号强度的比值,来判断芯片的结果.以实时定量PCR验证.结果 筛选出26个差异表达的miRNA,其中13个上调的miRNA和13个下调的miRNA.通过比较肺结核患者与健康对照者实时定量PCR结果证实,hsa-miR-1(分别为1.085±0.005,1.018±0.011)表达上调(t=4.334,P<0.01),hsa-miR-146a(分别为0.948±0.008,1.036±0.005)(t=4.460,P<0.01)与hsa-let-7e(分别为1.020±0.007,1.091±0.004)(t=4.149,P<0.01)表达下调.结论 多种miRNA在肺结核患者外周血单个核细胞中有异常表达.

  • 结核病患者血清中Small RNAs表达谱分析

    作者:钟球;周琳;钱明;陈涛;陈亮;李海成

    目的 了解结核病患者血清中Small RNA(sRNA)表达谱的特征,为从Small RNA角度探讨结核病发生、发展的调控机制奠定基础.方法 采用Solexa深度测序技术得到包括miRNA、siRNA、piRNA、rRNA、tRNA、snRNA、snoRNA、repeat associate sRNA、exon或intron降解片段等在内的所有Small RNA.通过与已知数据库进行比对、寻找样品与数据库之间在基因组位置上的overlap等方法,对sRNA进行注释,同时选取没有被注释上的sRNA,使用华大自主开发的软件Mireap预测novel miRNA.结果 非结核病组血清中发现109 630种、2 759 795条Small RNA,其中候选miRNA种数为84、候选miRNA总表达量为1 433;结核病组血清中发现97 614种、1 452 119条Small RNA,其中候选miRNA种数为65、候选miRNA总表达量为755.结论 结核病人与非结核病人血清中的Small RNA表达谱存在种类与数量上的差异.

  • 肺结核相关microRNA研究进展

    作者:央拉;李长山

    肺结核是一种由结核分枝杆菌引起的慢性呼吸道传染病.2012年WHO报道全球约有1/3人口感染过结核分枝杆菌,其中约有1/10感染者终发展成为结核病.我国是世界上22个结核病高负担国家之一,现有患者约500万例,居世界第二位,因此结核病已成为我国公共卫生防控的难题.目前,关于该病的研究主要集中于结核病易感性基因及机体免疫防护等方面.microRNA(miRNA)是真核生物中一类长度约为22 nt的非编码的小分子RNA.miRNA已成为近20年来生物学研究的焦点,其主要是通过与靶基因信使RNA的特异性位点结合,抑制靶基因蛋白的表达,其在生物发育时序调控和疾病的发生中起到重要作用.已有很多研究表明miRNA在宿主-致病原的免疫网络中发挥重要作用,同时也有研究表明miRNA与肺部细菌性疾病的发生和发展相关,深入研究miRNA在肺结核疾病的功能,可以为该病的诊断和治疗提供新的方向.因此,作者总结了国内外与肺结核相关的miRNA的研究进展,希望为肺结核的预防、控制和治疗提供新的契机.

  • 纳米SiO2暴露对人支气管上皮细胞microRNA表达水平的影响

    作者:杨亚蕊;何云;龚春梅;周继昌;朱玉梅;莫俊銮

    目的:探讨纳米SiO2短期及长期暴露对人支气管上皮细胞(16HBE)microRNA (miRNA)表达水平的影响。方法分别以5、10、15、20、25、30、40μg/ml纳米SiO2溶液处理16HBE细胞24 h,采用CCK-8法检测细胞活性,并计算细胞增殖活性抑制率及半抑制浓度(IC50)。以10μg/ml纳米SiO2溶液处理16HBE细胞至第10代(P10)和30代(P30),作为长期染毒组,并设立对照组(P0);以1/4 IC50、1/2 IC50、IC50浓度的纳米SiO2溶液和IC50浓度的微米SiO2溶液处理16HBE细胞24 h,作为短期染毒组,并设立无血清培养液组为对照组。用安捷伦miRNA微阵列芯片筛选P0、P10、P30组细胞差异表达的miRNA,并用逆转录荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)方法验证短期及长期染毒组与对照组miRNA的表达差异。结果纳米SiO2溶液染剂量为5、10、15、20、25、30、40μg/ml的16HBE细胞增殖活性抑制率分别为:(-3.33±3.80)%、(20.40±11.73)%、(39.08±5.53)%、(55.10±5.78)%、(66.42±9.60)%、(71.67±7.34)%、(81.43±5.37)%(F=129.11,P<0.001);IC50(95%CI)为18.35(15.82~20.72)μg/ml。长期染毒组中,P10、P30及P0细胞的miRNA-494-3p表达水平分别为0.45±0.08、0.28±0.07和1.00(F=60.77,P<0.001);miRNA-19a-3p表达水平分别为2.27±0.45、1.06±0.19和1.00(F=30.05,P<0.001);miRNA-148b-3p的表达水平分别为1.78±0.29、0.88±0.19和1.00(F=30.23,P<0.001)。短期染毒组中,5、10、20μg/ml纳米SiO2溶液及20μg/ml微米SiO2溶液染毒组的miRNA-494-3p表达水平分别为0.99±0.04、1.38±0.19、2.13±0.14、0.81±0.25(F=57.03,P<0.001);miRNA-19a-3p的表达水平分别为0.91±0.03、1.12±0.03、0.53±0.01、0.86±0.01(F=408.78,P<0.001);miRNA-148b-3p的表达水平分别为0.95±0.02、1.22±0.00、0.54±0.02、1.15±0.04(F=264.14,P<0.001)。结论纳米SiO2短期及长期染毒可诱导16HBE细胞miRNA表达水平的变化,其中,长期和短期染毒对miRNA-494-3p的表达水平影响不同。

  • 调控microRNA成熟的通路基因标签单核苷酸多态性与原发性肝癌易感性的关系

    作者:李玉春;宋春花;杨文杰;代丽萍;王鹏;史健翔;张建营;王凯娟

    目的 研究调控microRNA成熟的通路基因(DICERI、RAN及GEMIN4基因)标签单核苷酸多态性(tSNP)与原发性肝癌遗传易感性的相关性.方法 采用1∶1配对病例-对照研究,将2008年9月至2010年12月在郑州某两个教学医院就诊的532例原发性肝癌患者纳入病例组,将532名健康个体纳入对照组,对其进行面对面调查并采集外周静脉血5ml.从DICER1、RAN及GEMIN4基因中筛选tSNP,采用PCR-RFLP或等位基因特异PCR技术对研究对象进行基因分型,应用多因素条件logistic回归及多因素降维法(MDR)分析tSNP与原发性肝癌易感性的关系及其与环境因素的交互作用.结果 在所筛选的DICER1、RAN及GEMIN4基因tSNP中,rs14035位点CC、CT、TT基因型在病例组中的频率分别为67.29% (358/532)、28.20% (150/532) 、4.51% (24/532),在对照组的频率分别为70.30%(374/532)、28.20% (150/532)、1.50%( 8/532)(x2=8.35,P <0.05);rs1045491位点GG、GA、AA基因型在病例组中的频率分别为71.05% (378/532)、26.69%( 142/532)、2.26%(12/532),在对照组的频率分别为80.45%(428/532)、18.42%(98/532)、1.13%(6/532)(x2 =13.17,P<0.01);rs2291778位点GG、GT、TT基因型在病例组中的频率分别为53.38%( 284/532)、40.23%(214/532)、6.39%( 34/532),在对照组的频率分别为25.94% (138/532)、63.91%(340/532)、10.15%( 54/532)(x2=83.71,P<0.01).rs14035位点TT基因型(OR=2.54,95%CI:1.19 ~6.32)、rs1045491位点GA基因型(OR=1.74,95%CI:1.08 ~2.66)是原发性肝癌的易感基因型,rs2291778位点的GT基因型(OR =0.52,95% CI:0.43~0.75)和TT基因型(OR=0.62,95%CI:0.46 ~0.86)是原发性肝癌的非易感基因型.单体型分析显示,单体型3 (AACTGGGT)(OR=1.42,95%CI:1.10~1.82)和单体型5(AGCCAGCC)( OR=1.36,95% CI:1.02~1.80)可增加肝癌发病风险,而单体型2( AACTATCC)(OR=0.69,95%CI:0.52 ~0.91)和单体型6(AACTGTGT)(OR =0.61,95% CI:0.45~0.81)可降低原发性肝癌发病风险.具有rs1045491(等位基因A)、rs14035(等位基因T)和HBV感染的交互组合的人群是原发性肝癌的高发人群(OR=3.72,95% CI:2.38~ 5.56).结论 rs14035位点TT基因型、rs1045491位点GA基因型是原发性肝癌的易感基因型,rs2291778位点T等位基因是原发性肝癌的非易感等位基因.多位点多基因联合作用对于原发性肝癌的发生可能具有协同作用.

  • 福建省汉族人群肺癌相关microRNA基因SNP与吸烟交互作用研究

    作者:何斐;林剑波;俞婷婷;张鑫;刘志强;熊为旻;蔡琳

    目的:探讨福建省汉族人群肺癌相关microRNA(miRNA)基因SNP位点rs11614913、rs2910164、rs12894467、rs7372209及rs895819与吸烟的交互作用关系。方法采用病例-对照研究设计,收集2006年1月至2012年1月经病理确诊的汉族新发原发性肺癌患者1053例;按照性别、年龄进行频数成组匹配,同期选取探视病例组患者的汉族亲友及在福建省福州市苍霞社区卫生服务中心进行健康体检的汉族人群作为对照组,共1058名。调查研究对象性别、身高、体重、文化程度、婚姻状况、肿瘤家族史、肺部疾病史、吸烟、饮茶、饮酒等情况。经知情同意后,均采集空腹静脉血5 ml,应用基质辅助激光解析电离时间飞行质谱技术(MALDI-TOF-MS)进行 rs11614913、rs2910164、rs12894467、rs7372209及rs895819位点多态基因分型。以是否发生原发性肺癌为因变量,以SNP位点为自变量构建多因素非条件logistic回归模型。利用叉生分析探讨SNP位点与吸烟之间可能存在的联合作用;利用超额相对危险度(RERI)分析吸烟与SNP位点显、隐性模型的相加交互作用。结果病例组吸烟量P50(P25~P75)为30.00(0.00~56.00)包年,高于对照组[0.00(0.00~20.48)包年](Z=14.57,P<0.001);病例组不吸烟者的被动吸烟指数P50(P25~P75)为11.40(0.00~25.00),高于对照组[0.00(0.00~13.11)](Z=10.71,P<0.001)。rs11614913、rs2910164、rs12894467、rs7372209及rs895819位点检出率在病例组中分别为95.82%(1009/1053)、97.72%(1029/1053)、97.82%(1030/1053)、97.15%(1023/1053)和96.01%(1011/1053);对照组中分别为98.11%(1038/1058)、98.96%(1047/1058)、98.30%(1040/1058)、98.68%(1044/1058)和98.02%(1037/1058)。rs11614913位点的显性遗传模型中,TT基因型与吸烟联合可增加原发性肺癌的发病风险(OR=4.04,95%CI:2.67~6.12);隐性遗传模型中,CC基因型与吸烟联合可增加原发性肺癌的发病风险(OR=4.76,95%CI:3.16~7.17)。rs12894467位点的显性遗传模型中,TT基因型与吸烟联合可增加原发性肺癌的发病风险(OR=2.98,95%CI:2.28~3.90);隐性遗传模型中,CC基因型与吸烟联合可增加原发性肺癌的发病风险(OR=1.94,95%CI:1.10~3.43)。rs2910164位点的显性遗传模型中,CC基因型与吸烟联合可增加原发性肺癌的发病风险(OR=2.18,95%CI:1.60~2.98);隐性遗传模型中,GG基因型与吸烟联合可增加原发性肺癌的发病风险(OR=3.29,95%CI:2.16~5.03)。吸烟与rs12894467位点显、隐性基因模型相乘交互项的联合作用均存在统计学意义(χ2=8.58,P=0.003;χ2=4.76,P=0.040)。结论 rs11614913、rs12894467及rs2910164位点多态性与福建省汉族原发性肺癌发生存在潜在关联。

  • microRNA-149和microRNA-499基因多态性与肝癌易感性的Meta分析

    作者:叶莉霞;付朝伟;江峰;崔员霞;孟炜

    目的 采用Meta分析方法探讨microRNA-149(rs2292832)和microRNA-499(rs3746444)位点多态性与肝癌易感性的关系.方法 以“肝癌/肝细胞癌”、“miRNA-149/miR-149/microRNA-149”、“miRNA-499/miR-499/microRNA-499”、“hepatocellular carcinoma”为检索词,检索中国学术期刊全文数据库、中国生物医学文献数据库、中国科技期刊全文数据库、万方知识服务平台、PubMed和Web of Science数据库,系统收集建库至2015年5月31日为止公开发表的有关rs2292832和rs3746444位点多态性与肝癌易感性病例-对照研究,提取数据进行Meta分析,计算合并OR(95%CI)值,并进行生物信息学分析.结果 终纳入13篇文献,携带rs2292832位点纳入5篇文献,携带rs3746444位点纳入12篇文献,其中携带rs2292832位点病例1 096例,对照1 701名;纳入携带rs3746444位点病例3 117例,对照4 126名.Meta分析结果显示,rs2292832和rs3746444位点多态性与肝癌易感性无相关性,等位基因的OR(95%CI)值分别为0.99(0.78~1.28)和1.11(0.88~1.40).分层结果显示,病例组和对照组总调查对象>400名或采用两种不同基因分型方法的研究,rs3746444位点多态性与肝癌易感性存在相关性,其C等位基因可能是肝癌易感性基因,OR(95%CI)值分别为1.32(1.02~1.70)和1.34(1.09~1.66).生物信息学分析结果显示,rs2292832和rs3746444位点在肝癌细胞中的基因表达水平降低,提示2个位点均可能影响基因转录.Cochran's Q检验结果显示,rs2292832和rs3746444位点所纳入的文献异质性均较大(I'2值分别为0.78和0.84,P值均<0.10).结论 rs2292832和rs3746444位点多态性与肝癌易感性均无相关性;但分层结果提示rs3746444等位基因C可能与肝癌易感性相关;生物信息学分析提示本研究的2个位点可能影响基因转录.

  • FMR1基因敲除小鼠海马组织中microRNA-125b和microRNA-132的表达

    作者:肖都;秦兵;易咏红

    目的 检测FMR1基因敲除小鼠海马组织中microRNA-125b(miR-125b)和miR-132表达水平,探讨脆性X智力低下蛋白(FMRP)缺失是否通过改变其转录后表达影响树突棘发育.方法 取FVB近交系雄性1周龄FMR1基因敲除型(K0)和同龄野生型(WT)小鼠各3只,取海马组织标本,应用microRNA芯片技术和荧光定量实时PCR检测miR-125b和miR-132的表达.结果 microRNA芯片检测显示,1周龄WT与KO小鼠海马组织miR-125b和miR-132的荧光值比较,差异无统计学意义(miR-125b:4 919.295±431.981比4 997.578±141.402;miR- 132:244.289±31.125比238.517±62.275,均P>0.05);荧光定量实时PCR检测显示,miR-125b和miR-132的相对表达量差异亦无统计学意义(miR-125b:11.45±0.32比11.55±0.43;miR- 132:18.28±0.34比18.50±0.40,均P>0.05).结论 脆性X综合征树突棘发育不良与miR-125b和miR-132的转录后表达水平无关.

  • 微RNA-374b与前列腺癌恶性程度及生化复发的分析

    作者:陈彦飞;陈雁如;吴永定;杨盛帮;莫汝均;凌晓辉;江福能;钟惟德

    目的 研究前列腺癌组织及良性前列腺组织中微RNA-374b (miR-374b)表达,探讨其与前列腺癌恶性程度及生化复发的关系.方法 收集广州医科大学附属广州市第一人民医院、中山大学附属第二医院、广州市红十字会医院2000年至2010年泌尿外科103例前列腺癌手术后的样本和251例前列腺增生手术获取的前列腺良性组织样本.采用原位杂交技术检测微RNA-374b在前列腺癌组织及良性前列腺组织中表达,并对微RNA-374b表达与前列腺癌患者年龄、术前PSA、临床分期、病理分期、Gleason评分、是否生化复发、是否转移及是否死亡的关系进行统计分析.根据微RNA-374b的相对表达量,以中位数(M=4.50)将其分为低表达组及高表达组,运用Kaplan-meier方法及Log-rank检验进行总体生存率和无生化复发生存率分析.结果 微RNA-374b在前列腺癌的表达低子良性组织(3.97±1.17比4.70±0.71,P<0.05).微RNA-374b的表达量同Gleason评分、病理分期、转移、是否生存及生化复发有关(均P<0.05),同年龄、PSA水平及临床分期无关(均P>0.05).微RNA-374b低表达组无生化复发生存率低于高表达组(P<0.05),高表达组的生化复发时间高于低表达组(P<0.05).微RNA-374b表达与总体生存率无关.结论 微RNA-374b的低表达与前列腺癌恶性程度有关,有望成为评价前列腺癌恶性程度及生化复发的指标.

  • 微RNA抑制人舌鳞状细胞癌迁移侵袭能力

    作者:张新华;王庆亮;赵坤

    目的 研究微RNA-214(miR-214)对舌癌Tca8113细胞迁移侵袭等生物学行为的影响及其起效机制.方法 建立Tca8113细胞miR-214模拟物(M)组-阴性对照模拟物(N)组及阴性对照(C)组.采用RT-PCR法检测各组miR-214水平,Western blot法检测膜型基质金属蛋白酶1(MT1-MMP)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达.采用CCK-8实验检测细胞生长抑制率.采用细胞划痕实验和Transwell实验检测抑制细胞侵袭转移的能力.结果 与对照组相比,miR-214模拟物干预Tca8113细胞后,M组miR-214表达水平明显升高(P<0.05),MT1-MMP、VEGF蛋白表达水平降低,细胞迁移侵袭能力明显降低(P<0.05).结论 miR-214可能通过降低MT1-MMP、VEGF蛋白表达,抑制舌癌Tca8113细胞的迁移侵袭能力.

  • 天龙咳喘灵提取物抑制A549细胞上皮-间质转化中的微RNA表达变化

    作者:王登;潘俊辉

    目的 探讨天龙咳喘灵提取物抑制转化生长因子β1(TGF-β1)诱导A549细胞上皮-间质转化(EMT)过程中微RNA(miRNA)的表达变化.方法 体外培养A549细胞,TGF-β1刺激A549细胞60 min后加入天龙咳喘灵提取物,应用相差显微镜观察A549细胞形态学变化.反转录-PCR、免疫印迹法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA) mRNA和蛋白表达.miRNA芯片检测A549细胞EMT前后miRNA表达的变化.结果 细胞形态学观察、反转录-PCR及免疫印迹检测均显示,5μg/L TGF-β1可以诱导A549细胞EMT且可以被50 mg/L天龙咳喘灵提取物抑制或逆转.miRNA芯片检测显示,与未处理的A549细胞比较,A549细胞EMT后有41种miRNA表达出现显著改变,其中26种表达上调2倍以上,15种表达下调2倍以上;与未处理的A549细胞比较,50 mg/L天龙咳喘灵提取物抑制TGF-β1诱导A549细胞EMT后有46种miRNA的表达出现显著变化,其中25种表达上调2倍以上,21种表达下调2倍以上;与TGF-β1诱导A549细胞EMT比较,50 mg/L天龙咳喘灵提取物抑制A549细胞EMT时有17种miRNA差异表达,其中13种表达下调2倍以上,4种表达上调2倍以上.结论 天龙咳喘灵提取物可以抑制TGF-β1诱导的A549细胞EMT,并参与调控miRNA的差异表达,可能有助于阻止慢性肺部纤维化疾病的进展.

  • let-7在小鼠哮喘模型气道炎性反应中的作用及机制

    作者:孙丽娟;李宏云;付群;秦超;冯永海

    目的 观察let-7家族微RNA抑制剂(anti-let-7)对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠气道炎性反应的影响,并探讨let-7参与哮喘形成的机制.方法 32只小鼠按随机数字法分为4组(n=8),即正常对照组(A组)、哮喘组(B组)、干预对照组(C组)和干预组(D组).其中B、C和D组用鸡卵蛋白(OVA)免疫,建立哮喘模型,A组以生理盐水替代OVA处理.D组小鼠激发前注射anti-let-7以抑制内源性let-7表达,C组小鼠注射乱序siRNA对照.比较各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)的细胞计数,肺组织中let-7e以及BALF中白细胞介素-10(IL-10)含量;体外用anti-let-7转染肺癌细胞A549,并检测细胞中let-7e表达和细胞培养上清中IL-10的含量;荧光素酶报告法检测let-7e是否直接靶向IL-10.结果 与A组相比,B组和C组小鼠BALF中细胞总数和嗜酸粒细胞数显著增加[(20.32±5.33)×109/L和(24.74±6.69)×109/L比(7.12± 1.88)×109/L,(6.45±2.5)×109/L和(7.12±2.66)×109/L比(0.04±0.01)×109/L,均P<0.01];肺组织中let-7e水平明显升高(分别为3.83倍和3.27倍,均P<0.01).与C组比较,D组BALF中细胞总数和嗜酸粒细胞数明显减少[(13.85±3.74)× 109/L比(24.74±6.69)×109/L,(2.15±1.13)×109/L比(7.12±2.66)×109/L,均P<0.05];肺组织中let-7e显著降低[(0.45±0.22)比(3.28±0.45),P<0.01],同时BALF中IL-10水平明显升高[(4.68±0.85)比(1.70±0.29),P<0.01].此外,在肺癌细胞A549 中转染anti-let-7,let-7e表达显著下降[(0.22±0.03)比(1.00±0.11),P<0.01],同时培养上清中IL-10明显上升[(2.58±0.35)比(1.00±0.15),P<0.01].体外let-7e过表达显著降低IL-10报告载体的荧光素酶活性[(0.59±0.06)比(1.00±0.03),P<0.01],而对突变的IL-10报告载体没有抑制作用.结论 anti-let-7对哮喘小鼠气道炎性反应具有明显的抑制作用,其作用机制可能与let-7直接靶向并抑制IL-10有关.

  • 茎环法通用探针定量检测成熟型微RNA方法的建立

    作者:周斌;黄理宾;谢旭琴;李园

    目的 建立通用型荧光探针用于不同成熟型微RNA的定量检测.方法 基于茎环法发明者发明且目前应用为广泛的茎环框架,采用Primer Premier 5.0软件在其茎环框架内部设计了一通用的荧光探针及不同的引物对.采用以上探针和引物对对hsa-miR-143-3p,hsa-miR-145-5p,hsa-miR-124-3p,hsa-miR-339-5p,hsa-miR-361-5p,hsa-miR-423-3p和hsa-miR-486-5p进行定量检测.结果 结果表明该通用型荧光探针可用于不同成熟型微RNA(hsa-miR-143-3p,hsa-miR-145-5p,hsa-miR-124-3p,hsa-miR-339-5p,hsa-miR-361-5p,hsa-miR-423-3p,hsa-miR-486-5p)的定量检测.结论该通用型探针可用于茎环法定量检微RNA,可让定量更加准确、实验成本更低.理论上该探针可以用于所有的成熟型微RNA进行荧光定量PCR检测.

  • 胃癌组织中microRNA的差异表达

    作者:叶敏;聂玉强;陈熙;杜艳蕾;林泳

    目的 检测胃癌组织和癌旁组织中microRNA (miRNA)的差异表达.方法 收集经病理确诊为胃癌进行外科手术切除的25例患者的胃癌组织及距离胃癌病灶5 cm以上的癌旁组织,选取其中7例标本提取总RNA,应用Illumina miRNA芯片检测胃癌和癌旁组织中差异表达的miRNA.应用定量实时PCR技术验证25例胃癌和癌旁组织标本中差异表达的miRNA,并分析25例患者的临床病理与胃癌组织中miRNA差异表达的关联.结果 Illumina miRNA芯片检测显示,HS-138,HS-153,HS-157在胃癌组织中表达下调,miR-181a,miR-21,miR-21*,miR-27a,miR-584,miR-93在胃癌组织中表达上调.定量实时PCR显示,与癌旁组织比较,胃癌组织中miR-181a表达上调(56.848±135.551比3.950±12.101,P<0.05),而miR-584在胃癌和癌旁组织中的表达差异无统计学意义(P>0.05).胃癌组织miR-181a表达与患者胃癌淋巴结转移及年龄有关联(rp=0.462、0.414,P=0.009、0.023),与性别和病理分型无关联(P=0.220、0.106).结论 应用miRNA芯片技术和荧光定量PCR技术发现了胃癌组织中差异表达的miRNA.

  • 携带miR29c重组腺病毒的制备及其促骨髓瘤细胞凋亡作用

    作者:张怡堃;王华;杨萍;李泽良;杨月峰;陈协群;王立生

    目的 制备携带miR29c的重组腺病毒Ad5F 11 p-miR29c,评价miR29c对骨髓瘤细胞凋亡的影响.方法 巢式PCR扩增得到hsa-miR29c,将hsa-miR29c基因克隆到腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV,得到pShuttle-CMV-miR29c.鉴定正确后,PmeI线性化并转化含Ad5F11p骨架质粒的BJ5183感受态细胞,重组获得腺病毒载体.PacI线性化的重组腺病毒质粒转染HEK293细胞,制备重组腺病毒Ad5F11p-miR29c.以对照病毒Ad5F11p-EGFP感染人骨髓瘤细胞系SKO-007、U266和XG7,通过流式细胞术确定佳感染复数.Ad5F 11p-miR29c以佳感染复数感染骨髓瘤细胞,流式细胞术检测miR29c对细胞凋亡的影响.结果 PCR扩增获得miR29c基因,成功将其连接到腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV,经测序鉴定正确.采用Ad-easy系统,成功构建并制备了CMV启动的重组腺病毒Ad5F11p-miR29c.流式细胞术结果显示,Ad5F11p-EGFP对SKO-007和U266细胞的佳感染复数为150 MOI;而XG7为100 MOI.Ad5F11p-miR29c以佳感染复数感染细胞48 h后,细胞凋亡率升高.SKO-007细胞的凋亡率达到26.5%,XG7细胞的凋亡率达到46.9%.结论 成功制备重组腺病毒Ad5F11p-miR29c,并证实miR29c能够诱导骨髓瘤细胞凋亡.

  • 结外NK/T细胞淋巴瘤(鼻型)microRNA的表达研究

    作者:遆红娟;农琳;王微;张爽;李挺

    目的 通过分析结外NK/T细胞淋巴瘤(鼻型)肿瘤组织中microRNA( miRNA)的表达情况,探索其分子改变特征。方法 对1例结外NK/T细胞淋巴瘤(鼻型)和1例炎性鼻黏膜组织应用TaqMan低密度芯片分析665种miRNA的表达差异,发现95种miRNA存在变化。结合文献复习和数据库检索,从其中筛选差异明显、重要的8种miRNA。应用即时定量聚合酶链反应方法进一步对15例结外NK/T细胞淋巴瘤(鼻型)与3例炎性鼻黏膜组织验证这8种miRNA的表达情况。结果 8种miRNA验证结果与表达谱结果对比表达趋势一致,经统计学处理,其中3种重要miRNA[miR-223和miR-886-3p在结外NK/T细胞淋巴瘤(鼻型)组织中表达上调,miR-34c-5p表达下调]表达差异有统计学意义(P值分别为0.002、0.010和0.017)。结论 造血系分化发育、细胞增殖凋亡有关的miRNA:miR-223、886-3p和34c-5p在结外NK/T细胞淋巴瘤(鼻型)表达有明显异常,其是否参与肿瘤分子遗传学的改变及其意义值得深入探讨。

  • 胃癌中microRNA-100的表达

    作者:石端博;邢爱艳;高超;高鹏

    目的 明确microRNA-100 (miR-100)在人胃癌组织及胃癌细胞系中的表达情况,探讨其对胃癌细胞迁移、浸润及增殖能力的影响.方法 提取50例胃癌组织、28例淋巴结转移癌组织、18例癌旁非肿瘤胃黏膜组织及胃癌细胞系SGC7901的RNA,逆转录即时荧光定量PCR (RT-qPCR),定量检测miR-100的表达;用基因转染的方法分别将Pre-miR-100及阴性对照片段导入胃癌细胞系SGC7901,进行体外的迁移、浸润和细胞增殖试验.结果 RT-qPCR显示miR-100在各组样本中均有表达;与癌旁组织相比,miR-100在胃癌组织和胃癌细胞系SGC7901中表达明显降低(P <0.01,P=0.0077);与无淋巴结转移的胃癌原发灶相比,miR-100在发生淋巴结转移的胃癌原发灶和胃癌转移性细胞系SGC7901中的表达更低(P=0.0356,P=0.0361).细胞学实验显示,转染Pre-miR-100的实验组细胞迁移能力、浸润能力明显低于对照组(P=0.0025,P=0.0028);细胞增殖实验发现:与对照组相比,miR-100对细胞的增殖无明显作用(P =0.5952).结论 miR-100在癌旁非肿瘤胃黏膜、非转移组胃癌及转移组胃癌中的表达呈渐进式降低;miR-100可以抑制胃癌细胞的迁移和浸润,而对细胞的增殖能力无明显影响;miR-100在胃癌中发挥抑制肿瘤细胞转移的作用.

  • 恶性与交界性胃肠道间质瘤差异表达microRNA的初步筛选

    作者:石园;王翠众;侯英勇;何德明;徐晨;刘亚岚;胡沁;宿杰·阿克苏;曾海英

    目的 胃肠道间质瘤(GIST)包括良性、交界性及高度恶性的广谱生物学行为,通过初步筛选恶性GIST与交界性GIST差异表达的microRNA (miRNA),探讨miRNA在GIST恶性转化过程中的潜在作用.方法 收集6例胃GIST标本,恶性组3例,交界组3例.用Agilent人miRNA寡核苷酸基因芯片V3(955个已知的miRNA)进行检测.选取恶性组与交界组之间4个差异表达明显的miRNA,利用荧光即时定量PCR技术,在22个样本中进行验证.结果 恶性组与交界组相比较,相差倍数2倍以上且P值小于0.05的差异表达miRNA有14个,上调的有5个,下调的有9个.其中差异明显,即P值小的4个miRNA,分别为miR-221、miR-135b、miR-675 *、miR-218,前两者在恶性组中上调,后两者下调.荧光即时定量PCR在22个样本中验证显示,miR-221和miR-675*的差异倍数与基因芯片的结果基本相符.结论 通过miRNA芯片初步筛选和荧光即时定量PCR验证,显示miR-221和miR-675*在恶性和交界性GIST中的表达有差异性,提示两者可能与GIST的恶性转化有关,在GIST的生物学行为判断上有潜在的应用价值.

  • 胶质瘤miR-218与细胞周期蛋白依赖性激酶6表达的相互关系及其对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响

    作者:张景敏;孙翠云;于士柱;王虔;安同岭;李艳艳;孔妍玲;温艳军

    目的 探讨胶质瘤细胞中miR-218及细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)表达变化的相互关系及其对肿瘤细胞增殖及凋亡的影响.方法 采用组织微阵列、锁定寡核苷酸探针原位杂交及免疫组织化学(ABC法)方法,检测60例不同级别胶质瘤组织标本及10例对照脑组织中miR-218、CDK6及Ki-67抗原的表达状况,并分析三者之间的相互关系;胶质母细胞瘤细胞系(U87MG)分别被转染阴性对照序列(对照组)及miR-218 mimics(mimics组),采用即时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及免疫细胞化学方法 分别检测两组细胞中的miR-218水平及CDK6和Ki-67表达变化,用单细胞凝胶电泳检测凋亡细胞.结果 对照组、Ⅰ~Ⅱ级、Ⅲ级和Ⅳ级胶质瘤组miR-218阳性标记指数(LI,%)分别为22.45±0.59、4.00±1.07、1.87±1.06、0.94±0.78,四组间差异均有统计学意义(P<0.05);各组CDK6 LI分别为7.25±1.20、16.71±0.80、24.43±0.62、32.05±0.43,对照组与各胶质瘤组间及Ⅳ级组与Ⅰ~Ⅱ级组间差异有统计学意义(P<0.01);各组Ki-67阳性细胞密度分别为0.00±0.00、9.30±3.48、31.15±9.44、60.15±13.60[(±s)/0.05 mm2],各组间差异均有统计学意义(P<0.01);miR-218 LI与CDK6 LI及Ki-67阳性细胞密度间均呈显著性负相关(r=-0.480,-0.534,P<0.01),后两者间呈显著性正相关(r=0.530,P<0.01).mimics组的miR-218水平明显高于对照组,其CDK6及Ki-67 LI(14.74±1.19、30.88±3.31)均明显低于对照组(79.06±2.07、64.94±3.96,P<0.01),而凋亡指数(68.44±7.05)明显高于对照组(13.04±0.97),以上各指标两组间差异均有统计学意义(P<0.01).结论 miR-218表达水平是评价胶质瘤良恶性程度的重要参考指标;其表达异常减少可导致胶质瘤细胞CDK6表达及增殖活性增强;补充外源性miR-218可有效下调恶性胶质瘤细胞CDK6表达、抑制其增殖和促进其凋亡,故在恶性胶质瘤基因治疗中具有重要的潜在应用价值.

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