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ELISA法检测梅毒抗体假阳性原因分析及其对策
梅毒是由梅毒螺旋体感染引起的性传播疾病,近年来在我国的发病率呈上升趋势.准确、快速的实验室诊断是治疗和控制梅毒蔓延的关键.目前,梅毒的血清学检测是诊断的主要方法,其中特异性检测主要是酶联免疫吸附试验(ELISA),它具有高特异性、高敏感性以及低检测费用、适宜大批量检测的特点[1].
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睢宁县6～10岁儿童乙肝病毒血清学调查
目的 了解2011年睢宁县6～10岁儿童的乙肝病毒(HBV)感染及其免疫状况.方法 随机采集3个镇(社区)的1 826名6～10岁儿童的静脉血标本,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行乙肝两对半检测.结果 睢宁县6～10岁儿童HBsAg携带率为1.04％,各年龄组之间、不同性别儿童之间差异均无统计学意义(P值均＞0.05);HBsAb阳性率为72.23％,随年龄增长有明显下降趋势,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 睢宁县6～10岁儿童的HBsAg携带率较低,HBsAb阳性率处在较高水平,但随年龄增长有明显下降趋势,需加大乙肝疫苗接种工作的宣传力度,开展低龄儿童的二次免疫及一般人群的乙肝疫苗普种工作.
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血清阴性脊柱关节病患者血清软骨寡聚基质蛋白水平及意义的研究
目的 探讨检测软骨寡聚基质蛋白(COMP)水平对血清阴性脊柱关节病(SpA)患者疾病活动性及早期软骨破坏的临床意义.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,检测40例SpA患者及40例正常人血清中COMP的水平.同时测定SpA患者的其他实验室及临床指标:类风湿因(RF)、血沉(ESR)、C-反应蛋白(CRP)、肿痛关节数、附着点压痛数、夜间背痛(h)、骶髂关节压痛、脊柱活动度(Schober试验)及骶髂关节的CT分级,分析它们与COMP的相关性.结果 SpA患者血清COMP水平(11.459±3.091) U/L明显高于正常对照组(9.234±1.722) U/L, 两组差异有统计学意义(P＜0.001).28例SpA活动期患者血清COMP水平为(12.772±2.223) U/L, 与12例不活动期患者[(9.450±2.211) U/L]比较差异有非常显著性意义(P＜0.001).COMP水平与SpA患者的ESR、CRP、肿痛关节数、附着点压痛数、夜间背痛(h)、脊柱活动度及骶髂关节的CT分级,呈正相关(P＜0.05),与年龄、病程、RF、骶髂关节压痛、无明显相关(P＞0.05).结论 SpA患者血清中COMP高水平存在提示SpA疾病活动性和早期关节软骨破坏.
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HCV胶体金试纸条在献血者体检中的应用
我们在2008年1～12月对2 720例无偿献血者血清标本先用HCV快速胶体金试纸条进行初检,再对阳性标本进行PCR荧光定量检测,以确定HCV胶体金试纸条检测结果的准确性,现将结果报告如下.
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安徽省人群弓形虫感染血清流行病学调查
目的 了解安徽省人群弓形虫感染状况,探索弓形虫感染的易感因素,为制定防治策略和措施提供依据.方法 在安徽省南、北、中三个地区随机选择一个研究现场,采用整群抽样的方法,抽取三个地区7～75岁居民共1795人,对调查者进行弓形虫易感因素的问卷调查,并采用酶联免疫吸附试验(ELISA),检测血清中弓形虫特异抗体IgG.将调查和检测结果录入数据库,统计分析易感因素,结果共调查1 795人,阳性201人,总感染率为11.20%.不同地区、性别间感染率差异无显著性意义(P>0.05);不同年龄组间感染率差异具有显著性意义(χ2=30.27,P<0.05),其中60岁以上年龄组感染率高为18.35%;不同文化程度各组问感染率差异具有显著性意义(χ2=9.60,P<0.05);特殊人群(孕妇、宠物猫犬主、家畜饲养者、肿瘤患者及屠宰场工人)感染率为14.8796,显著高于普通人群(3.72%),其相对危险度(RR)为3.99.结论 安徽省弓形虫感染率在全国处于较高水平,其感染可能与接触动物的机会、生活方式及饮食习惯及自身免疫力等因素密切相关.
关键词： 弓形虫 酶联免疫吸附试验(ELISA) 血清学调查 分析 -
卵黄抗体用于蛇毒抗原检测的初步研究
目的在常规ELISA检测中,以卵黄抗体取代哺乳动物来源的IgG类抗体,以探讨卵黄抗体应用于蛇毒检测的可行性.方法以甲醛减毒的眼镜王蛇毒抗原免疫莱航母鸡,制备抗眼镜王蛇毒抗体;采用过碘酸钠法对特异卵黄抗体进行酶标;将卵黄抗体及相应酶标抗体应用于常规ELISA中,对国内常见蛇毒样品抗原(包括眼镜王蛇毒、眼镜蛇毒、金环蛇毒、银环蛇毒、五步蛇毒及广东园斑蝰蛇毒)进行检测,并进行灵敏度、精确度、特异性及交叉反应等分析.结果检测的灵敏度可达32 μg·L-1,并且眼镜王蛇毒抗原浓度在32～750 μg·L-1的范围内,线性关系较好(r=0.963);初步应用表明卵黄抗体对眼镜王蛇毒具有较高的特异性,与蝰蛇科的五步蛇毒、园斑蝰蛇毒无交叉反应,与眼镜蛇科的金环及银环蛇毒仅在高剂量(剂量大于500 μg·L-1)时存在轻度交叉反应,不干扰实验检测,但与眼镜蛇毒之间交叉反应明显,干扰实验检测;应用本方法对低(100 μg·L-1)、中(300 μg·L-1)、高(1 000 μg·L-1)不同浓度的眼镜王蛇毒样品检测,结果平均板内变异系数均在1%～3%之内,板间变异系数在8%以内.结论 特异的卵黄抗体应用于微量蛇毒检测研究是可行的,具有灵敏度高、特异性较强等优点.该研究将为蛇伤诊断试剂盒的研制提供相应的理论依据.
关键词： 眼镜王蛇毒 卵黄抗体(IgY) 鸡 酶联免疫吸附试验(ELISA) -
脂质体在检测血清子宫内膜抗体中的应用
目的介绍一种以脂质体作为载体检测血清中抗体的实验方法。方法用磷脂酰胆碱、神经节苷脂、胆固醇制备脂质体，在内部包裹碱性磷酸酶（AKP），表面偶联子宫内膜抗原。取1ml上述溶液加被检血清和补体（豚鼠血清）作用后，再加入AKP作用的底物，于400nm处测其OD值。结果脂质体法检测健康孕妇（HFW）和不孕症妇女（IFW）血清的子宫内膜抗体阳性率分别为0%（0/30）和31.5%（36/114）。与ELISA法检测的阳性率3%（1/30）和29.8%（34/114）相近，且差别无显著性（P>0.05）。结论脂质体可以作为酶和抗原的载体，检测血清中的抗体。
关键词： 脂质体 AKP 酶联免疫吸附试验(ELISA) 子宫内膜抗体 -
荧光定量PCR检测HBV DNA及其与Pre-S1和HBeAg关系探讨
目的探讨慢性乙肝患者HBV DNA与血清标志物前S1抗原(Pre-S1)和HBeAg的相互关系.方法采用荧光定量聚合酶链反应技术(Fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)对931份HBV-M不同阳性模式及35份HBV-M全阴模式血清进行HBV DNA及其标志物检测.结果在931例不同阳性模式乙肝患者中,HBeAg阳性总检出率为20.7%,Pre-S1抗原阳性总检出率为30.2%,HBV DNA阳性总检出率为45.3%.在422例HBV DNA(+)乙肝患者中,Pre-S1抗原阳性检出率为57.3%,HBeAg阳性检出率为44.1%.在281例Pre-S1(+)乙肝患者中,HBV DNA阳性符合率达86.1%,在Pre-S1(-)组HBV DNA阳性率仅为27.7%.结论HBV DNA检测是反映HBV复制直接的分子生物学指标;Pre-S1抗原和HBeAg是反映HBV复制的血清学指标,Pre-S1抗原甚至比HBeAg更灵敏地反映HBV复制.
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乙型肝炎患者血清可溶性白细胞介素2受体测定的意义
[目的]检测乙肝患者血清可溶性白细胞介素2受体(sIL-2R)的水平及其与血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、血清总胆红素(SB)、白球蛋白比值(A/G)、胆碱酯酶(ChE)及乙肝病毒复制标志物之间的关系.[方法]酶联免疫吸附试验(ELISA)检测66例乙肝患者和20例健康对照组血清sIL-2R含量.[结果]乙肝患者血清slL-2R水平高于对照组,其升高与ALT、SB、A/G和ChE相关,与乙肝病毒的存在和复制与否无关.[结论]急性、慢性、重型乙肝及乙肝后肝硬变患者血清sIL-2R水平,在一定程度上反映了肝细胞损伤及炎症程度.
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两种不同方法检测狂犬病免疫抗体的比效
我们采用间接免疫荧光试验(IFA)和酶联免疫吸附试验(ELISA),对186位犬伤病人和20位非犬伤病人血清进行了检测,结果报告如下.
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CFP10-ESAT6融合蛋白用于结核分枝杆菌感染诊断ELISA方法的初步研究
目的 制备结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白,探讨CFP10-ESAT6融合蛋白在结核分枝杆菌免疫诊断中的应用价值.方法 PCR扩增得到CFP-10、ESAT6基因片断,将其先后克隆入pET-28a表达载体.优化表达条件、用镍亲和层析的方法纯化带His标签的重组CFP10-ESAT6融合蛋白(rCFP10-ESAT6).制备兔多克隆抗体,建立rCFP10-ESAT6为抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,以健康者血清为对照,检测170例结核患者血清的抗体.结果 重组质粒pET28a-CFP10-ESAT6靶基因测序结果与预计设计完全一致.融合蛋白在E.coli BL21 (DE3)工程菌中均为可溶性表达,表达量占菌体总蛋白的40％.利用金属螯合亲和层析直接纯化重组蛋白,纯度达到95％以上.Western blot分析表明,重组蛋白能与结核患者血清发生特异性免疫结合反应,与健康者血清不发生反应.CFP10-ESAT6的兔多克隆抗体的效价为1∶8 000,CFP10-ESAT6作为包被抗原的检测结核病人血清中特异性抗体的间接ELISA佳包被浓度为0.002 μg/mL,患者血清的佳稀释度为1∶500.检测结果与临床诊断的符合率,ELISPOT＞ ELISA(rCFP10-ESAT6)＞ELISA (kit).结论 CFP10-ESAT6融合蛋白具有较高的抗原特异性和免疫反应性,有可能成为结核病免疫学诊断的特异抗原,对结核的诊断具有重要参考价值.
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弱智儿童弓形虫抗体检测的连续观察与分析
目的 弓形虫感染与弱智儿童等神经系统发育迟钝儿童之间的关系,笔者在对市某社会福利院及本市某小学智力欠佳的儿童进行了弓形虫血清学的检测与分析的基础上,选择部分病例分别在治疗3个月和6个月后,采用乙酰螺旋霉素等药物治疗,用同样的方法检测弓形虫抗体进行对照性观察.方法 选择弱智儿童18人在接受用乙酰螺旋霉素治疗后的3个月和6个月采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接红细胞凝集试验(IHA)法进行弓形虫特异性Ab的检测.结果 弱智儿童治疗组在治疗3个月和6个月以后的弓形虫抗体平均阳性检出率分别为16.67%,3/18(ELISA);11.11%,2/18(IHA)和5.56%,1/18,(ELISA)/5.56%,1/18,(IHA),低于弱智儿童未治疗组的平均阳性检出率(20.69%,6/29,ELISA;21.14%,7/29,IHA).但高于正常对照组1.96%,1/51(ELISA);1.96%,1/51(IHA).弱智儿童治疗6个月治疗组和弱智儿童未治疗组两组差异显著(X2=1.54,ELISA;X2=2.01,IHA.P＜0.05).结论 儿童的弓形虫感染与其母亲在孕期或本人与动物的密切接触有关.因弓形虫能损害大脑和神经系统,严重影响儿童神经系统的发育和功能,成为优生优育的一大隐患.因此,防止母子间垂直传播和避免妇女(特别在孕期)与动物接触是预防儿童弓形虫感染的主要关键.提示临床上弱智儿童首先应及时进行弓形虫抗体的检测;其次应及时应用抗弓形虫的药物治疗.有利于弱智儿童智力的尽可能恢复.
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武汉地区人群弓形虫感染血清学调查分析
目的 了解武汉市弓形虫感染现状,为制定防治策略提供科学依据.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,检测人群血清弓形虫IgG抗体.结果 共检测3 009人,阳性141人,平均阳性率4.69%.其中特殊人群(兽医、饲养员、肉贩、宠物猫犬主、孕妇、献血员等)阳性率6.51%(117/1 798),一般人群(对照组)阳性率1.98%(24/1 211),有非常显著意义差异(P＜0.01).不同地区、性别、民族以及文化程度之间差异无显著性意义(P＞0.05).结论 弓形虫血清学阳性率与接触感染动物的机会密切相关,兽医、饲养员、肉贩等是弓形虫感染的高危人群;本次调查孕妇与献血员弓形虫阳性率高于一般人群,应引起重视,建议加强血清学监测,便于及时采取有效干预措施.
关键词： 弓形虫 酶联免疫吸附试验(ELISA) 特殊人群 -
ELISA法检测的影响因素及其对策
酶联免疫吸附试验(ELISA)是目前临床实验室检测免疫学指标受欢迎、应用范围广泛的方法之一,广泛应用于乙肝、丙肝、梅毒、艾滋病以及结核等传染类疾病的诊断及激素的检测,具有灵敏度高、特异性强、快速简便、重复性好、成本低、环保且适合大批量人群筛查等优点,虽然操作简单,但是一些影响因素不容小觑,临床待检标本常受溶血、黄疸、脂浊、类风湿因子、高浓度非特异性免疫球蛋白、药物、血液抗凝剂及细菌污染等因素的影响,导致检测结果判断错误,本文就ELISA法检测的影响因素及相应对策做一综述,提高检测的准确性.
关键词： 酶联免疫吸附试验(ELISA) 影响因素 对策 -
浅谈磁微粒化学发光法与酶联免疫吸附试验检测梅毒的阳性结果对比
目的:磁微粒化学发光法和酶联免疫吸附法在梅毒检验结果的对比分析.方法: 收集2015年2月~2015年4月渭南市中心医院检验科血清标本10572份血清标本.采用磁微粒化学发光法对10572份标本进行初筛,阳性标本进行酶联免疫吸附试验复检.结果:磁微粒化学发光法检测10572份标本阳性标本为的173例,用酶联免疫吸附法复检阳性结果为120例.结论:部分用磁微粒化学发光法检测发光值低的梅毒阳性样本容易存在假阳性,建议用酶联免疫吸附法重复检测,以排除假阳性.
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免疫印迹技术在老年人梅毒螺旋体抗体阳性标本中的临床应用
目的 探讨免疫印迹技术在老年人梅毒螺旋体抗体阳性标本中的临床应用,减少假阳性,避免误诊.方法 将ELISA 法检测出的老年人梅毒螺旋体抗体阳性标本78 例,用免疫印迹法(WB)和TPPA 法进行确认实验.结果 ELISA 法检出阳性78 例,WB 法确认阳性68 例,假阳性率12.82% ;TPPA 确认阳性69 例,假阳性率11.53% ;ELISA 法假阳性的S∕CO 值与真阳性的S∕CO 值差别无统计学意义(P>0.05),WB 法与TPPA 法确认的阳性率差别无统计学意义(P>0.05).结论 为提高老年人梅毒检测的准确性,对ELISA 法检测的阳性标本,结合临床表现与病史,对有疑问的标本,用WB 法进行确认,排除假阳性.
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E-选择素在上皮性卵巢癌患者血清中的表达及临床意义
目的:探讨E-选择素( E-selectin)表达对上皮性卵巢癌的诊断价值.方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测62例卵巢癌患者(恶性组)、30例卵巢囊肿患者(良性组)和30例健康志愿者(对照组)血清E-选择素含量的变化.结果:ELISA结果显示:卵巢癌组治疗前血清sE-selectin明显增高,与对照组及卵巢囊肿组的差异有统计学意义(P＜0.05)；且与淋巴结转移、肿瘤分化程度和临床TNM分期明显相关.行根治性手术组术后血清sE-selectin降低,与对照组和卵巢囊肿组的差异有统计学意义(P＜0.05),姑息性手术组血清sE-selectin则无显著变化(P＞0.05).结论:利用酶联免疫吸附试验检测E-选择素的表达有助于综合判断卵巢癌的恶性程度和转移潜能,可能成为辅助诊断和判断预后有价值的新指标.
关键词： 卵巢肿瘤 E-选择素 酶联免疫吸附试验(ELISA) 肿瘤转移 -
南宁市患者梅毒抗体检测结果分析
目的:了解我院2009年-2011年住院及门诊梅毒可疑患者梅毒螺旋体的感染情况并作分析.方法:用酶联免疫吸附试验(ELISA)对患者进行梅毒抗体检测,阳性者用梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)确认.结果:3年间共检测2499份标本,梅毒抗体阳性率为30.69％.其中门诊的阳性率为35.44％,女性的阳性率高于男性,阳性患者年龄主要在18岁～50岁之间.结论:南宁市患者梅毒抗体阳性率高于国内所见的报道.
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5种方法检测梅毒螺旋体抗体的临床应用价值
目前在检测梅毒螺旋体的所有方法中,梅毒血清学检测方法分为梅毒螺旋体血清学试验和非梅毒螺旋体血清学试验,医疗机构一般采用以上两类方法的各一种作为检测手段,包括广泛被临床使用的梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、化学发光酶免疫分析法(CLEIA)、胶体金法(GICA)和甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)5种方法.探讨5种常用的梅毒螺旋体抗体血清学检测方法的临床应用价值,评价5种检测方法的敏感度、特异度,可及早发现和控制潜在传染源,对患者采取必要的隔离与防护措施,控制感染与交叉感染.
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汉坦病毒H8205部分核壳蛋白基因在E.coli中的表达
根据汉坦病毒H8205株NP基因的序列,设计一对引物,扩增NP前292个氨基酸多肽基因片段,克隆于表达载体pGEX-3X,与载体中26kD的谷胱苷肽巯基转移酶(GST)融合表达.SDS-PAGE显示表达产物(GST-NP)主要以包涵体形式存在.Western-blotting表明此融合蛋白有抗原性.包涵体经分离、洗涤、溶解后,Sepharose 6B层析纯化,用此融合蛋白作抗原,进行ELISA法检测临床HFRS病人标本的IgG和IgM,有很好的特异性和敏感性.有生物活性的汉坦病毒H8205 NP的体外表达成功,为汉坦病毒基因工程抗原的大量制备奠定了基础,也为汉坦病毒的临床检测和流行病学调查提供了一种廉价、安全、可靠的抗原.
关键词： 汉坦病毒 基因工程核衣壳蛋白 酶联免疫吸附试验(ELISA)
