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经动脉导人脂质体联合转铁蛋白介导的p53基因治疗肝癌的实验研究

朱光宇；卢勤；滕皋军；郭金和；余辉；魏晓莹；邓钢；何仕诚；方文；李国昭

关键词：肝肿瘤基因 P53 基因表达调控肿瘤转铁蛋白脂质体放射学介入性

摘要： 目的探讨经导管动脉内联合应用转铁蛋白对脂质体介导的p53基因治疗肝癌的转染效率及治疗效果的影响.方法 25只荷瘤兔(VX2肝癌模型兔)采用随机数字表法分为5组,每组5只.取0、100、200、300、400 μg的转铁蛋白(Tf)分别与阳离子脂质体(LipofectAMINE)和真核细胞表达质粒(pCMV-myc-p53)的复合体混合后,分别注入5组兔VX2肝癌模型的肿瘤供血动脉内,48 h后提取肿瘤组织蛋白,采用免疫斑点法(Western blot)和免疫组化法检测基因的转染及其表达水平.对5个不同Tf剂组p53表达水平的比较,采用x2检验.另取10只荷瘤兔分为2组,1组经肿瘤供血动脉注入Tf200 μg及LipefectAMINE 45 μl和pCMV-myc-p53质粒15 μg形成的复合体,另1组仅注入后两者的复合体,观察2组兔的肝功能、肿瘤体积和生存期.对2组实验兔同一时间点的肝功能输测结果采用成组t检验;肿瘤体积检查结果采用配对t检验;生存期采用单一样本均数t检验.结果 Western blot半定量分析显示,含Tf组的实验兔p53基因的转染及表达水平均较不含Tf组高.免疫组化染色显示,含0、100、200、300、400 μg Tf的5组实验兔,p53基因高度表达的阳性率分别为58.33%、69.44%、80.00%、83.33%、81.67%,含Tf组与不含Tf组之间差异有统计学意义(总体x2=42.37,P<0.01);随着Tf的量从0增加到200 μg,053基因高度表达的比例逐渐增加,但Tf自200 μg增加到400 μg时,p53基因高度表达比例差异无统计学意义(x2分割:前3组x2=4.8161,P<0.05,后3组x2=0.67,P>0.05).含Tf及不含Tf组实验兔术前及术后各时间点肝功能结果比较的差异无统计学意义(P值均>0.05),术后第3、7、10、14、20、25、30天2组实验兔平均肿瘤体积分别为(4.33±0.72)、(5.65±0.85)、(7.12±0.99)、(8.44±1.23)、(9.21±1.51)、(10.32±1.78)、(11.55±1.90)cm3和(4.36±0.66)、(4.86±0.68)、(5.12±0.73)、(5.72±0.93)、(6.13±1.26)、(6.68±1.38)、(7.02±1.55)cm3,在同一时间点差异有统计学意义(t=4.59,P<0.05),2组实验兔的平均生存时间分别为(28.6±2.2)及(35.8±3.1)d,差异有统计学意义(t=1.52,P<0.05).结论经动脉途径联合应用Tf是安全的,可明显提高脂质体介导的p53基因的转染效率和治疗效果.

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