长链非编码RNA H19对人乳腺癌细胞BT-474赫赛汀抵抗影响机制探讨
摘要： 目的 约20％人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor-2,HER2)阳性乳腺癌患者可针对性的采用其靶向药物赫赛汀(trastuzumab,TZB)治疗,但耐药性的产生严重影响了TZB的疗效,本研究探讨长链非编码RNA H19(H19)对人乳腺癌细胞BT-474 TZB抵抗的影响及可能的相关机制.方法收集德州市第二人民医院2016-04-01-2017-03-31收治的乳腺癌患者肿瘤组织及相应癌旁组织(距癌组织>5 cm)各37例,荧光定量PCR(qPCR)技术检测组织H19及mRNA表达水平,并分析肿瘤组织H19及HER2表达的相关性.间歇浓度梯度诱导法构建BT-474 TZB抵抗细胞系(BT-474 TR),并利用慢病毒转染介导的H19小干扰RNA(siRNA)载体在BT-474 TR细胞中构建稳定干扰H19表达的细胞系及相应的空白对照细胞系(BT-474 TR-siH19及BT-474 TR-对照组),CCK-8法检测各组细胞TZB半抑制浓度(IC50)值,qPCR检测细胞H19及HER2 mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测细胞HER2及上皮间充质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)相关分子蛋白表达水平.结果乳腺癌组织中H19表达量为0.192±0.014,显著高于癌旁组织0.082±0.009,t=40.202,P<0.001;乳腺癌组织中HER2表达量为0.156±0.013,显著高于癌旁组织0.058±0.009,P<0.001,且H19与HER2的表达存呈正相关,r=0.483,P<0.05.BT-474 TR细胞、BT-474亲本细胞、BT-474 TR-siH19细胞和TZB BT-474 TR-对照细胞4组的TZB IC50测定值分别为(142.3±23.5)、(152.9±25.2)、(27.7±3.6)和(73.2±12.9)μg/mL,差异有统计学意义,F=18.15,P=0.0006;BT-474 TR与BT-474、BT-474 TR-siH19与BT-474 TR-对照组间差异有统计学意义,均P<0.05.BT-474 TR细胞H19表达水平为0.239±0.031,显著高于BT-474亲本细胞表达水平0.106±0.009,t=7.136,P<0.001;BT-474 TR细胞HER2 mRNA表达水平为0.127±0.031,显著低于BT-474亲本细胞表达水平0.309±0.035,t=6.742,P<0.001.BT-474 TR-siH19细胞H19表达水平为0.073±0.007,显著低于BT-474 TR-对照组细胞0.226±0.025,t=10.207,P<0.001;BT-474 TR-siH19细胞HER2 mRNA表达水平为0.104±0.017,也显著低于BT-474 TR-对照组细胞0.162±0.028,t=3.069,P<0.05.BT-474 TR细胞HER2蛋白表达水平为0.263±0.037,显著低于BT-474细胞0.681±0.059,t=10.395,P<0.001;BT-474 TR细胞E-cadherin蛋白表达水平为0.162±0.025,显著低于BT-474细胞0.633±0.074,t=10.447,P<0.001;BT-474 TR细胞Snail蛋白表达水平为0.207±0.083,显著高于BT-474细胞0.064±0.011,t=2.958,P=0.021;BT-474 TR细胞Vimentin蛋白表达水平为0.168±0.020,显著高于BT-474细胞0.114±0.012,t=4.011,P=0.008.BT-474 TR-siH19细胞HER2蛋白表达水平为0.082±0.007,显著低于BT-474 TR-对照组细胞0.404±0.028,t=19.324,P<0.001;BT-474 TR-siH19细胞Snail蛋白表达水平为0.078±0.003,显著低于BT-474 TR-对照组细胞0.258±0.021,t=14.697,P<0.001;BT-474 TR-siH19细胞Vimentin蛋白表达水平为0.085±0.010,显著低于BT-474 TR-对照组细胞0.141±0.025,t=3.602,P=0.011;而BT-474 TR-siH19细胞E-cadherin蛋白表达水平为0.525±0.039,显著高于BT-474 TR-对照组细胞0.194±0.034,t=11.081,P<0.001.结论H19在乳腺癌组织中高表达,且与HER2表达呈正相关,体外干扰H19可下调乳腺癌细胞HER2的表达,并可通过抑制EMT进程部分逆转乳腺癌细胞的TZB抵抗.
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caspase-3表达及其与卵巢上皮性肿瘤组织细胞凋亡和增殖的关系
目的:探讨caspase-3与卵巢上皮性肿瘤发生、发展的关系.方法:利用免疫组化(SP)法和TdT介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)技术,检测112例卵巢上皮性肿瘤组织中caspase-3和PCNA的表达水平及细胞凋亡情况.结果:caspase-3在卵巢恶性肿瘤中的表达(44.4%),明显低于良性肿瘤(81.8%,P＜0.01);在低分化卵巢癌中的表达(61.5%),明显高于高分化卵巢癌(23.5%,P＜0.05);在晚期卵巢癌中的表达(57.9%),明显高于早期卵巢癌(24.0%,P＜0.05);在有淋巴结转移癌中的表达(56.4%).明显高于无淋巴结转移癌中的表达(33.3%.P＜0.05).凋亡指数与增殖指数呈正相关(r=0.467,P＜0.01),与caspase-3的表达呈正相关(r=0.597,P＜0.01).结论:caspase3与卵巢上皮性肿瘤的细胞凋亡密切相关,参与细胞凋亡的调节机制,在卵巢上皮性肿瘤恶变的过程中发挥作用,并与恶性程度关系密切,有可能成为卵巢癌预后评估的参考.
关键词： 卵巢肿瘤/病理学 脱噬作用 caspase类/代谢 -
青年期直肠癌的临床病理特点
回顾性分析本院1998-2002年收治的14例青年期直肠癌患者的临床资料.结果显示,青年期直肠癌占同期全部直肠癌的8.7%(14/156),位于腹膜返折下占85%,低分化腺癌或黏液腺癌占57%(8/14),侵犯浆膜或纤维膜占79%(11/14),浸润型占89%(12/14),有淋巴结转移者65%(9/14),侵犯邻近组织者占50%(7/14);这些特点与中老年直肠癌相比差异有显著意义.青年期直肠癌的预后差,3年生存率仅28.5%(4/14).
关键词： 结肠直肠肿瘤/病理学 年龄因素 预后 -
乳腺癌新辅助化疗随机临床研究的初步结果
目的:1)探讨NE方案作为乳腺癌新辅助化疗(术前化疗)的疗效及不良反应;2)比较NE方案作为新辅助化疗和辅助化疗(术后化疗)对乳腺癌患者不良反应的差别.方法:对原发肿块＞3 cm的可手术乳腺癌患者采用单盲及随机对照的方法进行分组研究.新辅助化疗组术前予以3个周期NE方案化疗,然后行改良根治术,术后再用NE方案化疗3个周期.辅助化疗组先行改良根治术,术后用NE方案化疗6个周期.结果:新辅助化疗组CR 5/16例(31.25%),PR 7/16例(43.75%),总有效率75%.新辅助化疗组和辅助化疗组的主要严重不良反应分别为白细胞减少(83.33%、88.24%)、血小板减少(22.22%、23.53%)、血红蛋白降低(16.67%、17.65%)、谷丙转氨酶升高和/或谷草转氨酶升高(11.11%、11.76%)、恶心呕吐(27.78%、23.53%)、腹痛和/或腹泻(5.56%、0%)及脱发(27.78%、35.29%);两组的不良反应发生率差异无显著意义,P>0.05.结论:NE作为乳腺癌的新辅助化疗方案具有良好疗效,不良反应可以耐受.
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放射治疗后诱发恶性肿瘤26例分析
回顾性分析20年放射治疗后诱发的26例恶性肿瘤患者临床资料,其中首发肿瘤包括食管癌3例、鼻咽癌13例、鼻腔癌1例、宫颈癌8例、直肠癌1例.放射源用60Co及深部X射线.采用常规的分割照射,照射剂量为DT 40～90 Gy.26例2～20年在原照射部位出现了继发恶性肿瘤,其中3例食管癌继发了纵膈肿瘤.13例鼻咽癌继发硬腭鳞癌、扁桃体癌、软腭低分化腺癌.1例鼻腔癌继发恶性坏死性肉芽肿.1例直肠癌继发前列腺癌.8例宫颈癌继发了膀胱癌、直肠癌.
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模拟定位机引导下经皮穿刺集束巨能刀射频治疗肺癌的临床应用
为了探讨局部麻醉和模拟定位机引导在集束巨能刀治疗肺癌的射频治疗的适应证、治疗效果以及并发症的预防和处理,采用0.5%普鲁卡因局部浸润麻醉,模拟定位机引导下经皮穿刺集束巨能刀治疗肺癌46例.CT显示条索状瘢痕残余11例,空洞形成或直径缩小32例,无变化1例,增大2例.治疗中患者均有不同程度的胸腔内热感及短时间内可以忍受的疼痛感.并发症包括气胸7例、皮下气肿5例、发热24例、咯血13例和慢性支气管炎急性发作4例.初步研究结果提示,集束巨能刀射频治疗周围型肺癌疗效满意,尤其适用于直径＜3 cm的肿瘤.局部麻醉配合全身止痛药物应用可以很好地解决治疗中的疼痛问题,与全麻相比还具有省时省力、费用低的优势;对于周围型肺癌,模拟定位机引导经皮穿刺定位与CT引导相比,同样准确、安全,但操作更为方便.
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肺癌组织中MDM2蛋白的表达
目的:检测肺癌组织中小鼠双微粒体(murine double minute 2,MDM2)蛋白的表达.方法:用Western blot方法对31例肺癌组织及相应癌旁组织MDM2蛋白表达情况进行测定.结果:肺癌组织中MDM2蛋白表达量(38 123.5±11153.0)高于癌旁组织(29 037.0±14 267.4),其增高表达率为77.4%(24/31),差异有统计学意义,P=0.009;肺鳞癌组织中MDM2蛋白表达增高率为77.3%(17/22),肺腺癌组织中为7/7;1例小细胞肺癌和1例大细胞肺癌组织中MDM2蛋白表达均降低.结论:MDM2在肺癌的发生过程中有一定作用.
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Transwell小室筛选高侵袭性C6细胞MMP-2和TIMP-2的表达
目的:通过观察Transwell小室筛选的高侵袭性C6细胞中组织金属蛋白酶抑制剂-2(tissue inhibitor of metalloproteinase-2, TIMP-2)的表达,探讨基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2, MMP-2)及TIMP-2在胶质瘤侵袭中的作用机制.方法:通过Transwell小室筛选出一种更具有侵袭能力的C6-C1细胞,用细胞损伤愈合实验及Transwell小室评价其侵袭转移能力,用明胶酶谱、反向明胶酶谱及Western blot等方法来检测MMP-2和TIMP-2的表达.结果:与同源C6细胞相比,这种体外筛选的C6-C1侵袭能力增加3倍多,增强了快速的单层细胞损伤愈合能力, MMP-2激活水平增加80%,TIMP-2的蛋白表达水平增长2倍.结论:MMP-2的激活水平增加与胶质瘤的侵袭转移能力相关,并与TIMP-2的表达增高相关.TIMP-2表达增加促进了MMP-2的激活和细胞侵袭.
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重组人白细胞介素-11对肺癌患者化疗后血小板的影响
目的:研究重组人白细胞介素-11(recombinant human interleukin-11,rhIL-11)对肺癌患者化疗后血小板计数和平均血小板体积的影响.方法:将58例肺癌化疗后出现血小板降低患者(＜50×109L-1)分成两组,实验组40例,每天皮下注射rhIL-113 mg,连续7 d;对照组18例,为空白对照组.每周观察rhIL-11对血小板计数的影响,连续3周.结果:实验组放疗后血小板计数和平均血小板体积分别降至(43.00±13.21)×109L-1和9.43±1.88 fL,对照组为(46.45±12.44)×109L-1和8.69±1.63fL,rhIL-11开始使用后1周,实验组平均血小板体积上升至正常(10.84±2.32fL),2周后血小板计数上升至正常水平[(110.87±53.28)×109L-1].与对照组比较,rhIL-11可明显提高肺癌化疗后患者血小板计数;rhIL-11对白细胞计数和血红蛋白浓度没有明显影响.结论:rhIL-11可促进肺癌化疗患者血小板恢复.
关键词： 白细胞介素-11 肺肿瘤/药物疗法 血小板减少/药物疗法 -
β-葡萄糖苷酶激活苦杏仁苷诱导LoVo细胞凋亡及活性对Bax与bcl-2基因表达和Caspase-3的影响
目的:观察苦杏仁苷被β-葡萄糖苷酶特异激活后对大肠癌LoVo细胞凋亡的影响.方法:分别将不同浓度的苦杏仁苷加β-葡萄糖苷酶作用于大肠癌LoVo细胞株24 h,通过细胞形态学、DNA凝胶电泳、流式细胞仪观察细胞凋亡变化,RT-PCR方法检测细胞bcl-2、Bax mR-NA表达变化,Caspase-3试剂盒检测细胞Caspase-3酶活性的变化.结果:0.1～1.0mmol/L的苦杏仁苷与250 nmol/L的β-葡萄糖苷酶作用于细胞24 h后,可见到以凋亡为主的形态变化:细胞核固缩、染色质凝集及核碎裂、染色质片段化,琼脂糖凝胶电泳见DNA断裂成有规律的特征性梯状条带,流式细胞仪分析显示在G1期细胞前出现亚二倍体峰;RT-PCR检测显示Bax mRNA表达升高,而bcl-2 mRNA表达无变化Caspase-3酶活性呈剂量依赖性增加.结论:苦杏仁苷被β-葡萄糖苷酶特异性激活后能导致LoVo细胞凋亡,这一过程中,Bax基因表达上调及Caspase-3酶活性增加与LoVo细胞凋亡有关.
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乳管内乳头状瘤的现代诊治--附89例报告
目的:研究纤维乳管内视镜诊断乳管内乳头状瘤的价值及合理的治疗模式.方法:分析我院1996年8月-2001年12月不同方法诊治的乳管内乳头状瘤89例,总结乳头状瘤的诊断、易发部位、定位方法以及治疗评价.结果:乳管内乳头状瘤表现以血性及浆液性溢液常见,占98.7%,1、2级导管多发,占88.6%.纤维乳管内视镜检查乳头状瘤有特征性图象,诊断准确率可达91.7%,可以术前定位病变.导管和区段切除治疗效果满意.结论:乳管内视镜是目前导管内乳头状瘤的佳检查手段,治疗有向微创手术发展的趋势.
