首页 > 文献资料
-
七氟醚对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响
心肌缺血再灌注期间,由于细胞内钙超载、大量氧自由基生成及ATP耗竭,可导致心肌组织不可逆的损害.研究表明,吸入麻醉药可减轻心肌缺血再灌注损伤[1].七氟醚是继氟烷、安氟醚和异氟醚之后开发出来的新型吸人麻醉药,对其研究尚少,因此本实验采用大鼠离体心脏Langendorff灌流模型,探讨七氟醚对大鼠心肌缺血冉灌注损伤的影响.
-
甘氨酸在神经母细胞瘤细胞ATP耗竭损伤中的保护作用
目的:观察甘氨酸(glycine,Gly)对ATP耗竭的神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的保护作用及其可能机制.方法:通过乳酸脱氢酶(LDH)释放、四甲基噻唑蓝(MTT)实验及细胞内ATP含量的检测,观察ATP耗竭时Gly对SH-SY5Y细胞的保护作用.通过Western blot检测甘氨酸受体的表达情况.结果:耗竭1 h内,Gly保护组细胞内的ATP含高于耗竭组.耗竭6 h后.Gly保护组细胞的LDH释放率较耗竭组明显下降,MTT吸光度也明显上升.同时,ATP耗竭后细胞甘氨酸受体表达上调,这种上调趋势在使用甘氨酸后有所缓解.结论:甘氨酸町保护ATP耗竭的SH-SY5Y细胞,并缓解细胞应激时甘氨酸受体的表达上调.
-
甘氨酸对ATP耗竭诱生性细胞自噬的作用及其机制
目的:研究什氨酸(Gly)在ATP耗竭性细胞自噬中的作用及其可能机制.方法:用脂质体转染法将绿色荧光蛋白-微管相关蛋白轻链3(GFP-LC31质粒导入犬肾细胞(MDCK)中,在倒置荧光显微镜下观察细胞内自噬体的生成.同时收集细胞总蛋白,用Western blot检测LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达,并检测AMP激活的蛋白激酶(AMPK)的磷酸化活性改变.结果:MDCK细胞经转染GFP-LC3质粒后,可见细胞浆内散布明显的点状荧光颗粒;转染细胞被剥夺ATP后.发现细胞内自噬体数目明显增多.GFP-LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显增高,AMPK的磷酸化水平增强.用甘氨酸处理细胞后,发现自噬体较ATP耗竭组明显减少.GFP-LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显降低.细胞AMPK的磷酸化水平也有所降低.结论:ATP耗竭能诱导细胞的自噬性死亡.Gly可抑制ATP耗竭细胞的自噬,其机制可能与AMPK活性受抑有关.
-
甘氨酸在细胞ATP耗竭性损伤中的保护作用
目的:观察甘氨酸(Gly)对ATP耗竭的犬近曲小管上皮细胞(MDCK细胞)的保护作用,探讨其对复能时细胞损伤、增殖及代谢情况的影响.方法:通过正置显微镜观察、四甲基噻唑蓝(MTT)实验、3H-TdR掺入实验、乳酸脱氢酶(LDH)释放、台盼蓝活细胞计数,观察ATP耗竭时加入Gly对MDCK细胞的保护作用,及其后细胞复能时对细胞损伤、增殖及代谢情况的影响.结果:ATP耗竭2 h后,Gly处理组细胞台盼蓝染色率较耗竭组降低约50%,LDH释放率明显减少,而3H-TdR掺入量为耗竭组细胞的3倍以上.复能不同时相,光镜下Gly处理组细胞损伤程度明显减轻,台盼蓝染色率及LDH释放率均显著低于耗竭组,而MTT D值和3H-TdR掺入量明显高于耗竭组.结论:甘氨酸对ATP耗竭的MDCK细胞具有保护作用,可增加复能后细胞存活的机会,防止细胞膜通透性增加,提高受损细胞的增殖活性和代谢潜能.
-
甘氨酸对缺氧肾细胞保护作用的分子靶点研究
目的 明确甘氨酸对缺氧肾细胞保护作用的分子靶点.方法 分别定点突变甘氨酸受体 (glycine receptor α1, GlyR α1)配基结合位点202位酪氨酸 (Thr)为苯丙氨酸 (Phe) 和亮氨酸 (Leu),野生型及突变型GlyR α1转染入人胚胎肾细胞 (HEK293细胞) 细胞,观察GlyR α1突变是否影响甘氨酸和士的宁对缺氧肾细胞的保护作用;RT-PCR扩增犬肾细胞(MDCK细胞)内人源性GlyR α1的同源基因,设计4对短链寡核苷酸 (siRNA),观察RNAi抑制内源性GlyR α1表达对甘氨酸细胞保护作用的影响.结果 细胞ATP耗竭3 h后,甘氨酸处理组中,转染了正常GlyR α1、苯丙氨酸突变的GlyR α1及亮氨酸突变的GlyR α1的HEK293细胞的LDH释放率分别为(41.17±2.61)%、(62.67±4.53)%及(41.33±6.02)%.士的宁处理组中,分别有(44.50±5.97)%、(45.33±6.60)%及(59.17±6.97)%的LDH自上述3种转染细胞中释放到培养介质.4对siRNA对靶基因表达的抑制不完全相同,强抑制作用达70 %以上,细胞LDH释放率随GlyR α1表达水平下降而升高.结论 GlyRα1配基结合位点的不同突变,影响了不同配基的保护作用.抑制内源性GlyR的表达减弱了甘氨酸对ATP耗竭细胞的保护作用.甘氨酸发挥细胞保护作用时,其靶分子为GlyR.
