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MicroRNA为抗癌治疗提供了新希望
microRNAs是一类单链、小分子非编码RNAs，通过调控基因表达，对于生命活动的各个过程起着重要的调控作用。通过作用于相关的mRNA分子，microRNAs调控肿瘤的发生和发展。microRNAs对于基因表达表达的发挥重要的调控作用，到底对肿瘤的发生具有促进作用还是抑制作用一直存在争议。到目前为止，作为肿瘤标记物和治疗的靶向分子还存在很大的限制性。文中涉及microRNAs的正负功能态调节作用，从理论上阐明其在肿瘤转移中的作用，并对microRNA的临床应用及抗癌前景提出了展望。
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MicroRNA与妇科肿瘤
小分子 RNA（microRNA）的发现是分子生物学史上的又一个里程碑。microRNA是一组单链非编码的RNA，由19～25个核苷酸（平均22个核苷酸）组成。研究证实microRNA在生理及病理状态下调节转录后的基因表达。其调节功能与细胞周期的调节，细胞增殖分化，炎症反应及凋亡相关。在许多病理状态下观察到 microRNA表达谱的改变，如糖尿病，类风湿性关节炎以及一些癌症。本综述对microRNA与妇科肿瘤的相关文献进行复习，总结microRNA在妇科肿瘤的发病机制中的可能作用，讨论microRNA作为妇科肿瘤早期诊断和治疗监控的肿瘤标记物的可能性，并对microRNAs在妇科肿瘤中作为治疗靶点和预后判断因素的可能性进行讨论。
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miRNA在糖尿病及其并发症中的作用研究进展
miRNAs是在真核生物中发现的，长度大小约为20～25个核苷酸，具有调控功能的非编码的小RNA。成熟的miRNA通过碱基互补诱导了靶基因的沉默。近年来miRNAs在糖尿病中的研究，为探索糖尿病及其并发症发病机制以及早期的诊断提供了新的线索，同时也为糖尿病及其并发症的基因靶向治疗奠定了基础。本文就miRNA在糖尿病及其并发症中的作用进行综述。
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微小RNA在心血管疾病中的研究进展
微小RNA（miRNA）是一类高度保守的内源性非编码的单链小RNA，长度约18～25个核苷酸。它通过特异性地识别靶基因mRNA的3'非转录区，介导靶基因mRNA的降解或翻译抑制，从而下调靶基因的表达，并参与细胞增殖、分化、凋亡和疾病发生发展等多种生物学过程。近期研究表明，人类约有30%～50%的基因受miRNA调控。miRNA具有严格的组织特异性和时序性，在心血管系统发育及疾病中发挥重要的调节作用。miRNA参与心脏和血管的发育，其异常表达与动脉粥样硬化、冠心病、心力衰竭及高血压等疾病密切相关。miRNA在各种心血管疾病中有特定的表达谱，预示着 miRNA 有望成为心血管疾病诊断、治疗及预后判断的新型生物学标志物。本综述将对miRNA的生物合成和作用机制以及miRNA在心血管系统发育及疾病病理过程中的新研究进展进行总结，并探讨其相关的分子调控机制。
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MicroRNAs在高血压终末靶器官损害中的研究进展
MicroRNAs（miRs）是一类广泛存在于真核生物长度为21～25 nt的非蛋白质编码单链RNA，通过与靶基因miR分子的3'端非编码区域（3' UTR）互补配对后降低miRs分子稳定性和翻译抑制两种方式参与靶基因表达调控。功能研究发现 miRs 参与多种病理生理过程。新近研究也表明，miRs 在高血压靶器官损害中发挥重要的作用，而维持和恢复损害靶器官中相应miR的稳定表达可能成为高血压疾病治疗的一个新靶点。深入研究miRs可能为高血压靶器官损害早期诊断和治疗带来全新方法。
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MicroRNA靶位点单核苷酸多态性在肿瘤中的研究进展
miRNA（microRNA）是一类长度约19～23个核苷酸的内源性非编码小分子RNA。通过与靶mRNA 3'端非编码区的碱基配对，引起靶mRNA降解或翻译抑制来调控基因表达。研究表明miRNA靶基因位点单核苷酸多态性可能会通过影响miRNA与靶基因mRNA配对的有效性及结合数量，使其丧失原有的调控功能，改变相关基因表达，进而影响肿瘤的易感性、进展及预后。
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微小 RNA-122和29在乙型肝炎病毒感染相关肝病中的表达及临床意义
目的探讨微小RNA（ miR）-122和29在乙型肝炎病毒感染相关肝病中的表达水平及其临床意义。方法应用实时荧光定量PCR方法检测肝细胞癌（ HCC ）患者（20例）、肝炎肝硬化（ LC ）患者（20例）、慢性乙型肝炎（CHB）患者（15例）、乙型肝炎病毒携带者（ASC）（20例）以及正常对照（NC）（20例）血清中miRNA-122和29的表达水平，结合临床指标进行分析。结果与NC、LC和ASC组比较，HCC和CHB组患者血清中miR-122的表达水平明显升高；与NC比较，LC组患者血清中miR-29的表达水平明显下降，差异均具有统计学意义（ P＜0.01）。相关分析显示，CHB患者血清中miR-29表达与HBV DNA呈正相关；HCC患者血清中miR-29与AFP呈负相关。结论 miR-122的表达升高与CHB的肝损伤及HCC发生有关；miR-29的表达下降与肝纤维化有关，检测其变化有助于评价乙型肝炎病毒感染者肝脏的炎症损伤和纤维化。
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MicroRNA-1和 PIK3CA 在非小细胞肺癌中的表达及临床意义
目的本研究旨在探讨miR-1和PIK3CA在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及其临床意义。方法利用RT-qPCR法检测55例NSCLC组织及其癌旁正常组织中miR-1和PIK3CA 的表达，并用Western-blot法检测NSCLC组织及其正常组织中PI3K蛋白的表达变化。结果 miR-1在NSCLC原发灶中的表达明显低于在癌旁和正常组织中的表达（P＝0.0122），PIK3CA在NSCLC原发灶和癌旁组织中的表达都明显高于在正常组织中的表达（P＝0.0446，P＜0.0001），且PIK3CA在原发灶中的表达明显高于在癌旁组织中的表达（P＝0.0029）；miR-1和PIK3CA在术后1年内发生/不发生转移癌组织中的表达差异具有统计学意义（P＝0.0369，P＝0.0061）；PIK3CA的表达与NSCLC组织学类型相关（P＝0.0200），但miR-1和PIK3CA的表达与患者的年龄、性别、肿瘤的大小及分化程度无明显相关关系（P＞0.05），miR-1的表达与PIK3CA的表达成负相关（r＝-0.7096，P＜0.05）。结论 miR-1的低表达和PIK3CA的高表达可能和NSCLC的发生及侵袭转移有关，且miR-1和PIK3CA在NSCLC转移过程中相互抑制，可能成为NSCLC治疗的新的潜在靶点。
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miR-216b在肾癌中表达及临床意义研究
目的本研究旨在检测miR-216 b在肾癌组织及癌旁正常组织中的表达情况，并分析其表达与临床病理特征之间的关系，为研究miR-216b在肾癌的发生发展中作用奠定基础。方法提取50例经手术切除的配对肾癌及癌旁组织标本中总RNA，经逆转录获得cDNA，采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）方法检测标本中miR-216b表达量，并通过统计学软件分析其表达量与患者临床病理特征之间的关系。结果肾癌组织中miR-216b表达量明显低于配对的癌旁组织（P＜0.001），其中46例（92％）肾癌标本miR-216b表达下调。肾癌中miR-216b表达量与患者年龄、性别、肾癌组织类型、TNM分期、AJCC临床分期无相关性（ P＞0.05）。结论 miR-216 b在肾癌组织中明显低表达，提示其可能与肾癌的发生和发展相关。
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microRNA 与冠状动脉粥样硬化性心脏病的相关性研究
目的：探讨miR-126，miR-130a，miR-222在冠心病患者外周血浆中的表达水平及其临床意义。方法选择冠心病患者79例（45例轻度组、34例重度组），冠状动脉阴性对照组24例，收集两组样本临床资料；运用Real-time PCR法检测样本血浆miR-126、miR-130a、miR-222表达水平；分析其表达差异及与脂蛋白a相关性，评估血浆miR-126、miR-130a、miR-222在冠心病中的表达水平及其临床意义。结果（1）与对照组相比，冠心病组患者血浆miR-126和miR-222的表达水平降低和升高，分别是对照组的0.08倍和4.23倍，差异有统计学意义（P＜0.05）；miR-130a 表达水平降低，是对照组的0.32倍，但差异无统计学意义（P＞0.05）。（2）以改良Gensini评分对冠心病患者进行亚组分析，冠心病轻度组与重度组miR-126的表达水平分别为对照组的0.15倍及0.004倍，miR-222的表达水平分别为对照组的2.77倍及7.38倍，差异均有统计学意义（P＜0.05），并且miR-126、miR-222表达水平变化与改良Gensini评分相关。（3）冠心病组中患者 Lpa 与 miR-126、miR-130a、miR-222表达水平均无相关性。结论冠心病患者外周血浆中miR-126、miR-222表达水平较冠状动脉阴性对照组有显著差异，且表达水平变化与冠状动脉狭窄程度密切相关。
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血浆miRNA表达谱与宫颈癌相关性的预试验研究
目的：探讨血浆 miRNA的表达水平在宫颈癌患者中的表达差异性及在不同临床分期中的表达差异性；评价血浆 miRNA 在宫颈癌诊断中的指导意义。方法收集2013年1～6月在南京大学医学院附属南京鼓楼医院妇科门诊就诊，经宫颈活检病理确诊为宫颈浸润癌的患者12例，作为试验组。同时选取12例社区相同年龄段体检人员作为对照组。对两组血浆中的miRNA进行提取，对其行实时荧光定量 PCR法检测，对终结果进行统计学分析。结果 miR-21、miR-34a、miR-200a 和 miR-214的表达经统计学分析在宫颈癌组和对照组中有显著的差别，P 值分别为0.037、0.02、0.034和0.044。且其中miR-21、miR-200a、miR-214能在宫颈癌临床分期中的表达呈现差异性。其中绘制成受试者工作特征曲线（ROC），其下的面积（AUC）在0.7～0.9，分别为0.767、0.826、0.874和0.727，说明该四个血浆miRNA标记物有一定准确性。结论血浆miR-21、miR-34a、miR-200a在宫颈癌患者中呈高表达，而miR-214则呈现低表达。血浆中miR-21、miR-200a在宫颈癌晚期（Ⅱb及以上）中表达比宫颈癌早期（Ⅰa～Ⅱa）表达要高，miR-214在宫颈癌晚期（Ⅱb及以上）中表达比宫颈癌早期（Ⅰa～Ⅱa）表达要低。筛选出的miRNA对宫颈癌的诊断具有一定准确性。
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甲状腺腺瘤患者miR-146b的表达及与BRAF突变的相关性研究
目的：检测miRNA-146在甲状腺癌（ TC）组织中的表达水平，并分析其与BRAF基因突变及临床病理特征的关系。方法采用免疫组化法，对40例甲状腺癌组织、40例正常组织中miRNA-146表达水平进行检测，并根据染色程度和阳性细胞数进行综合评分；采用聚合酶链式反应（ PCR）对甲状腺癌中BRAF突变进行检测，同时分析miRNA-146表达水平与BRAF突变之间的相关性。对TC患者作1～2年的随访，以观察其生存期。结果40例TC患者中，13例患者miRNA-146呈阳性（32.5％），27例患者呈阴性（67.5％）；30例正常受试者miRNA-146呈阳性（90.0％），10例患者呈阴性（10.0％）；两组比较，差异具有统计学意义（χ2＝136.708，P＝0.000）；TC患者miRNA-146的阳性表达与TC患者的临床分期、肿瘤直径及是否发生肿瘤包膜侵犯、淋巴结转移、BRAF突变等因素密切相关（ P＜0.05）；miRNA-146阴性与阳性患者中，总体生存期未发现显著差异（ P＝0.425）。结论 miRNA-146在TC组织中呈低表达，与BRAF突变、TC的发生发展及侵袭转移关系密切。
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不同临床分期卵巢浆液性癌的miRNA表达谱分析及其与临床预后的关系
目的：筛选在卵巢癌演进过程中起重要作用的 microRNA（miRNA），检测关键 miRNA 与临床病理及预后的联系，找出与卵巢浆液性癌预后相关的 miRNA。方法 miRNA 芯片技术分别检测6例Ⅰ期浆液性癌，4例Ⅲ期浆液性癌的 miRNA 表达谱差异。统计分析，从中挑选4个 miRNA，miR-510、miR-509-5p、miR-508-3p、miR-483-5p，采用实时定量PCR方法检测其在16例Ⅰ期浆液性癌、35例Ⅲ期浆液性癌中的表达，对比分析。收集验证组患者的临床病理及预后资料。将miRNA实时定量PCR结果分为高表达组和低表达组，分别统计各miRNA的表达与临床病理参数及预后的关系。结果 miRNA芯片技术分析了768个miRNA在Ⅰ期和Ⅲ期的表达谱，其中26个miRNA在两组中的表达具有显著差异（P＜0.05），差别在两倍以上。对比Ⅰ期，Ⅲ期中6个miRNA上调，20个miRNA下调。实时定量PCR结果与miRNA芯片结果一致，显示miR-510、miR-509-5p、miR-508-3p在Ⅰ期卵巢癌标本中显著高于Ⅲ期浆液性癌，miR-483在Ⅰ期中表达显著低于Ⅲ期浆液性卵巢癌。但4个miRNA的表达与其他临床病理参数无关。生存分析发现miR-510、miR-509-5p二者与预后有关，高表达组的预后显著优于低表达组。结论 miRNA参与卵巢浆液性癌的发展，miR-510及miR-509-5p可能在卵巢癌的侵袭和转移中起作用，有望成为预测卵巢癌预后的分子标记物。
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胃癌患者血清 microRNA-192和 microRNA-215的表达及临床意义
目的探讨血清miR-192、miR-215作为胃癌诊断标记物的可能性。方法收集2011年9月至2012年1月四川省人民医院29例术前胃癌患者和10名健康对照者血清并提取总RNA，反转录后采用实时荧光定量PCR的方法检测miR-192、miR-215相对表达量，收集胃癌患者的详细临床病理资料，比较miR-192、miR-215在胃癌患者与健康人之间的差异，并与临床病理特征之间的关系进行分析，构建受试者工作特征曲线（ ROC曲线），通过曲线下面积（ AUC）计算miR-192、miR-215检测及其联合应用诊断胃癌的敏感性和特异性。结果胃癌患者血清中miR-192、miR-215表达水平分别较正常对照组升高8.87倍（ P＝0.002）和4.14倍（ P＝0.037）。在不同肿瘤分期、淋巴结转移、肿瘤大小的胃癌患者之间比较，血清中miR-192、miR-215表达无统计学差异。 ROC曲线分析显示，miR-192、miR-215检测及其二者联合应用于胃癌诊断的AUC值分别为0.833（95％CI：0.793～0.993，P＜0.001）、0.724（95％ CI：0.555～0.894，P＝0.002）、0.893（95％CI：0.699～0.966，P＝0.037），敏感性分别为75.9％、62.1％、75.9％，特异性分别为90.0％、88.3％、92.1％。结论胃癌患者血清中miR-192和miR-215表达可能与胃癌的形成或发展有关。 miR-192、miR-215检测及其联合应用，对胃癌的诊断有较高的敏感性和特异性，提示这两种血清miRNA有望作为胃癌的诊断标记物。
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骨折延迟愈合相关miRNAs检测
目的 检测骨折延迟愈合患者血浆中差异表达的miRNAs,研究参与骨折愈合过程中的miRNAs.方法 2014年10月至2016年6月在深圳市第二人民医院骨科入院治疗的骨折患者.骨折患者按照骨折愈合情况分为延迟愈合组和正常愈合组,用Agilent miRNA芯片检测延迟愈合和正常愈合患者血浆miRNAs差异表达谱,在34例骨折延迟愈合患者和32例骨折正常愈合患者血浆中用Real-time RT-PCR对芯片检测差异表达的miRNAs进行验证,组间数据差异比较用t检验.结果 与骨折正常愈合相比,有28个miRNAs在骨折延迟愈合患者中异常表达(差异2倍以上),其中13个基因表达水平增高,15个基因表达水平下降.Real-time RT-PCR验证结果显示,hsa-miR-145-3p在延迟愈合组比正常愈合组表达水平增高8.46倍(P=0.001).结论 hsa-miR-145-3p可能参与了骨折延迟愈合的发生过程.有可能成为骨折延迟愈合的分子标记和治疗靶基因.
关键词： 骨折愈合 骨折延迟愈合 微RNAs hsa-miR-145-3p -
miR-148a 抑制胃癌MGC803细胞的生长研究
目的 观察miR-148a 对胃癌MGC803 细胞生长和细胞周期的影响.方法 实时定量PCR 检测miR-148a 在胃癌细胞中的表达.MGC803 细胞转染miR-148a 后,MTT 分析、生长曲线、集落生成实验观察BGC823 细胞的生长情况,同时进行细胞周期测定.结果 miR-148a 在胃癌MGC803 细胞中低表达.MGC803 细胞在转染miR-148a 后,生长明显受到抑制,细胞周期在G1 期发生阻滞,转染miR-148 组G1 期比率(71.52% ±3.43%)较对照组(47.46% ±3.12%)明显升高,P ＜0.01.结论 miR-148a 能够影响细胞周期,从而抑制胃癌MGC803 细胞的生长.
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外周血miR-183作为非小细胞肺癌转移标志物的研究
目的 探索外周血miR-183作为非小细胞肺癌(NSCLC)转移标志物的可能性.方法 用茎环RTI-PCR法检测正常组、Ⅰ/Ⅱ期NSCLC组及Ⅳ期NSCLc组的外周血miR-183水平,对所得数据用F检验和q检验进行统计分析.结果 三组外周血中均能检测出miR-183表达,其中正常组与Ⅳ期NSCLC组.Ⅰ/Ⅱ期NSCLC组与Ⅳ期NSCLC组的外周血miR-183水平有统计学差异(q=4.82,P<0.05;q=5.63,P<0.05);而正常组与Ⅰ/Ⅱ期NSCLC组相比则没有统计学差异(q=1.98,P>0.05).结论 miR-183可能成为NSCLC转移的新的标志物.
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miR-210在胃癌组织中的表达及临床意义
目的 探讨miR-210 在胃癌患者组织中的表达及其临床意义.方法 采用实时定量PCR 检测miR-210 在60 例胃癌患者组织中的表达情况.并应用统计学分析其与临床病理特点的相关性.结果 胃癌组织中miR-210 的表达明显高于对应的癌旁正常组织(P ＝0.019).并且miR-210 的表达与患者的年龄、性别、病灶位置、大体类型、分化程度无关,但与肿瘤的大小(P ＝0.012)、浸润深度(P ＝0.022)、淋巴结转移个数(P ＝0.032)、淋巴结是否转移(P ＝0.030)、是否有淋巴管癌栓(P ＝0.026)、是否发生远隔转移(P ＝0.016)、TNM 分期(P ＝0.018)密切相关.结论 miR-210 可能在胃癌的发生发展中发挥重要作用,并可能成为胃癌诊断的标志物和治疗的靶点.
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反义miR-21抑制宫颈鳞状细胞癌CaSki细胞系生长体外研究
目的 探讨敲低miR-21表达对宫颈鳞状细胞癌细胞系CaSki增殖活性与凋亡的影响.方法 实时荧光定量RT-PCR法检测正常宫颈组织、CaSki细胞转染前后miR-21的表达水平,采用MTT法、流式细胞术等技术检测转染后CaSki细胞增殖活性与凋亡的变化.结果 miR-21在CaSki细胞中表达水平为正常宫颈组织的3.25倍.CaSki细胞中转染反义miR-21(AS-miR-21)可显著抑制其表达.转染后24 h、48 h、72 h、96 h,MTT检测提示10 nmol与20 nmol AS-miR-21转染组中细胞增殖率较对照组明显降低(P<0.05),自48 h抑制作用显现,且随着转染浓度增加,抑制作用增强,呈现剂量依赖性.细胞周期检测结果显示AS-miR-21转染组的G0/G1期细胞明显增多,S期细胞减少(P<0.05).Annexin Ⅴ联合PI技术检测细胞凋亡,结果显示AS-miR-21转染组早期凋亡细胞率[(23.40±2.16)%]明显高于空白对照组[(5.1±2.16)%]、阴性对照组[(6.87±0.55)%](P＝0.000).结论 AS-miR-21转染可敲低CaSki细胞中miR-21表达,并有效抑制细胞增殖活性,促进细胞凋亡.
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反义miR-21对荷人宫颈鳞癌裸鼠移植瘤生长和凋亡的影响
目的 构建荷人宫颈鳞癌裸鼠移植瘤模型,探讨干扰miR-21 表达对移植瘤生长、凋亡的影 响.方法 将人工合成的反义寡核苷酸ASODN(AS-miR-21)转染SiHa 细胞(抑制组),同时设阴性对照组和 空白对照组,对数生长期的SiHa 细胞分别接种于裸鼠皮下,绘制肿瘤生长曲线并计算肿瘤生长率.当肿瘤 体积达0.2 cm3 时采用AS-miR-21 多点瘤周注射,观察其对移植瘤的影响.应用免疫组化技术、荧光TUNEL 检测移植瘤细胞增殖活性和凋亡情况.结果 (1)成功构建人宫颈鳞癌裸鼠皮下移植瘤模型,抑制组、阴性 对照组及空白对照组成瘤率分别为37.5%、75.0%、100.0%,瘤体平均体积为(732.80 ±56.32 ) mm3 、(1228.46 ±78.53)mm3 、(1301.26 ±80.63)mm3,平均生长率为18.32%、30.71%和32.53%,瘤重为(0.73 ± 0.05)g、(1.26 ±0.12)g 和(1.35 ±0.25)g,抑制组与阴性、空白对照组比较差异均有统计学意义(P <0.05); (2)免疫组化显示抑制组裸鼠瘤体Ki67 表达显著下降;荧光TUNEL 凋亡检测显示抑制组裸鼠肿瘤细胞凋亡 率明显增多;(3)注射治疗剂量AS-miR-21 两周后观察肿瘤组织局部坏死严重,胞核裂解、消失,凋亡明显增 加.结论 AS-miR-21 可下调裸鼠人宫颈鳞癌移植瘤中miR-21 的表达,抑制移植瘤生长和促进其凋亡.
