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细胞外基质对表皮干细胞缝隙连接介导的细胞间通讯的影响

赵志力;杨蓉娅;张华;谷廷敏;王驰;隋志甫;常冬青

摘要: 目的:探讨细胞外基质对表皮干细胞间通讯的调节机制,为理解皮肤创伤愈合的信号传递提供实验依据. 方法:体外分离和培养人表皮干细胞(n=8),流式细胞仪检测抗原表达.细胞模型是2 x 106表皮干细胞接种在胶原包被的培养皿表面,实验组为表皮干细胞+Ⅳ型胶原基质组(n=8),对照组为表皮干细胞+Ⅰ型胶原/层粘连蛋白基质组(n=8),和表皮干细胞培养于无胶原包被的60ml平皿组(n=8).Epilife无血清培养基培养7天后,用激光共聚焦显微镜观察培养表皮干细胞缝隙连接蛋白(connexin)表达、单细胞显微注射荧光示踪剂检测在培养表皮干细胞之间缝隙连接细胞间通讯.结果:培养的人表皮干细胞抗c-Kit、CK14、CK19,β1广整合素、P63染色阳性,流式细胞学检查示C-Kit、CK14、CK19、β1-整合素、P63阳性率分别是(91.50±4.72)%,(88.54±6.28)%、(90.38±7.10%、(89.54±5.61)%和(87.38±4.64)%.培养7天后,在Ⅳ型胶原组,(90±4.11)%的细胞表达表皮干细胞表型;在无胶原基质组,细胞生长数量少,(50±6.20)%的细胞表达表皮干细胞表型;在Ⅰ型胶原/层粘连蛋白基质组,只有少于(10±3.54)%的细胞表达表皮干细胞表型,(90±4.83)%的细胞表达表皮细胞表型;此外,保持特异性标志的表皮干细胞Connexin表达图不同于有表皮细胞特征的细胞.因为皮肤的创伤愈合过程伴随着细胞外基质和生长因子的改变,随之是广泛的表皮干细胞的细胞分裂,分化,和迁移,而相似的改变对于体内皮肤创伤的修复过程极为重要.结论:细胞外基质通过Connexin调节表皮干细胞间通讯,不同Connexin表达模式允许第二信使分子和细胞代谢产物的不同通透性,因此协调细胞和组织功能.

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