首页 > 文献资料
-
小鼠着床前胚胎miR-125a,miR-295和miR-181b的表达
目的:研究小鼠着床前胚胎发育过程中miRNA表达水平的变化,探讨miRNA对着床前胚胎发育过程的作用. 方法:建立小鼠超排、交配系统,收集着床前胚胎,提取small RNA;采用miRNA特异RT引物进行反转录,采用SYBR Green实时定量PCR技术,研究miR-125a, miR-295和miR-181b在小鼠着床前胚胎发育过程中表达水平的变化. 结果:着床前胚胎发育的各阶段均表达miR-125a, miR-295和miR-181b;随着胚胎发育进程,miR-295的表达呈逐渐上升的趋势;miR-125a在卵母细胞到2细胞发育阶段呈下降趋势,以后随发育进程呈逐渐上升趋势. 结论:小鼠着床前胚胎中表达miRNA,着床前胚胎的发育和分化过程可能受到miRNA的调控.
-
HBV源性MicroRNA前体分子预测
目的:预测HBV基因编码的microRNA分子前体.方法:采用VMir软件,对HBV全基因进行扫描,通过对所得序列的评分及结构分析,得到HBV编码的microRNA的候选前体分子;通过Northern blot实验,对预测结果进行初步验证.结果:通过VMir的预测,得到3个HBV可能编码的microRNA分子前体,即MD6,MD20,MR31;通过Northern blot实验,只有针对于MD17的探针杂交后出现特异性条带.结论:MD17可能为HBV基因组编码的microRNA前体分子.
-
子痫前期患者中孕期子宫动脉血流多普勒联合血清miR-10b检测的临床应用价值
目的:探讨子宫动脉血流多普勒联合血清微小RNA-10b(miR-10b)检测在中孕期子痫前期(PE)患者预测诊断、疾病监测中的临床价值.方法:选取常规产检的孕妇141例,均于孕中期(孕28～32周)应用多普勒超声检测并记录子宫动脉的阻力指数(RI)、搏动指数(PI)以及收缩期峰值血流速度与舒张末期血流速度的比值(S/D);实时定量PCR(RT-qPCR)检测血清中miR-10b水平;随访所有患者孕晚期临床诊断结果及妊娠结局,回顾分析并应用ROC曲线判断子宫动脉血流多普勒联合血清miR-10b表达在PE预测诊断中的临床价值.结果:141例孕产妇中共有24例发生PE(17％),所有孕妇妊娠结局良好;24例PE孕产妇(PE组)中孕期子宫动脉的RI、PI以及S/D值明显高于117例正常孕产妇(对照组);PE组中孕期血清miR-10b表达水平低于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05).子宫动脉血流多普勒联合血清miR-10b表达应用于PE预测诊断的特异性为90.51％,优于诊断指标的单独应用.结论:中孕期血清miR-10b检测联合子宫动脉血流多普勒应用,两者相互弥补,对于子痫前期的预测诊断、监测具有一定临床价值.
-
miR-182在胆囊癌中的表达及其对胆囊癌细胞增殖、侵袭能力的影响
目的:检测miR-182在胆囊癌中的表达,探讨其影响胆囊癌细胞增殖、侵袭的可能机制.方法:实时荧光定量PCR检测miR-182、p38在10例胆囊癌组织、癌旁组织中的表达情况;应用miR-182 mimics转染胆囊癌细胞GBC-SD,应用p38 MAPK信号通路特异性阻滞剂SB203580处理转染miR-182 mimics的GBC-SD细胞,通过MTT实验、细胞周期检测、Transwell小室检测miR-182对GBC-SD细胞增殖、侵袭能力的影响.结果:胆囊癌组织中miR-182、p38的表达高于癌旁组织;miR-182 mimics转染GBC-SD细胞后,p38的表达水平随之升高(P＜0.05),细胞增殖能力增强,细胞迁移数增多(75±8),S期细胞比例增多[(68.81±7.57)％];应用SB203580处理转染miR-182的GBC-SD细胞,细胞增殖能力降低,细胞迁移数减少(23±5),S期细胞比例减少[(34.49±7.05)％].结论:miR-182在胆囊癌组织中高表达,通过上调p38 MAPK信号通路增强胆囊癌细胞的增殖、侵袭能力,参与了胆囊癌的发生发展过程.
-
miR-3960真核表达载体的构建及其对成骨细胞矿化的影响
目的:构建miR-3960的真核表达载体,并观察其对成骨细胞矿化的影响.方法:设计引物合成miR-3960的前体序列,将其克隆到真核表达载体pSilencer4.1-CMV puro中,构建成pSilencer4.1-miR-3960重组体.通过酶切及测序证实构建是否成功.随后将miR-3960表达载体转染小鼠基质细胞ST2,Northern blot检测miR-3960表达水平.用BMP-2诱导ST2细胞向成骨细胞分化,通过检测钙沉积量来观察对成骨细胞矿化的影响.结果:pSilencer4.1-miR-3960真核表达载体经酶切及测序鉴定正确.pSilencer4.1-miR-3960转染ST2细胞后,能有效表达miR-3960.经BMP-2诱导分化5d后,稳定转染组钙沉积量较对照组显著增加.结论:成功构建了真核表达载体pSilencer4.1-miR-3960,转染ST2细胞后能有效表达.miR-3960可以促进成骨细胞矿化.
-
miRNA-106a在肝癌中的表达及其作用
目的：检测miRNA-106a（miR-106a）在肝癌中的表达情况，体外观察其对肝癌细胞株HepG-2细胞增殖、侵袭转移能力的影响。方法：取肝癌手术标本及其对应的癌旁组织，通过实时定量PCR检测 miR-106a在肝癌中的表达情况，转染miR-106a mimics或inhibitors及其 NC对照后，用MTT 法检测肝癌细胞株 HepG-2的增殖能力变化，使用transwell小室检测侵袭能力变化，同时使用实时定量PCR和Western bolt观察干预后细胞内TGFBR2及EM T指标E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的mRNA及蛋白水平变化。结果：miR-106a在肝癌中上调，转染 miR-106a mimics后肝癌细胞增殖率升高，侵袭能力加强，实时定量PCR和Western bolt结果显示TGFBR2表达受到抑制，EM T 指标E-cadherin表达下调N-cadherin和Vimentin的表达上调，而转染miR-106a inhibitors后结果相反。结论：miR-106a在肝癌中上调，促进肝癌细胞增殖、侵袭，其机制可能与抑制TGFBR2和E-cadherin ，上调N-cadherin和Vimentin的表达有关。
-
miR-181与肿瘤的研究进展
miRNA是一种广泛存在于真核生物的内源性小分子RNA,在肿瘤的发生发展过程中起着重要作用.miR-181作为一种重要的miRNA,既可以发挥抑癌基因作用,也可以表现为癌基因的作用,与多种肿瘤的发生发展密切相关.大量研究表明miR-181家族的表达水平对消化道肿瘤的临床诊断、治疗和预后判断具有重要的研究意义.
-
miR-181与肿瘤的研究进展
miRNA是一种广泛存在于真核生物的内源性小分子RNA,在肿瘤的发生发展过程中起着重要作用.miR-181作为一种重要的miRNA,既可以发挥抑癌基因作用,也可以表现为癌基因的作用,与多种肿瘤的发生发展密切相关.大量研究表明miR-181家族的表达水平对消化道肿瘤的临床诊断、治疗和预后判断具有重要的研究意义.
-
微RNAs与肝癌关系的研究进展
MicroRNAs作为一类内源性非编码的小分子RNA,在调节基因表达、细胞增殖与分化等一系列生命活动中起着重要作用.肝癌是一种常见的恶性肿瘤,发病率高且患者5年生存率低,严重威胁人类健康.近年来的研究结果显示:MicroRNAs在肝癌中具有癌基因或抑癌基因的功能,与肝癌的发生、发展、诊断、治疗以及预后有着密切的关系.
-
双功能短肽修饰壳聚糖介导miR-140基因修复兔关节软骨损伤的效果
目的 观察核定位信号肽偶联核激酶底物短肽(NNS)修饰的壳聚糖(CS)(NNS CS)介导人miR-140基因,局部转染促进兔关节软骨损伤修复的效果. 方法 构建GV268-miR-140真核表达质粒,将NNS CS分别与阴性对照质粒GV268及重组质粒GV268-miR-140复合形成NNSCS/GV268及NNS CS/GV268-miR-140复合物.选取健康雄性新西兰大耳白兔18只,单侧右后肢按随机数字表法分成转基因组(A组)、阴性对照组(B组)、假手术组(C组),每组6只.A组与B组均制备股骨滑车全层软骨损伤模型;C组仅暴露股骨滑车关节面.术后1周,A组给予NNSCS/GV268-miR-140复合物,B组给予NNS CS/GV268复合物,C组给予等量等渗盐水,每周2次,持续7周.术后8周末,处死动物并取材.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测缺损区软骨组织内miR-140、Sox9、Aggrecan和Hdac4表达;HE染色、番红O-固绿染色及Aggrecan免疫组化染色评估缺损区软骨修复情况. 结果 RT-qPCR检测结果显示,A组miR-140表达水平(3.16±0.37)较B组(1.00±0.24)和C组(1.24±0.18)明显升高(P＜0.05);A组Sox9表达水平(4.38±0.66)较B组(1.04±0.04)和C组(1.19±0.30)明显上调(P＜0.05);A组Aggrecan表达水平(3.63±0.58)较B组(1.21±0.14)和C组(1.34±0.13)明显上调(P＜0.05).A组Hdac4表达水平(0.37±0.06)较B组(0.81±0.06)明显下调(P＜0.05).HE染色、番红O-固绿染色及Aggrecan免疫组化染色显示,A组缺损处呈现明显的软骨性修复,B组缺损处出现大量纤维组织增生和炎性细胞浸润,未见软骨性修复. 结论 NNSCS可携带外源基因进入软骨细胞并在局部大量表达;高表达的miR-140可能通过上调Aggrecan和Sox9表达及下调Hdac4表达,从而明显促进损伤软骨的修复,可为其今后用于治疗软骨损伤提供实验基础.
-
miR-181b影响ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化形成的自噬调节机制
目的 探讨微小RNA 181b(miR-181b)是否通过调节自噬相关靶蛋白参与动脉粥样硬化发展.方法通过颈总动脉套环诱导ApoE-/-小鼠颈动脉粥样硬化斑块形成.通过尾静脉注射miR-181b慢病毒载体构建其过表达(miR-181bOE)及低表达(miR-181bKD)模型.检测血浆中脂质水平,苏木精-伊红染色对动脉粥样硬化斑块大小和体积进行定量,Western Blot检测自噬相关蛋白的表达.结果各组ApoE-/-小鼠血浆中总胆固醇 、三酰甘油 、低密度脂蛋白胆固醇水平均无显著差异(P>0.05).MiR-181bKD和miR-181bOE分别显著减少和增加颈动脉斑块面积和体积(F=118.95~322.03,P<0.05).MiR-181bOE可下调微管相关蛋白1轻链3膜结合型(LC3-Ⅱ)的表达,上调核糖体蛋白质S6激酶类70-kDa(p70S6K)表达,抑制自噬体形成;相反,miR-181bKD可上调LC3-Ⅱ 的表达,下调p70S6K表达,促进自噬体形成.差异均有显著性(F=107.38~398.13,P<0.05).结论抑制miR-181b可能通过下调p70S6K表达增加自噬活性,延缓颈动脉粥样硬化斑块的形成.
关键词： 动脉粥样硬化 微RNAs 自噬体 核糖体蛋白质S6激酶类 70-kDa -
miR-182-5p抑制剂对5-FU耐药胃癌细胞株化疗的增敏作用
目的 研究miR-182-5p抑制剂和5-氟尿嘧啶(5-FU)合用对5-FU耐药人胃癌(SGC7901/5-FU)细胞株增殖、凋亡及迁移能力的影响,探讨其对5-FU化疗的增敏作用.方法 将SGC7901/5-FU细胞株分为miR-182-5p寡核苷酸阴性质控组(A组)、miR-182-5p抑制剂组(B组)、5-FU处理组(C组)、miR-182-5p抑制剂与5-FU联合用药组(D组),采用MTT法检测各组SGC7901/5-FU细胞株的增殖情况,流式细胞仪检测各组SGC7901/5-FU细胞株的凋亡情况,Transwell法检测各组SGC7901/5-FU细胞株的迁移率.结果 D组SGC7901/5-FU细胞株的存活率、凋亡率及迁移率与A、B、C组比较,差异有统计学意义(F=107.38～490.53,q=4.23～48.60,P＜0.05).结论 miR-182-5p抑制剂与5-FU合用,显著降低了SGC7901/5-FU细胞株的增殖与迁移,促进细胞凋亡,增加SGC7901/5-FU细胞株对5-FU化疗的敏感性.
-
染料木黄酮抑制HCMV感染人星形胶质细胞的机制
目的 探讨染料木黄酮(Gen)抑制人巨细胞病毒(HCMV)感染人星形胶质细胞的效果及机制.方法 实验设立空白对照组(C组)、Gen对照组(G组)、HCMV组(V组)、HCMV+ Gen组(V+G组)及Gen+ HCMV组(G+V组).采用CCK-8筛选合适的药物浓度.采用反转录-实时定量PCR技术检测各组病毒即刻早期蛋白编码基因IE1和IE2、宿主hsa-miR-200家族及病毒miR-UL112的表达;采用染色质免疫共沉淀法检测与HCMV主要即刻早期启动子(MIEP)结合的组蛋白H3乙酰化的变化.结果 筛选出实验用药物浓度为10 μmol/L.与V组相比,G+V组和V+G组IE1、IE2基因的表达下调(F=14.790～126.000,P＜0.05),在部分时间段内hsa-miR-200家族及miR-ULI12表达上调(F=3.041～4 638.724,P＜0.05),与病毒MIEP结合的组蛋白H3的乙酰化降低(F=18.184～32.848,P＜0.05).结论 Gen能一定程度抑制HCMV感染人星形胶质细胞所致的增殖异常,其机制可能为Gen能一定程度抑制IE1和IE2基因的表达以及与病毒MIEP结合的组蛋白H3的乙酰化,并上调部分宿主hsa-miR-200 microRNA及病毒miR-UL112的表达.
-
黄芩素对HCMV感染人神经干细胞的作用及机制
目的 探讨黄芩素(BAI)对人巨细胞病毒(HCMV)体外感染的入神经干细胞的作用及其可能机制.方法 体外培养人神经干细胞,给予HCMV感染和不同浓度的BAI处理24、48、72 h,观察其形念学变化,采用MTT法检测BAI对HCMV感染人神经干细胞增殖的影响,采用实时荧光定量PCR技术检测BAI对HCMV感染人神经干细胞中miR-200和miR-UL112-3p表达的影响.结果 在病毒感染后24h,HCMV组细胞出现明显的细胞病变效应(CPE),10 μmol/L BAI+ HCMV组细胞CPE不明显.HCMV感染后24、48、72 h,10 μmol/L BAI+ HCMV组细胞MTT检测吸光度值均高于HCMV组(F=18.61～22.57,P＜0.05).HCMV感染人神经干细胞后24、48、72 h,miR-200和miR-UL112-3p表达下调,10 μmol/LBAI+ HCMV组和HCMV+ 10 μmol/L BAI组细胞miR-200和miR UL112-3p表达明显高于HCMV组(F=2.37～19.26,P＜0.05).结论 一定浓度BAI能够抑制HCMV感染人神经干细胞的增殖,这可能与其上调细胞内miR-200和miR-UL112-3p的表达有关.
-
MicroRNAs作为肝癌早期诊断标记物的研究进展
肝细胞癌(简称肝癌)是世界范围内常见且恶性程度高的恶性肿瘤之一,我国肝癌发病率和死亡率更是高居亚洲第一位.虽然肝癌病人的预后普遍较差,但早期肝癌手术治疗后5年生存率>70％.MicroRNAs(miRNAs)是近年发现的一系列广泛存在于真核细胞和病毒中能调控基因转录后表达的短链非编码RNA,这些miRNAs在包括肝癌在内的多种肿瘤的发生、发展及转归中扮演了重要角色.肝癌组织中存在多种异常表达的miRNAs,它们多靶向作用于与肝癌发生、发展相关的基因和信号通路.研究这些异常表达的miRNAs及其作用靶点为进一步阐明肝癌的发病机制、提高肝癌的早期诊断率提供了思路.本文就miRNAs作为可能的生物标志物在肝癌早期诊断中的价值做一综述.
-
非编码RNA调节自噬参与缺血性心脏病的发生和发展
缺血性心脏病严重危害人类身体健康.心肌缺血再灌注损伤是缺血性心脏病临床治疗中常见的一种病理损害,如何预防或减轻心肌缺血再灌注损伤已成为研究热点,但其具体机制仍不明确.近年来,非编码RNA及自噬在缺血性心脏病中的作用备受关注.本文就非编码RNA调节自噬参与缺血性心脏病的相关研究进展进行综述,以期为缺血性心脏病的治疗提供新思路.
-
miRNA在组织再生领域的研究进展
microRNA(miRNA)是生命进化过程中保守的非编码小RNA(约22个核苷酸大小),可以调控蛋白分子的表达,参与了几乎所有生物过程.再生医学的目标是使功能失调或者受损细胞、组织或器宫恢复正常的功能.本文就miRNA在组织再生领域应用的研究进展进行综述.
-
多囊卵巢综合征病人不同部位miRNA表达的研究进展
microRNA (miRNA)作为一种非编码小分子单链RNA,主要在转录后水平调控基因的表达.近来有学者对多囊卵巢综合征(PCOS)病人不同部位miRNA进行了检测,结果显示,与健康对照组相比,PCOS病人miRNA表达谱存在不同程度差异,异常表达的miRNA参与了PCOS发生发展的病理过程.miRNA作为代谢过程的调节因子,有希望成为PCOS诊断、治疗的新靶标.本文就PCOS病人血液、卵泡液、颗粒细胞等不同部位miRNA的差异表达进行综述.
-
小鼠白血病细胞L1210外泌体微RNA表达谱及其功能分析
目的：对白血病细胞外泌体（LCEX）中微 RNA（miRNA）的表达特点及其功能进行分析。方法以小鼠白血病细胞株 L1210为模型，应用密度梯度超速离心法分离其培养上清，获得 LCEX L1210，应用基因芯片技术检测 L1210细胞和 LCEXL1210中 miRNA 的表达，比较二者 miRNA 的表达，对部分差异表达的miRNA 应用实时荧光定量 PCR 进行验证，通过 Gene Ontology 数据库分析。结果在 LCEX L1210中共鉴定出1044种 miRNA，L1210细胞中共鉴定出872种 miRNA，其中732种 miRNA 为两者共有，两者共同表达的 miRNA 占 L1210细胞的83.9%，占 LCEXL1210的70.1%，提示 LCEXL1210中70%以上 miRNA 来自于其母细胞。在 LCEXL1210中有312种 miRNA 在其母体细胞中没有鉴定出，为 LCEXL1210所特有。有些miRNA 在 LCEXL1210中表达明显高于 L1210细胞，如 miR-16-1、miR-210及 miR-195等，提示 LCEX 的miRNA 表达与其母体细胞存在表达差异。对部分表达差异的 miRNA 应用实时荧光定量 PCR 验证显示，这些 LCEX 高表达的 miRNA 参与多种生物学功能及信号转导途径的调控。结论 LCEXL1210所含的miRNA 与其来源细胞 L1210细胞所含的 miRNA 有高度相似性，但有1／3的 miRNA 为其所特有。这些LCEXL1210中高表达的 miRNA 参与多种生物学功能及信号转导途径的调控。
-
微RNA在儿童B系淋巴细胞白血病、淋巴瘤中的研究进展
微RNA( miRNA)是近年来发现的一类新的非编码小分子RNA,miRNA在淋巴造血系统肿瘤的发生、发展及预后中发挥着重要的调节作用.文章就miRNA的产生、作用机制及其在儿童B系淋巴细胞白血病、淋巴瘤中的研究进展进行综述.
