首页 > 文献资料
-
微小RNA-34a调控高糖诱导H9c2心肌细胞凋亡的初步研究
目的 探讨微小RNA-34a(miR-34a)对高糖诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响.方法 将培养的H9c2心肌细胞随机分为3组:正常组(葡萄糖浓度5.5 mmol/L )、高糖组(葡萄糖浓度33 mmol/L),抑制剂组(miR-34a抑制剂浓度50 nmol/L+葡萄糖33 mmol/L).采用定量PCR检测miR-34a和凋亡相关基因Bcl-2基因表达的变化,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2表达的变化;采用流式细胞术检测细胞凋亡.结果 与正常组比较,高糖组心肌H9c2细胞凋亡率明显升高(P<0.05),H9c2细胞miR-34a表达显著上调(P<0.05),H9c2细胞Bcl-2 mRNA和蛋白表达减少(P<0.05).与高糖组比较,抑制剂组H9c2细胞凋亡明显下降(P<0.05),H9c2细胞Bcl-2 mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05).结论 miR-34a能调控高糖所致的H9c2心肌细胞凋亡,可能是通过直接抑制抗凋亡基因Bcl-2的表达而实现的.
-
微小RNA-130a调控人巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1在动脉粥样硬化的作用
目的 探讨微小RNA-130a(microRNA-130a,miR-130a)靶向调控人巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)在动脉粥样硬化的作用.方法 培养人单核巨噬细胞(THP-1),分为实验组和对照组.利用lipofectamine2000转染试剂,分别将miR-130a mimics或阴性对照转染到THP-1中,通过液体闪烁计数测定荷脂THP-1内胆固醇流出情况,高效液相色谱检测细胞内脂质含量;油红0染色显示细胞内脂滴情况.生物信息学软件预测miR-130a的靶基因,并利用双荧光素酶报告基因系统进行验证.通过Western blot检测靶基因ABCA1蛋白表达变化.结果 实验组较对照组显著抑制THP-1内胆固醇流出[(5.24±2.36)％ vs (12.58±3.92)％,P＜0.05].实验组THP-1内胆固醇、胆固醇酯、游离胆固醇较对照组明显增高(P＜0.05),细胞内脂滴稠密且体积肥大.生物信息学分析显示,miR-130a的靶基因为ABCA1,经体外双荧光素酶报告基因系统检测,证实ABCA1是miR 130a的靶基因.实验组ABCA1蛋白表达水平较对照组明显降低(0.13±0.05 vs 0.38±0.09,P＜0.05).结论 miR-130a具有调控THP-1内胆固醇流出的功能,其机制可能与靶向调控ABCA1有关.
-
微小RNA-1慢病毒载体介导大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的研究
目的 通过微小RNA-1(microRNA-1,miR-1)慢病毒载体转染大鼠骨髓间充质干细胞(MSC),探讨miR-1对MSC向心肌细胞分化的影响.方法 采用全骨髓贴壁培养法分离培养大鼠MSC并进行流式细胞学鉴定;构建表达miR-1慢病毒载体;将miR-1慢病毒载体转染大鼠MSC(MSCmiR-1)连续培养15 d,光镜下观察转染后细胞形态,分别于0、4、6、15 d qRT-PCR检测miR-1、心肌相关基因锌指结构蛋白(GATA-4)、肌钙蛋白I(cTnI)、α肌动蛋白(α-actin)的表达;免疫荧光观察cTnI的表达;Western blot检测α-actin的表达.结果 原代大鼠MSC呈长梭形、漩涡状生长,流式细胞学检测显示,98%以上细胞表达CD44和CD29,不足1%细胞表达CD45;成功构建miR-1重组慢病毒载体,病毒滴度为3×108 TU/μl;转导miR-1后,MSCmiR-1高表达心肌特异性相关基因GATA-4、α-actin、cTnI,并随时间逐渐增强,转染4 d免疫荧光检测可见cTnI在部分MSCmiR-1中表达,于15 d时表达强,Western blot进一步证实了α-actin在MSCmiR-1中表达.结论 转导miR-1至大鼠MSC中可促使其向心肌样细胞的分化.
-
微小RNA-145调控解整合素金属蛋白酶17对内皮细胞间质转化的影响
目的 探讨微小RNA-145(miR-145)对解整合素金属蛋白酶17(ADAM17)的调控作用及其对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)间质转化的影响.方法 培养的HUVEC用转化生长因子p1(TGF-β1)诱导,免疫荧光化学检测钙粘蛋白和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达.生物信息学方法预测miR-145和ADAM17基因的靶向匹配关系,并应用双荧光素酶报告基因系统鉴定.将HUVEC分为control组、TGF-β1组以及转染miR-145模拟物的mimics组,RT-PCR和Western blot检测miR-145、ADAM17及钙粘蛋白和α SMA的表达.结果 miR-145和ADAM17基因匹配良好;mimics组荧光素酶表达水平明显低于control组[(50.96±6.02)％ vs (100.00±0)％,P＜0.05];与TGF ％1组比较,mimics组ADAM17和α SMA基因和蛋白表达下降,而钙粘蛋白基因和蛋白表达上调(P＜0.05).结论 miR-145负性调控ADAM17表达能够抑制间质转化过程.
-
微小RNA-335调控缺氧复氧诱导下心肌微血管内皮细胞的凋亡
目的 探讨微小RNA(miRNA)-335对缺氧复氧(H/R)诱导下大鼠心肌微血管内皮细胞(CMEC)凋亡的作用及其机制.方法 建立大鼠CMEC H/R模型.采用体外合成的大鼠miR-335的模拟物和抑制剂,用脂质体转染培养的大鼠CMEC 48 h后,H/R处理细胞.实验分为4组:对照组(CTL组)、H/R组、H/R加miR-335模拟物组(mimic组)、H/R加miR-335抑制剂组(inhibitor组).采用超氧化物阴离子荧光探针法观察细胞内超氧阴离子(O2·-)的变化水平、JC-1试剂盒检测细胞线粒体膜电位的变化,流式细胞仪检测各组细胞凋亡.结果 在H/R处理后,H/R组超氧化物歧化酶(SOD2)蛋白表达明显下调,而miR 335的表达明显上调.与CTL组比较,H/R组、mimic组、inhibitor组O2·-水平[(35.23±3.21)％、(46.71±2.58)％、(15.9±2.13)％ vs (4.46±0.98)％,P＜0.01]、细胞凋亡率[(30.46±1.63) ％、(40.21±1.73)％、(17.83±1.45)％ vs (2.14±0.33)％,P＜0.01]明显上升,橙光与绿光比值[(0.47±0.03)、(0.28±0.05)、(0.66±0.03) vs (1.0±0.07),P＜0.01]显著下降.结论 miR-335能够增加氧化应激条件下心肌微血管内皮细胞的凋亡,miR-335通过调控SOD2蛋白的表达,在缺氧复氧介导的线粒体凋亡途径中扮演了关键性的作用.
-
多西环素对慢性间歇缺氧所致的心房重构的改善作用
目的 探究多西环素对慢性间歇缺氧(CIH)所致大鼠心房重构的相关干预机制.方法 45只雄性SD大鼠随机分为对照组、慢性间歇缺氧组(模型组)及多西环素干预组(干预组),每组各15只.模型组大鼠每日接受间歇缺氧6h,持续30 d,干预组大鼠在间歇缺氧的基础上给予多西环素进行干预.行超声心动图检查之后,每组随机挑选5只进行体外心脏电生理学实验,剩余10只大鼠留取心房组织进行病理学及分子生物学实验.Masson染色观察大鼠心房肌组织纤维化程度,实时荧光定量聚合酶联反应和Western blot用于检测心房组织中微小RNA(miR)-1、miR-21、miR-29b、miR-30、miR-133a、miR-328、转化生长因子β1(TGF-β1)及结缔组织生长因子(CTGF)表达水平的变化.结果 与对照组比较,模型组大鼠左心房胶原分数和心房颤动(AF)诱发率明显增加[(6.40±0.84)％vs (1.50±0.23)％和(36.0±10.8)％vs(24.0±14.3)％,P＜0.05],心房组织miR-1、miR-21、miR-133a、miR-328、TGF-β1及CTGF的表达水平明显升高.与模型组比较,干预组左心房胶原分数明显降低[(2.84±0.69)％vs(6.40±0.84)％,P＜0.05],AF诱发率有所改善,但差异无统计学意义(P＞0.05),miR-21、miR-133a、TGF-β1/β肌动蛋白(β-actin)及CTGF/β-actin的表达水平明显改善.结论 CIH可导致大鼠心房的结构重构和电重构,而miR-1、miR-21、miR-133a、miR-328、TGF-β1及CTGF表达水平的升高在心房重构中具有重要作用,多西环素可能通过干预miR-133a、TGF-β1、CTGF信号通路进而改善CIH导致的心房重构.
-
电针脑缺血大鼠水沟穴调节微小RNA-328促进血管新生的机制研究
目的 观察电针脑缺血大鼠水沟穴对缺血半暗带区血管新生及微小RNA(miR-328)、CD44mRNA和蛋白表达的影响,探讨电针脑缺血大鼠水沟穴调节miR 328促血管新生的机制.方法 SD雄性大鼠80只,随机分为正常纽、假手术组、模型纽、电针组,每组各5只.Longa法评估各组大鼠神经功能缺损,免疫组织化学染色法观察CD34变化,实时荧光定量PCR技术检测miR-328、CD44 mRNA表达水平,Western blot技术检测CD44蛋白表达水平.结果 假手术组与正常组大鼠在神经功能缺损、CD34为标记的血管新生、miR 328和CD44表达无差异(P＞0.05).与假手术组比较,模型组神经功能缺损、血管新生、miR-328、CD44表达明显增加(P＜＜0.01);与模型组比较,电针刺组神经功能缺损程度改善[(2.6±0.6)分vs (3.4±0.6)分,P＜0.01],血管新生增加显著[(80.40±3.85) vs (67.60±2.79)分,P＜＜0.01],miR-328 1.22±0.37vs 2.02±0.22和CD44 mRNA 4.35±1.33 vs 7.16±1.83,CD44蛋白0.42±0.04 vs 0.55±0.06表达降低(P＜0.05,P＜＜0.01).结论 电针水沟穴可通过调节miR-328及靶基因CD44表达水平,促进缺血半暗带区的血管新生.
-
微小RNA-1266对钠通道蛋白表达和分布的影响
目的 探讨心房颤动(AF)相关微小RNA-1266-5 p(miR-1266-5p)与AF相关钠离子通道蛋白α亚基编码基因SCNA5的靶向调控关系.方法 构建含有预测结合位点3'非翻译区(3'UTR)序列的靶基因,将其与阴性对照质粒以及miRNA共转染入人胚肾HEK293细胞,实验分为空白对照组、阴性对照组、实验一组(pcDNA3.1-SCN5A 3'UTR改建质粒+miR-1266)和实验二组(pcDNA3.1-SCN5A WT质粒,不合3'UTR端+miR-1266),荧光定量PCR法和Western blot法检测各组钠通道蛋白SCN5A mRNA和Nav1.5蛋白表达变化,免疫荧光实验观察SCN5A Nav1.5蛋白表达和分布变化.结果 与空白对照组和阴性对照组比较,实验一组SCN5A mRNA表达分别下调49.4％和46.0％,差异有统计学意义(0.557±0.016 vs 1.101±0.132和1.031±0.020,P＜0.05),而实验二组SCN5A mRNA表达无显著变化(P＞0.05);实验一组SCN5A Nav1.5蛋白表达下降,而实验二组SCN5A Nav1.5蛋白表达无显著变化;实验一组和实验二组的SCN5A Nav1.5蛋白分布都无显著变化.结论 SCN5A可能是miR-1266的直接靶基因,miR-1266可能通过负性调控SCN5A表达参与AF电重构.
-
微小RNA-155调节钙调磷酸酶和活化T细胞核因子4表达对心肌细胞肥大的影响
目的 研究微小(microRNA,miR)-155对心肌细胞肥大的影响及对钙调磷酸酶(CaN-β)和活化T细胞核因子4(NFAT 4)表达的调控作用.方法 培养大鼠心肌细胞H9C2(2-1),血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导心肌细胞肥大,脂质体转染法将miR-155模拟物和miR-155抑制物转染入心肌细胞.分为对照组、AngⅡ组、mimics组、inhibitors 组、AngⅡ+mimics组和AngⅡ+inhibitors组.实时荧光定量PCR检测心肌细胞miR-155的表达.逆转录PCR法检测心房钠尿肽(ANP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)和CaN-β mRNA表达水平.Western blot法检测CaN-β和NFAT-4蛋白表达水平.结果 与AngⅡ组比较,AngⅡ+mimics组ANP、β-MHC、心肌细胞表面积、CaN-βmRNA和蛋白表达及NFAT-4蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 CaN-β可能为miR-155的作用靶点,miR-155可通过负性调控CaN-β和NFAT-4的表达,减少心肌细胞ANP和β-MHC表达,抑制心肌细胞肥大.
-
重组腺病毒miR-15b对心肌细胞凋亡的影响
目的 通过构建miR-15b过表达及低表达腺病毒载体,探索其对心肌细胞凋亡的影响.方法 体外分离培养SD乳鼠原代心肌细胞,建立模拟心肌缺氧/复氧(H/R)模型.实验随机分为对照组、H/R组、miR-15b过表达组(AdmiR-15b组)、miR-15b低表达组(AdasmiR-15b组)、miR-15b阴性对照组(AdmiR-NC组).Annexin V-异硫氰酸荧光素标记/碘化丙啶标记细胞后,流式细胞仪检测细胞凋亡.Taqman实时定量PCR法精确定量miR-15b表达水平.结果 细胞转染效率为100％.与AdmiR-NC组比较,AdmiR-15b组miR-15b表达上调＞9倍,而AdasmiR-15b组表达下调50％(P＜0.01).与对照组比较,H/R组、AdmiR-NC组细胞凋亡率明显升高(P＜0.01)；与AdmiR-NC组比较,AdmiR-15b组细胞凋亡率明显升高,AdasmiR- 15b组明显降低(P＜0.01).结论 在心肌细胞miR-15b为重要的凋亡调节因子,阻断miR-15b表达有可能减少心肌细胞凋亡,从而保护心肌减轻再灌注损伤.
-
微小RNA-320在缺氧诱导的大鼠神经细胞中的表达和功能研究
目的 研究微小RNA-320(microRNA-320,miR-320)在缺氧诱导的大鼠PC12细胞的表达特征,并探讨其对PC12细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用荧光定量PCR检测常氧组和缺氧诱导组PC12细胞中miR-320表达情况;转染miR-320 mimics(实验组)和mimics control(对照组)至缺氧诱导的PC12细胞,采用细胞增殖实验和ELISA法观察细胞增殖和凋亡情况.结果 缺氧诱导组PC 12细胞中miR-320表达显著低于常氧组(0.27±0.14vs 1.01±0.21,P＜0.05).实验组细胞内源性miR-320表达显著高于对照组(6.57±0.92 vs 1.54±0.21,P＜0.05).对照组PC12细胞24、48和72 h增殖率分别为(11.57±3.21)％、(14.39±3.57)％和(17.28±4.49)％,实验组分别为(19.15±4.02)％、(24.20±5.12)％和(29.36±5.78)％.对照组PC12细胞中Bcl-2、Bax和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达量分剐为(1.67±0.52)μg/L、(2.15±0.24)μg/L和(4.66±0.79)μg/L,实验组分别为(3.01±0.77)μg/L、(0.33±0.04)μg/L和(1.59±0.46)μg/L,2组比较有显著差异(P＜0.05).结论 miR-320在缺氧诱导大鼠PC12细胞呈现低表达,体外升高其表达具有促进缺氧诱导PC12细胞增殖并抑制凋亡的功能.
-
微小RNA-106b参与内皮细胞介导的血管新生作用机制研究
目的：研究微小RNA（microRNA ，miR）-106b是否参与动脉粥样硬化相关的血管新生，明确miR-106b在内皮细胞中参与血管新生的作用机制。方法内皮细胞培养并转染miR-106b ，分为miR-106b组、空白对照组和阴性对照组。提取RNA、反转录及实时定量PCR检测miR-106b相对表达量以明确转染效率。观察各组内皮细胞在凝固的基质胶中管腔形成情况。TUNEL法检测转染后细胞凋亡状况并进行靶基因的预测，采用Western blot法检测筛选的蛋白相对表达量变化。结果与空白对照组和阴性对照比较，miR-106b组在基质胶中管腔形成明显减少；与阴性对照组比较，miR-106b组管腔比值、信号转导及转录激活因子3 mRNA相对表达量及蛋白表达明显降低（P＜0．05，P＜0．01）。阴性对照组与miR-106b组细胞凋亡率比较，差异无统计学意义（1．19％ vs 3．39％，P＞0．05）。结论 miR-106b在内皮细胞抑制血管新生可能是通过下调信号转导及转录激活因子3，与血管内皮生长因子无直接关系。
-
微小RNA-103靶向调控小窝蛋白1改善蛛网膜下腔出血后神经功能缺损
目的 探讨微小RNA-103(miR-103-3p)在蛛网膜下腔出血(SAH)后的表达情况以及对SAH后神经功能的影响,并探究其分子机制.方法 将60只雄性SD大鼠随机分为3组,假手术组12只,对照组24只和实验组24只.后2组采用血管内刺破法制造大鼠SAH模型前分别注射miR-103-3p空白对照和抑制剂.利用实时荧光定量PCR技术比较各组miR-103-3p mRNA的表达情况,Western blot技术检测各组小窝蛋白l(Cav-1)蛋白的表达情况,采用改良Garcia评分及平衡木实验评估各组SAH术后24 h及7d神经功能改变.结果 与假手术组比较,对照组miR-103-3p在SAH后24 h表达上调3.61倍,Cav-1表达下调46％.与对照组比较,实验组miR-103-3p在SAH术后24 h表达下调63％,Cav-1表达上调2.47倍.实验组大鼠SAH术后24 h[(ll.9±2.6)分 vs (9.2±3.2)分]及7 d[(12.4±2.6)分 vs (9.5±2.4)分]较对照组神经功能缺损评分明显升高(P＜0.05).结论 miR-103-3p在SAH术后24 h表达明显升高,抑制miR-103-3p可通过增加Cav-1的表达,从而有效改善大鼠SAH术后神经功能缺损.
-
β3肾上腺素能受体通过微小RNA对慢性心力衰竭大鼠左心房肌L型钙离子通道的调控
目的 探讨β3肾上腺素能受体(β3-AR)对慢性心力衰竭(CHF)大鼠左心房肌L型Ca2+通道亚单位α2δ-2编码基因CACNA2D2的调控是否与微小RNA(miRNA)-1及miRNA-328存在关联.方法 22只雄性Wistar大鼠随机选6只为正常对照组(NC组),另16只采用皮下注射异丙肾上腺素建立CHF动物模型,将存活的12只大鼠再随机分为CHF组6只和BRL组(在大鼠尾静脉注射β3-AR特异性激动剂BRL-37344)6只.采用超声心动图检测大鼠左心房内径(LAD)、左心房射血分数(LAEF)及LVEF.采用苏木精-伊红染色检测大鼠左心房肌病理学变化.采用实时荧光定量PCR检测大鼠左心房肌β3-AR、CACNA2D2以及miRNA-1、miRNA-328表达水平.结果 BRL组大鼠LAD显著大于NC组和CHF组[(4.42±0.15)mm vs (3.50±0.21)mm和(4.09±0.17)mm,P＜0.01];BRL组LAEF显著低于NC组和CHF组[(34.91±1.51)％ vs (59.89±3.17)％和(40.09±0.95)％,P＜0.01].与CHF组比较,BRL组大鼠左心房肌细胞水肿进一步加重,可见明显肥大细胞等病理学改变更显著.与NC组比较,CHF组大鼠左心房肌ββ3-AR、CACNA2D2、miRNA-1及miRNA-328表达上调(P＜0.01);与CHF组比较,BRL组大鼠左心房肌β3-AR、CACNA2D2、miRNA-1及miRNA-328表达进一步上调(P＜0.01).miRNA-1、miRNA-328、CACNA2D2与β3-AR表达呈正相关(r=0.870、0.904、0.911,P＜0.01);CACNA2D2与miRNA-1、miRNA-328表达呈正相关(r =0.880、0.954,P＜0.01).结论 β3-AR对左心房CACNA2D2的正性调控可能与miRNA-1、miRNA-328存在关联.
-
微小RNA与动脉粥样硬化的研究进展
微小RNA(MicroRNA,miRNA)是一类在人体广泛分布的非编码RNA,主要通过与mRNA结合,导致其翻译受到抑制或引起mRNA降解,而在转录水平影响基因的表达.近些年有学者发现,miRNA参与动脉粥样硬化的发生、发展.本研究阐述了在动脉粥样硬化过程中,与平滑肌细胞、内皮细胞、单核/巨噬细胞密切相关的miRNA及作用.
-
微小RNA-1在心血管疾病中的研究进展及作用机制
微小RNA (microRNA,miRNA)是一类保守的单链非编码RNA分子,以序列特异性方式在转录后水平调控靶基因表达[1].目前研究发现,动植物和病毒中均存在大量的miRNA表达,并可参与包括细胞增殖、凋亡、分化和代谢等多种生物学进程[2].
-
微小RNA与动脉粥样硬化
动脉粥样硬化是各种损伤刺激作用于动脉管壁引起的,涉及多细胞、多因素、多环节的全身性疾病,其发病机制至今未完全阐明[1-2].微小RNA(miRNA)是一类在进化上高度保守的非编码小分子单链RNA(约22个碱基),在转录后水平负性调控基因表达[3].大量研究证实,miRNA与动脉粥样硬化关系密切,斑块的形成、发展、破裂及血栓形成过程均受到miRNA的调控[4].
-
微小RNA-155在冠心病的研究进展
冠状动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)性心脏病简称冠心病,指冠状动脉发生粥样硬化引起的管腔狭窄或闭塞,导致心肌缺血缺氧或者坏死而引起的心脏病.冠心病是AS导致器官病变的常见的类型,也是严重危害人类健康的常见病.
-
循环微颗粒携带微小RNA在心血管疾病中的研究进展
微颗粒是细胞在活化、凋亡过程中形成的微小囊泡[1].微颗粒广泛存在于血液、组织和细胞中,与机体多种病理生理过程有关(如心血管疾病、糖尿病、炎性反应、肿瘤等)[2].关于微小RNA(microRNA,miRNA)的研究已经成为生命科学领域研究的热点,越来越多的研究表明,miRNA与人类多种疾病密切相关.
-
微小RNA在缺血再灌注损伤中的作用研究
在缺血性疾病的发生发展过程中,对组织造成损伤的主要因素,不是缺血本身,而是恢复血液供应后,过量的自由基攻击,重新获得血液供应的组织内的细胞,引起组织细胞的二次损伤,这种损伤叫做“缺血再灌注损伤”.缺血再灌注造成的损伤远远大于缺血本身引起的供血不足和氧化应激损伤,常常引起细胞死亡(包括坏死和凋亡)、肥大、血管生成及纤维化和功能紊乱.
