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玻瓦桑脑炎检测研究进展
玻瓦桑脑炎(Powassan Encephlitis PE)是一种由玻瓦桑病毒(Powassan Virus POW)引起的以脑组织炎症(脑炎、脑膜炎等)为典型症状的疾病[1、2].1958年9月,McLean和Donahue从加拿大安大略省(Antario)玻瓦桑镇一名5岁脑炎患者的大脑神经中枢及脑皮质细胞中首次分离到了该病毒[1].从1958-1998年,加拿大和美国东北部共报道了27例人感染玻瓦桑脑炎的病例.
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亚低温预处理对谷氨酸诱导原代大鼠皮质神经细胞损伤的保护作用
目的 观察亚低温预处理对体外环境下培养大鼠大脑皮质细胞发生类缺血/再灌注(I/R)损伤的保护作用;比较亚低温单用或联合药物预处理的保护作用.方法 选择出生24 h内SD大鼠的大脑皮质细胞,体外培养至第3天,用阿糖胞苷(2.5 mg/L)培养基换液1次;培养6d后随机分为空白对照组、谷氨酸损伤组(加入含200 μmol/L谷氨酸的无血清培养基作用0.5 h)、亚低温预处理组(谷氨酸损伤前1d于33.5℃低温下培养24 h)、亚低温联合依达拉奉预处理组和亚低温联合丙泊酚预处理组(谷氨酸损伤前1d分别更换为100 μmol/L依达拉奉培养基和3 mg/L丙泊酚培养基后,再低温培养24 h).各组更换正常培养基24 h后检测细胞存活率[四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法]、细胞凋亡率、c-fos蛋白表达,苏木素-伊红(HE)染色后显微镜下观察细胞形态改变,铀-铅染色后透射电镜下观察细胞超微结构改变.结果 谷氨酸损伤组细胞存活率明显低于空白对照组[(0.20±0.02)％比(0.97±0.03)％,P＜0.01],细胞凋亡率和c-fos蛋白表达均明显高于空白对照组[细胞凋亡率:(9.85±0.76)％比(0.94±0.20)％,c-fos(ng/L):6.96±0.75比1.65±0.59,均P＜0.01].亚低温预处理可明显逆转谷氨酸损伤细胞的存活率、凋亡率及c-fos水平,且以亚低温联合丙泊酚预处理作用为明显[存活率:(0.80±0.04)％比(0.20±0.02)％,凋亡率:(2.26±0.54)％比(9.85±0.76)％,c-fos(ng/L):2.98±0.46比6.96±0.75,均P＜0.01].显微镜下观察细胞形态发现,空白对照组大部分细胞形态大致正常;谷氨酸损伤组较多细胞质呈深红色,核呈蓝黑色,同缩状态,轴突萎缩明显,个别细胞突起断裂,细胞数量锐减;各预处理组细胞数量减少不明显,可见少量凋亡细胞.透射电镜下观察细胞超微结构发现,空白对照组神经细胞超微结构无明显改变;谷氨酸损伤组细胞质内细胞器数量明显减少,线粒体严重肿胀、嵴消失,呈空泡化或固缩,粗面内质网严重扩张,核膜局部出现囊样改变、甚至溶解断裂,染色质浓缩、凝集在核膜周边;各预处理组病理改变较谷氨酸损伤组明显减轻.结论 亚低温预处理能降低体外培养谷氨酸对大鼠大脑皮质神经细胞的损伤,且亚低温联合丙泊酚预处理组的保护作用更好.
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依达拉奉联合异丙酚预处理对乳鼠离体脑皮质细胞缺血/再灌注损伤保护作用的研究
目的 观察依达拉奉联合异丙酚预处理对乳鼠离体脑皮质细胞缺血/再灌注(VR)损伤的保护作用以及脑保护效应的时间窗.方法 体外培养出生24 h内SD乳鼠脑皮质细胞7d,按随机数字表法分为空白对照组、浴氨酸损伤组、药物预处理24 h对照组及药物预处理24、2、0h组.各药物预处理组分别于谷氨酸损伤(200 μmol/L 0.5 h)前24、2、0h用含100 μmol/L依达拉奉和3 mg/L异丙酚的培养基联合预处理原代培养的神经细胞.通过测定神经细胞存活率[四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法]、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、神经细胞Na+-K+-ATP酶活性观察神经细胞成活和细胞损伤情况；通过测定超氧化物歧化酶(SOD)活性(黄嘌呤氧化酶法)、丙二醛(MDA)含量(硫代巴比妥酸法)观察神经细胞抗氧化和氧化水平；流式细胞仪检测神经细胞凋亡情况.结果 与空白对照组比较,谷氨酸损伤组神经细胞存活率[(62.2±23.4)％比(90.5±14.8)％]、SOD活性(U/ml:6.864±2.872比29.569±3.684)、Na+-K+-ATP酶活性(U·mg4·h-1:0.318±0.146比0.636±0.168)均显著下降,神经细胞凋亡率[(9.4±0.7)％比(6.1±0.2)％]、MDA含量(nmol/ml:0.515±0.101比0.294±0.105)、LDH漏出率[(41.2±1.6)％比(36.8±4.6)％]均显著升高(P＜0.05或P＜0.01).与谷氨酸损伤组比较,药物预处理组细胞存活率、SOD活性、Na+-K+-ATP酶活性均显著升高,细胞凋亡率、MDA含量、LDH漏出率均显著下降,并呈时间依赖性,以预处理24 h组作用为显著[细胞存活率:(89.2±30.3)％比(62.2±23.4)％,SOD活性(U/ml):17.780±4.514比6.864±2.872,Na+-K+-ATP酶活性(U·mg-1·h-1):0.541±0.052比0.318±0.146,细胞凋亡率:(6.7±0.4)％比(9.4±0.7)％,MDA含量(nmol/ml):0.319±0.101比0.515±0.101,LDH漏出率:(37.2±1.4)％比(41.2±1.6)％,均P＜0.01].结论 依达拉奉联合异丙酚预处理对乳鼠离体脑皮质细胞I/R损伤有明显协同保护作用；且以24 h作为时间窗的脑保护作用明显.
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Necrostatin-1对蛛网膜下腔出血后皮层细胞坏死状凋亡、坏死与自噬的影响
目的 研究necrostatin-1对蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后皮层细胞坏死状凋亡、自噬与坏死调节的作用.方法 72只SD大鼠随机分成假手术组、模型组、赋形剂组、necrostatin-1组.赋形剂组经侧脑室给予二甲基亚砜2μL,necrostatin-1组给予necrostatin-1 5.2μg溶于2μL二甲基亚砜.血管内穿刺法制作SAH模型.每组9只观察皮质受体相互作用蛋白3和微管相关蛋白1轻链3的变化,检测坏死状凋亡与自噬;9只腹腔注射碘化丙啶观察细胞坏死.对所有大鼠进行6、12、24h Loeffler神经行为学评分.结果 Necrostatin-1下调皮质受体相互作用蛋白3和微管相关蛋白1轻链3的表达(P<0.05),减少皮层碘化丙啶阳性细胞数目(P<0.05),提高12、24h的Loeffler神经功能评分(P<0.05),有改善SAH预后的作用.结论 Necrostatin-1可能在抑制SAH后脑细胞坏死状凋亡时也下调了自噬与坏死水平.
