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循环微小RNA在心血管疾病中应用的研究进展
微小RNA是一类长约22～25核苷酸的非编码RNA,在心肌细胞增殖凋亡以及疾病发病机制中发挥重要作用.近期关于微小RNA在心血管疾病中应用研究备受关注.在此,对微小RNA的特性与检测技术及在常见心血管疾病中应用价值进行阐述.
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循环微小RNA在疾病诊断中的应用进展
微小RNA(miRNA)是长约21个碱基的单链非编码RNA,可于转录后靶向作用于信使RNA(mRNA)分子从而使基因表达沉默.近来研究表明,miRNAs在信号转导、干细胞发育、肿瘤发生发展、感染与免疫等多种生理、病理过程中发挥重要作用.循环中的miRNAs广泛存在且非常稳定,随着疾病发生发展,循环miRNAs表达谱也会发生特异性改变,因此有可能成为疾病诊断、预后判断及疗效评价的新型生物标志物.同时,探索疾病相关miRNAs表达谱变化以及建立实验室检测的标准化质量评价体系也是未来分子诊断学发展所面临的挑战.
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竞争性内源性RNA与胃癌发病机制研究进展
近研究认为长链非编码RNA(lncRNA)、假基因(pseudogenes)、环状RNA(circRNA)等可以作为竞争性内源性RNA(ceRNA),结合微小RNA(miRNA),调控靶蛋白水平.这一新型的网络调控模式,优化了传统意义上的"由miRNA到RNA"线性作用方式,已然成为非编码RNA领域的研究热点.ceRNA网络调控异常,则会影响机体正常的生命活动,导致疾病的发生乃至肿瘤的形成.本文综述了ceRNA的主要成员及其参与胃癌发生机制的研究进展,以期为胃癌研究及临床诊断、治疗等提供新思路.
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中枢神经系统损伤潜在标志物microRNAs的研究进展
中枢神经系统（ CNS）损伤，如脑缺血损伤、创伤性脑损伤和脊髓损伤往往伴随着复杂的病理变化，并可能导致多种其他的神经系统疾病。在这一过程中，神经元、神经胶质细胞等多种细胞间通过众多基因表达的变化和相互作用进行精确调控。微小核糖核酸（ miRNA）作为一种内源性基因转录后调控分子，在CNS中广泛表达，病理条件下异常表达，并参与调控神经系统损伤后的多种病理过程，是CNS疾病潜在的生物标志物。（中华检验医学杂志，2015，38：211－214）
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高密度脂蛋白抗动脉粥样硬化的研究进展
冠状动脉粥样硬化性心脏病是导致全球非感染性疾病死亡的首要原因。高密度脂蛋白（ HDL）在抗动脉粥样硬化发生、发展中扮演着重要作用。近年发现，HDL可以携带微小RNA，并通过转运微小RNA实现抗内皮细胞炎症功能。不同HDL亚型在抗动脉粥样硬化中的具体功能开始逐渐被认识。逆向转运胆固醇、抗氧化、抗炎症及内皮细胞保护等一系列传统HDL抗动脉粥样硬化功能也都有了新的研究进展，为HDL的临床应用提供新的依据。（中华检验医学杂志，2016，39：315－318）
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miRNA在HPV相关肿瘤发生中的作用
高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)与宫颈癌、头颈部肿瘤等发生发展密切相关.微小RNA(miRNA)为20 ～ 25nt的小分子非编码RNA,参与肿瘤的增殖、凋亡、侵袭和转移等多种生物学过程.HR-HPV基因组可整合入宿主细胞基因组内,并表达病毒癌基因E6、E7以及E5等,从而影响下游的p53、pRb等基因以及miRNA的表达,导致宿主细胞发生癌变.
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急性冠状动脉综合征和稳定性冠状动脉疾病患者血清miR－133a水平变化的初步探讨
目的：探讨急性冠状动脉综合征（ACS）和稳定性冠状动脉性心脏病（SCAD）患者血清miR－133a的水平变化及临床价值。方法回顾性研究。选取2011年10月至2012年10月期间南京军区南京总医院住院的64例ACS、62例SCAD患者及70名常规体检的健康对照者，其中ACS和SCAD根据欧洲心脏病学会发布的诊断标准；采用TaqMan 实时荧光定量PCR技术检测血清miR－133a水平；同时分析其血脂、心肌损伤指标及冠状动脉疾病Gensini积分；采用ROC曲线分析计算曲线下面积（AUC）及其95％置信区间（CI），多项Logistic回归分析计算风险比（OR）值及其95％ CI。结果与健康对照者[ΔCt：1．00±0．05]相比，ACS[ΔCt：2．34±0．24]（t ＝6．059， P＜0．001）和SCAD[ΔCt：1．45±0．13]（t＝3．265， P＝0．001）患者血清miR－133a水平均显著升高，且ACS患者miR－133a水平显著高于SCAD患者（t＝3．133， P＝0．002）。相关性分析显示，ACS和SCAD患者血清miR－133a水平与心肌型肌酸激酶同工酶（CK－MB）（r＝0．402， P＜0．001）、肌钙蛋白I （cTNI）（r＝0．410， P＝0．001）及Gensini积分（r＝0．438， P＜0．001）呈正相关。 ROC曲线分析显示，血清miR－133a区分冠状动脉疾病（CAD）患者与健康对照者的AUC为0．717（95％ CI：0．645～0．788， P＜0．001）；区分ACS与SCAD患者的AUC为0．667（95％CI：0．573～0．761， P＝0．001）。 Logistic回归分析显示，在校正了年龄、性别及血脂水平的影响后，血清miR－133a水平的升高与ACS （ OR＝6．00，95％CI：1．93～18．67， P＝0．002）、SCAD （OR＝2．81，95％ CI：1．03～7．68， P＝0．044）的发生相关，且对ACS、SCAD 的区分具有显著意义（ OR ＝2．13，95％ CI：1．20～3．78， P ＝0．010）。结论CAD患者血清miR－133a水平显著升高，且ACS患者的水平变化较SCAD患者更为显著；血清miR－133a可能是CAD病情评估与判断的潜在标志物。（中华检验医学杂志，2015，38：686－690）
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乳腺癌患者血浆中miR－127－3p表达的临床价值
目的：探讨血浆miR－127－3p在乳腺癌患者中的表达及其临床意义。方法收集南通大学附属医院2013年10月至2014年1月收治的80例乳腺癌患者、70名良性乳腺肿瘤患者及70名健康体检者血浆标本，采用SYBR Green 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（ RT－PCR ）检测血浆中miR－127－3p含量，评价检测方法的线性、重复性及特异性，并对乳腺癌患者血浆miR－127－3p含量与癌胚抗原（CEA）、CA153浓度进行相关性分析。 Mann－Whitney检验分析血浆miR－127－3p的表达与乳腺癌患者临床病理特征的关系。结果成功建立血浆miR－127－3p的检测方法，乳腺癌患者血浆中miR－127－3p的相对表达量（RQ）14．158（5．424～16．465）显著高于乳腺良性肿瘤患者3．015（1．987～5．035）（P＝0．0006）和健康对照者2．375（1．173～4．370）（P＝0．0002）。而乳腺良性肿瘤患者与健康对照者之间，差异无统计学意义（ P＝0．143）。 miR－127－3p相对表达量与CA153浓度正相关性（R2＝0．457，P＝0．003）。 miR－127－3p ROC曲线下面积（AUC）为0．763，高于传统乳腺肿瘤标志物CEA和CA153。乳腺癌患者血浆miR－127－3p的表达水平在不同肿瘤直径、分化程度和TNM（ tumor node metastasis ）分期间差异无统计学意义（ P＞0．05）。结论 miR－127－3p在乳腺癌患者中高表达，可能是诊断乳腺癌患者的一个重要参考指标。（中华检验医学杂志，2015，38：682－685）
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循环microRNAs在溃疡性结肠炎发病和肠道炎症活动的作用
溃疡性结肠炎(UC)是炎症性肠病的主要类型,发病率逐年升高,其发病机制复杂,诊断和病情评估需要依赖结肠镜检查.近年来发现microRNAs通过调节特定mRNAs的蛋白质翻译过程来调节基因的表达,参与调控细胞分化、凋亡和炎症过程,特别是组织和循环血液中microRNAs参与调节UC的发病和病情活动.部分microRNAs可能成为很有前景的UC生物标志物.
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miRNA-126在冠状动脉支架内再狭窄中的表达及意义
目的 观察miR-126在冠状动脉支架内再狭窄(ISR)患者外周血中的表达并评估其意义.方法 收集2014年6月至2015年12月在济宁医学院附属医院心内科住院的26例支架内再狭窄患者为ISR组,收集同期未发生支架内再狭窄的患者40例,为non-ISR组.分别观察各组的临床资料和冠脉支架手术资料,用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测miR-126表达,比较两组间的miR-126表达差异;通过ROC曲线评估miR-126对冠脉支架术后患者发生ISR的诊断价值.生物信息学预测miR-126的靶基因,并对这些靶基因进行功能分析和富集.结果 ISR组与non-ISR组在冠脉病变特点和手术特点比较:支架直径[(3.21±0.88)mm,(3.15±0.67)mm]、支架长度[(20.83±4.92)mm,(21.02±4.75)mm]、支架释放大压力[(14.17±9.1)atm,(13.97±6.26)atm]两组间均差异无统计学意义(t=0.97,-1.04,0.87;P>0.05).miR-126在ISR组中的表达量(0.63±0.38)低于non-ISR组(1.36±1.03),差异有统计学意义(t=-5.46,P<0.01).ROC曲线分析基线miR-126对冠脉支架术后患者12~18个月时发生ISR的曲线下面积(AUC)为0.791(95%CI 0.671~0.912,P<0.01).通过数据库预测出miR-126的靶基因,对这些靶基因进行基因功能富集,发现其主要作用方向是:血管内皮生长因子信号通路、细胞外基质、细胞增殖调节等.结论 miR-126下降的冠脉支架患者在术后随访期间发生ISR的危险度增加,miR-126是冠脉支架患者发生ISR的预测因素.miR-126的生物功能主要集中于血管内皮生长因子信号通路方向,这可能是其参与ISR过程的一个途径.
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HBV/HCV相关miRNAs研究进展
microRNAs（miRNAs）是一类由约22个核苷酸组成的非编码单链RNAs，通过抑制蛋白质翻译或降解mRNAs调节基因的表达。目前发现有2000多种人源miRNAs，参与调节发育、细胞增殖、凋亡以及压力反应过程中的基因表达等，而miRNAs基因突变或者异常表达可能会引发肿瘤等疾病。已有研究表明miRNAs在肝炎病毒（HBV、HCV等）感染以及肝癌的发生发展过程中，也发挥了重要的作用。本文主要就HBV/HCV调控宿主miRNAs，以及miRNAs如何影响病毒的复制等方面进行阐述。
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MiR-590-3p在胰腺癌干细胞中的表达
目的 应用无血清培养基分离胰腺癌干细胞，检测其miR-590-3p的表达。方法 运用无血清培养基克隆培养ASPC-1、PANC1细胞，检测其单克隆形成、分化及细胞周期、半数抑制浓度(IC50)和表面标记物CD24+、CD44+表达。实时定量PCR法检测细胞miR-590-3p的表达。结果 经无血清培养基培养,(0.94±0.53)％的ASPC-1细胞和(0.57±0.12)％的PANC1细胞能存活，呈克隆球样悬浮生长，并可以在体外连续传代。加入血清后细胞球又重新贴壁生长。ASPC-1细胞球G0/G1期比例和CD24+、C44+、CD24+ CD44+的细胞比例及IC50分别为(75.3±5.4)％、0.96％～2.01％、27.52％～34.47％、0.35％ ～0.44％和(224.37±5.71) μg/ml，均显著高于亲本细胞的(43.7±3.8)％、0.38％～0.42％、17.65％ ～ 18.25％、0.05％～ 0.08％、(11.43±2.10) μg/ml(P值均＜0.05)。PANC1细胞球G0/G1期比例和CD24+、CD44+、CD24 +CD44+的细胞比例及IC50分别为(80.1±4.7)％、5.31％ ～9.84％、72.05％ ～93.06％、4.91％ ～5.21％、(296.58±4.27) μg/ml，均显著高于亲本细胞的(46.1±5.3)％、4.09％～4.97％、47.71％～55.66％、1.48％ ～2.63％、(26.17±3.81) μg/ml(P值均＜0.05)。ASPC-1、PANC1细胞球miR-590-3p表达分别是亲本细胞的4.67和4.52倍。结论 应用无血清培养基可以从ASPC-1、PANC1细胞系中分离出具有干细胞特性的胰腺癌细胞球，其miR-590-3p表达上调，该基因可能是胰腺癌干细胞特性维持的关键基因。
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MicroRNA-200b在吉西他滨诱导的胰腺癌细胞株MiaPaCa-2上皮间质转化中的作用
目的 探讨MicroRNA-200b (miR-200b)在吉西他滨诱导的胰腺癌MiaPaCa-2细胞上皮间质转化(EMT)过程中的作用.方法 应用不同浓度的吉西他滨诱导MiaPaCa-2细胞,选择50％细胞生长抑制时的药物浓度(IC50),获取耐药MiaPaCa-2细胞.采用脂质体法将miR-200b和无意义小分子片段(阴性对照)分别转染MiaPaCa-2细胞,再用IC50的吉西他滨诱导细胞,获取转染miR-200b的耐药MiaPaCa-2细胞及阴性对照的耐药MiaPaCa-2细胞.倒置显微镜下观察细胞形态变化；Transwell小室测定细胞侵袭能力；实时定量PCR检测细胞miR-200b表达；蛋白质印迹法检测细胞E-cadherin、Vimentin、Zeb1、Zeb2蛋白表达.结果 吉西他滨处理后细胞体积逐渐缩小,呈纺锤样,细胞间连接减少,伪足增多,呈现间质细胞特征.耐药MiaPaCa-2细胞的穿膜数从亲本细胞的(26±3)个上升至(85±6)个,Vimentin、Zeb1、Zeb2表达分别上升至亲本细胞的(1.87±0.17)、(2.57±0.21)、(5.24±0.83)倍,miR-200b表达下降至亲本细胞的(0.36±0.01)倍,E-cadherin表达下降至亲本细胞的(0.47±0.05)倍.而转染miR-200b的耐药MiaPaCa-2细胞的穿膜数下降至(42±4)个,Zeb1、Zeb2表达下降至阴性对照的耐药MiaPaCa-2细胞的(0.36±0.07)、(0.08±0.01)倍.结论 吉西他滨诱导胰腺癌MiaPaCa-2细胞过程中细胞出现EMT,其机制可能与miR-200b表达下调有关.
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胰腺导管腺癌microRNA表达谱的研究
目的 应用microRNA( miRNA)高通量生物芯片筛选胰腺导管腺癌及癌旁组织差异表达的miRNA,分析其相关的靶基因.方法 收集9例新鲜的胰腺导管腺癌和3例癌旁组织,运用标记713个miRNA的Agilent miRNA生物芯片筛选胰腺导管腺癌差异表达的miRNA,应用荧光实时定量PCR方法验证表达上调的miRNA.采用TargetScan 5.1和miRandaV5分析软件分析差异表达miRNAs的靶基因.结果 miRNA芯片筛选出11个胰腺导管腺癌相关的差异表达的miRNA,其中miR-194*、miR-192*、miR-602、miR-194表达上调,miR-139-3p、miR-513a-5p、miR-630、miR-30c-1*、miR-887、miR-508-5p、miR-516a-5p表达下调.miR-192、miR-194及其同源体的表达在31例胰腺癌组织中得到验证.经软件分析,miR.192靶基因有ZEB2、CXCL-2、EEF1A1、ERCC3,miR-192*靶基因有DCC、SMAD4、FAS,miR-194靶基因有DACH1、IGSF11、PTPN2、RBBP4,miR-194*靶基因有CD40LG、CIDEB、FHL1.结论胰腺导管腺癌存在11个表达差异的miRNA,这些miRNA可能与胰腺导管腺癌的发生、发展有关.
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MicroRNA-429对TGF-β1诱导的大鼠胰腺星状细胞活化和上皮-间质转化的调控作用
目的 探讨miR-429对大鼠胰腺星状细胞(PSCs)活化和上皮-间质转化(EMT)的调控作用.方法 用组织块法提取、培养和分离PSCs,通过免疫荧光染色法检测结蛋白(desmin)、神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达鉴定PSCs.取新鲜分离的第2代PSCs,采用脂质体法将miR-429的模拟物(miR-429 mimic)和无意义小分子阴性对照片段(miR-NC)分别转染大鼠PSCs,再用10 μg/L TGF-β1刺激PSCs.采用蛋白质印迹法检测细胞a-SMA、波形蛋白(vimemin)、E-钙黏蛋白(E-cad)及EMT相关蛋白TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3的表达量;实时荧光定量PCR法检测a-SMA、vimentin、E-cad mRNA和miR-429的表达量.结果 培养后PSCs细胞体积变大,伪足发达,细胞间连接减少,脂滴消失,GFAP、desmin表达阳性,α-SMA表达阴性,符合星状细胞的生物学特征.TGF-β1刺激后,大鼠PSCs α-SMA、vimentin、E-cad蛋白的表达量分别为对照组的(1.369 ±0.878)、(1.518±0.041)、(0.549±0.076)倍,差异均有统计学意义(P值均＜0.05).转染miR-429 mimic且经TGF-β1刺激后,PSCs的α-SMA、vimentin、E-cad mRNA表达量是转染miR-NC组的(0.423±0.038)、(0.652±0.043)、(2.235±0.045)倍,蛋白表达量是(0.683±0.053)、(0.548±0.049)、(1.548±0.038)倍,差异均有统计学意义(P＜0.05或＜0.01);TGF-β/Smad通路的TGF-β1、p-Smad2/3的相对表达量是miR-NC组的(0.459±0.038)、(0.525±0.029)倍,差异均有统计学意义(P ＜0.05或＜0.01).结论 上调miR-429的表达可减弱TGF-β1对大鼠PSCs活化的影响及逆转EMT,其可能的机制是抑制TGF-β1介导的TGF-β/Smad信号转导通路.
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胰腺癌细胞株PANC1异常甲基化miRNA的分析
目的 分析胰腺癌细胞株PANC1与正常胰腺组织表达有差异的启动子区甲基化miRNA,寻找与胰腺癌相关的高甲基化miRNA.方法 抽提PANC1与正常胰腺组织基因组DNA,超声断裂.应用抗5-甲基化嘧啶核苷抗体和免疫磁珠法获取甲基化DNA片段.通过DNA甲基化芯片筛选出PANC1与正常胰腺组织表达差异的高甲基化miRNA,采用重亚硫酸盐修饰的PCR (BSP)和TA克隆测序的方法进行验证.提取胰腺癌细胞株BxPC3、CFPAC1、PANC1、SW1990基因组DNA,采用结合重亚硫酸盐的限制性内切酶法(combined bisulfite restriction analysis,COBRA)验证芯片筛选出的差异表达的甲基化miRNA.结果 PANC1细胞与正常胰腺组织存在8个差异表达的甲基化miRNA,从中挑选出5个进行BSP+ TA克隆测序验证,其中miR-615、miR-663、miR-663b在PANC1细胞的甲基化率明显高于正常组织(60.6％比7.6％,88.8％比22.2％,94.4％比13.0％)；miR-675的甲基化率与正常胰腺组织无明显差异(76.0％比100％)；miR1826因测序结果误差较大而舍去.经COBRA验证,PANC1的上述4种miRNA均高甲基化；BxPC除miR-675外,其他3种均高甲基化；CFPAC1的miR-663、miR-663b高甲基化；SW1990的miR-615、miR-663高甲基化.结论 胰腺癌细胞株与正常胰腺组织间存在差异表达的高甲基化miRNA,其中miR-663高甲基化与胰腺癌可能相关.
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低氧培养对胰腺癌 CFPAC-1细胞 miR-301 a表达的影响
目的：观察低氧培养胰腺癌CFPAC-1细胞后miR-301 a表达的变化，探讨miR-301 a的可能作用机制。方法在1％O2环境中培养胰腺癌细胞CFPAC-1，相差显微镜下观察细胞形态变化。蛋白质印迹法检测细胞低氧诱导因子HIF-1α、miR-301a及其靶基因FOXF2，上皮型标志物E-cadherin、ZO-1、β-catenin，上皮间质转化（EMT）标志物Vimentin、N-cadherin、Fibronectin的表达。构建miR-301a慢病毒表达载体，建立稳定转染miR-301a的细胞株，以转染与miR-301a不匹配（ miR-301a-NC）的细胞作为对照组，观察细胞形态变化，检测FOXF2、上皮型及EMT标志物表达，划痕实验和Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力。结果 CFPAC-1细胞在低氧环境培养后细胞外形不规则、多呈棱形、伪足较多，细胞间连接松散，向间质细胞形态改变。以常氧培养细胞的表达量为1，低氧培养4 d后细胞miR-301a表达量为2．82±0．01，HIF-1α为2．17±0．36，Vimentin、N-cadherin、Fibronectin分别为5．48±0．16、1．16±0．03、1．30±0．03，均显著上调；FOXF2、E-cadherin、ZO-1、β-catenin 分别为0．45±0．05、0．61±0．05、0．45±0．02、0．37±0．02，均显著下调，差异均有统计学意义（P值均＜0．01）。以转染miR-301a-NC细胞的蛋白表达量为1，转染miR-301a细胞的miR-301a、Fibronectin、Vimentin、N-cadherin 表达量分别为7．09±0．42、15．6±0．10、1．24±0．05、1．37±0．01，表达均显著上调；FOXF2、ZO-1、E-cadherin、β-catenin表达量分别为0．33±0．03、0．71±0．02、0．67±0．06、0．47±0．03，表达均显著下调，差异均有统计学意义（P值均＜0．01）。转染miR-301a-NC组、稳转miR-301a组CFPAC-1细胞18 h的覆盖划痕区面积分别为（54．68±43．1）％、（94．82±2．18）％；24 h的穿膜细胞数分别为（25±6）、（95±11）／100倍视野，稳转miR-301a组显著高于转染miR-301a-NC组，差异均有统计学意义（ P ＜0．05或＜0．01）。结论低氧培养后CFPAC-1细胞出现EMT改变，miR-301a表达上调。其机制可能是miR-301a通过抑制FOXF2表达从而促使胰腺癌细胞EMT。
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微小RNA-132对胰腺癌SW1990细胞增殖及凋亡的影响
目的 观察微小RNA-132(miR-132)转染人胰腺癌细胞株SW1990后对细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法 采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测28例胰腺癌及匹配的癌旁正常胰腺组织miR-132的表达.采用脂质体将miR-132转染SW1990细胞,以未转染及转染错义miR-132的细胞分别作为空白对照和阴性对照.应用CCK-8法、DAPI染色法检测细胞的增殖及凋亡;将转染细胞种植于裸鼠皮下成瘤,应用TUNEL法检测种植瘤细胞凋亡;免疫组化法检测转染细胞的mucin-4、HER-2、p-FAK蛋白表达及种植瘤组织mucin-4、Ki-67蛋白表达.结果 28例胰腺癌及癌旁正常胰腺组织miR-132的相对表达量分别为0.46±0.11和1.24±0.36,差异有统计学意义(P＜0.05).转染细胞的miR-132表达量为2.95 ±0.46,显著高于阴性对照组的0.84±0.17(P ＜0.05);转染组细胞培养48、72、96 h时的存活率分别为阴性对照组56.5％、44.7％、37.4％(P值均＜0.05);细胞凋亡率为41.6％,显著高于阴性对照组的5.7％(P＜0.05);转染细胞mucin-4、HER-2、p-FAK蛋白的表达较阴性对照组显著下调(0.76 ±0.14比2.94±0.42,0.34±0.04比1.75±0.33,0.27±0.03比2.74±0.24,P值均＜0.01).与阴性对照组比较,转染组裸鼠皮下移植瘤生长明显被抑制[(0.23±0.05)g比(0.59±0.13)g,P＜0.05],瘤内肿瘤细胞凋亡明显增加[(21.7±4.7)％比(5.2±0.7)％,P＜0.05],mucin-4和Ki-67蛋白表达显著下调(64.35±7.16比281.34±36.62,30.75±4.61比148.05±21.34,P值均＜0.01).而阴性对照组与空白对照组间的差异均无统计学意义.结论 转染miR-132对胰腺癌SW1990细胞有显著的增殖抑制和凋亡诱导作用,其机制可能与下调mucin-4、HER-2、p-FAK等蛋白的表达有关.
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胰腺癌循环微小核糖核酸载体的研究
目的 寻找胰腺癌循环微小核糖核酸(miRNA)的载体.方法 常规培养、传代胰腺癌细胞SW1990、BxPC3,采集6例胰腺癌患者及6例健康体检者(对照组)的血清.应用梯度离心方法获取血清和细胞培养上清中的微囊泡(MV).采用蛋白质印迹法检测RNA诱导沉默复合体的核心元件Ago2蛋白和MV的标志性蛋白CD63,采用荧光定量PCR方法检测MV包裹的和游离的miRNA.结果 胰腺癌细胞株培养上清的MV中含有Ago2、CD63蛋白.胰腺癌组、对照组的血清及MV中均存在miR-20a、miR-21、miR-24、miR-25、miR-191、miR-483-5p,但以MV包裹的量较多,且胰腺癌组MV包裹的miRNA量与对照组不完全一致,其中miR-20a、miR-24、miR-191分别为对照组的(2.93±0.29)、(2.73±0.46)、(2.39±0.51)倍,差异均有统计学意义(F值分别为75.97、25.80、12.94,P＜0.05或＜0.01).结论 MV是胰腺癌循环miRNA的主要载体.
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DNA甲基转移酶3b和microRNA-29b在胰腺癌细胞株中的表达及其相关性
目的 明确胰腺癌细胞株甲基转移酶( DNMT)3b和microRNA-29b(miR-29b)的表达,分析两者的相关性.方法 应用实时定量PCR法检测人胰腺癌细胞株PANC1、BxPC3、CFPAC、AsPC-1、Capan-2的DNMT3b mRNA和miR-29b表达.采用Pearson直线相关分析法分析两者表达量的相关性.结果 PANC1、BxPC3、CFPAC、AsPC-1、Capan-2的DNMT3b mRNA相对表达量分别为0.497±0.184、0.420±0.168、0.439±0.217、0.122 ±0.111和0.731±0.387；miR-29b的相对表达量分别为0.745±0.596、0.464±0.430、0.797±1.000、1.836±1.623和0.216 ±0.335,DNMT3b mRNA的表达量和miR-29b的表达量呈负相关关系(r=-0.922,P=0.026).结论 DNMT3b和miR-29b均参与了胰腺癌的发生发展,两者呈负相关关系.
关键词： 胰腺肿瘤 细胞系 肿瘤 DNA甲基转移酶3b 微RNAs
