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整合素ανβ3和血管内皮生长因子在子宫内膜异位症中的临床研究
目的：通过检测子宫内膜异位症患者整合素ανβ3和血管内皮生长因子(VEGF)的表达，探讨其在子宫内膜异位症的发病机制。方法采用免疫组化方法检测40例异位内膜、在位内膜中整合素ανβ3和VEGF的表达，并和30例正常子宫内膜作对照。结果异位内膜组整合素ανβ3阳性表达率为80%，在位内膜为62.5%，正常内膜组为16.67%；异位内膜VEGF阳性表达率为82.5%，在位内膜为50%.正常对照组为20%。异位内膜组整合素ανβ3和VEGF高于在位内膜组，在位内膜组二者水平则高于正常内膜组，差异有统计学意义(P<0.05)。异位内膜整合素ανβ3与VEGF表达呈正相关。结论整合素ανβ3与VEGF在异位内膜和在位内膜的异常表达，在子宫内膜异位症的发病过程中起着重要作用，二者可能存在协同作用，促进病变的进一步发展。
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整合素ανβ3与肿瘤细胞
肿瘤细胞是一种变异的细胞,是产生癌症的病源.肿瘤细胞与正常细胞不同,有恶性增殖和侵袭性生长等特点,使其成为威胁人类健康的头号敌人.整合素ανβ3是目前研究较为广泛的细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)黏附受体.整合素ανβ3在肿瘤细胞中相对于其在正常组织及细胞中的表达量有显著的提高.研究认为整合素ανβ3在肿瘤细胞增殖、抗凋亡以及其黏附和转移的过程中发挥积极的作用.本文对整合素ανβ3在肿瘤细胞不同时期发挥的不同作用做一综述.
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中药抑抗汤含药血清对子宫内膜容受性的影响
目的 探讨中药抑抗汤含药血清对体外培养的小鼠子宫内膜容受性的影响.方法 40只实验小鼠随机分为两组,分别用中药抑抗汤0.8ml和等量生理盐水灌胃28d,制备含药血清和空白血清.提取妊娠第4天(D4)雌鼠子宫内膜细胞后分为含药血清(A组)、胎牛血清(B组)和空白血清(C组)三组进行细胞培养.黏附实验检测子宫内膜细胞的黏附能力,ELISA法检测细胞培养液白血病抑制因子(LIF)水平,Western blot检测整合素ανβ3蛋白水平.结果 A组细胞黏附能力、LIF和整合素ανβ3蛋白表达均较B、C组显著增加(P＜0.05).结论 抑抗汤可能是通过增强细胞黏附功能,增加LIF和整合素ανβ3的表达来改善子宫内膜容受性.
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小干扰RNA沉默白血病抑制因子基因对整合素ανβ3表达的影响
目的 白血病抑制因子(leukemia inhibitor factor,LIF)及整合素ανβ3 被认为是子宫内膜容受性的标记分子.探讨小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对LIF的抑制效应及该效应对整合素ανβ3表达的影响.方法 化学合成3条LIF siRNA(LIFsiRNA-1、LIFsiRNA-2和LIFsiRNA-3),用脂质体法转染到小鼠子宫内膜细胞中,实时荧光定量PCR筛选出佳干扰片段和优转染浓度,RT-PCR检测整合素ανβ3 mRNA的表达水平,ELISA法检测细胞培养液中LIF蛋白,Western blot检测整合素ανβ3蛋白,从蛋白水平进行相关性分析.结果 siRNA转染后,LIFsiRNA-1 mRNA表达下调明显(0.26±0.09),差异有统计学意义(P<0.01),且在一定范围内呈剂量依赖性,选择优转染浓度70nmol/mL,整合素ανβ3 mRNA表达明显下降(0.53±0.23),差异有统计学意义(P<0.01);LIF蛋白[(2.47±0.03)ng/mL]及整合素ανβ3蛋白[(0.16±0.08)ng/mL]表达较对照组显著下调,差异有统计学意义(P<0.01).结论 LIFsiRNA-1可很好地抑制LIF的表达,而LIF的沉默表达能有效抑制整合素ανβ3的表达,LIF和整合素ανβ3具有显著正相关性(P<0.01).
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人脑胶质瘤中VEGF和整合素ανβ3的表达及相关性研究
目的研究血管内皮生长因子(VEGF)和整合素ανβ3(INTανβ3)在不同病理级别人脑胶质瘤中的表达,并探讨两者之间的关系.方法采用免疫组化SABC法和图像分析技术检测65例不同病理级别人脑胶质瘤标本中VEGF和INT ανβ3的表达水平.结果 VEGF在不同级别胶质瘤中表达的平均光密度值(ALD)分别为0.05177±0.019683,0.07399±0.02798和0.09168±0.03671,INT ανβ3在不同级别胶质瘤中表达的平均光密度值(ALD)分别为0.04872±0.01869,0.06065±0.02998和0.08189±0.03953,差异均有显著性意义(P＜0.05),二者的表达水平呈正相关(r=0.835,P＜0.01).结论VEGF和INTανβ3在人脑胶质瘤中的表达水平与胶质瘤的恶性程度密切相关,两者之间呈正相关,提示二者在人脑胶质瘤的恶性生物学行为中起重要作用.
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益气血补肝肾方对整合素ανβ3在早孕小鼠子宫内膜中表达的影响
目的 观察益气血补肝肾方对整合素ανβ3在早孕小鼠子宫内膜中表达的影响.方法 采用免疫组织化学定位观察整合素ανβ3在早孕小鼠子宫内膜中的表达；采用实时荧光定量PCR在mRNA水平上检查整合素ανβ3在早孕小鼠子宫内膜中的表达.结果 免疫组化结果显示,整合素ανβ3蛋白在妊娠早期小鼠表达于子宫内膜腔上皮、腺上皮细胞的细胞膜及胞浆中,呈棕黄色颗粒状.D1、D2表达弱,D4表达明显增加,D5表达强,D6表达减弱；实时荧光定量PCR结果显示,整合素ανβ3在中药组和对照组早孕小鼠子宫内膜中的表达随妊娠天数呈规律变化,在中药组的表达高于对照组,但差异无统计学意义.两组中D4和D5表达强,与D1、D2、D6比较差异具有显著性(P＜0.05),整合素αν在D5的表达显著高于D4(P＜0.01).结论 益气血补肝肾方可改善子宫内膜的容受性,促进胚胎与子宫内膜发育的同步性,从而在胚胎着床过程中发挥重要作用.
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益气血补肝肾方对子宫内膜整合素ανβ3表达的影响
目的:观察益气血补肝肾方对子宫内膜整合素ανβ3表达的影响,探讨益气血补肝肾方提高妊娠率的机制.方法:600只小鼠随机分为超促排卵组、促排卵组、自然排卵组各200只,每组小鼠中又分为中药干预组与对照组各100只,分别用免疫组织化学、RT-PCR和Western blot法检测整合素ανβ3的表达.结果:超促排卵组和促排卵组小鼠中,中药干预组妊娠率显著高于对照组(P＜0.05).但自然排卵组中药干预后妊娠率与对照组无统计学差异(P＞0.05).免疫组织化学、RT-PCR和Western blot法均显示,超促排卵组和促排卵组小鼠中,中药干预后整合素ανβ3的表达显著升高(P＜0.05),而对自然排卵组则无明显影响(P＞0.05).结论:益气血补肝肾可能通过上调超促排卵及促排卵小鼠子宫内膜整合素ανβ3表达,改善子宫内膜容受性,从而提高妊娠率.
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骨桥蛋白、整合素ανβ3及ILK表达异常在子宫内膜癌中的相关性研究
目的 探讨骨桥蛋白(OPN)、整合素ανβ3和ILK在子宫内膜癌的表达情况以及三者表达的相互关系.方法 采用免疫组织化学SP法,检测正常子宫内膜组织(NE)、子宫内膜不典型增生组织(AH)及子宫内膜腺癌组织(EC)中的OPN、整合素ανβ3及ILK表达.结果 在NE、AH、EC组织中,OPN、整合素ανβ3及ILK的阳性表达率分别为30％、45％、86.7％；15％、40％、75.6％；20％、25％、71.1％.三者的表达从NE到EC逐渐增高(p＜0.01),随EC恶性程度的增高,其表达均显著增加,三者在EC中的表达呈正相关性.结论:OPN、整合素αvβ3及ILK在EC中表达均呈阳性,与肿瘤恶性程度呈明显正相关；EC中三者表达呈正相关性,同时检测三者表达水平可能提高子宫内膜癌的检出率及综合预测预后.
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免疫组化CSA法在检测子宫内膜石蜡切片整合素ανβ3中的应用
[目的]探讨免疫组织化学技术检测子宫内膜整合素ανβ3抗原的方法,为研究整合ανβ3在胚胎黏附、着床过程中的作用机制提供方便.[方法]采用免疫组化LSAB法和CSA法检测妊娠组和非妊娠组子宫内膜整合素ανβ3抗原.[结果]用CSA法检测接受胚胎移植治疗的不孕症患者子宫内膜石蜡切片中的整合素ανβ3抗原,获得了阳性的结果,妊娠组整合素ανβ3表达明显高于非妊娠组.[结论]CSA检测法比LSAB法敏感性更高,特别适用于检测组织细胞表达低的抗原,能够将检测冷冻切片的整合素ανβ3抗体用于检测石蜡切片,整合素ανβ3表达量与胚胎种植高度正相关.
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LUFS患者子宫内膜容受性的主要影响因素及其冻融胚胎移植时机选择
目的：探讨未破裂卵泡黄素化综合征( LUFS)患者子宫内膜容受性的主要影响因素及其冻融胚胎移植时机选择。方法选择生殖中心拟行冻融胚胎移植的不孕患者,根据是否发生LUFS 将30例不孕患者分为LUFS 患者(观察组,17例)和正常排卵患者(对照组,13例)。在其尿LH 峰出现后第6~10天取种植窗期子宫内膜及外周血标本共30例,采用化学发光法判断血清E2、P 的指标；采用免疫组化SP法和组织学积分H-score 方法对ER、PR及整合素ανβ3在种植窗期子宫内膜的表达进行半定量分析。结果观察组组种植窗期(黄体中期)血清E2水平较对照组低,差异无统计学意义；观察组血清P 水平较对照组低,差异有统计学意义( P<0．01)。种植窗期子宫内膜ER、PR 呈阳性表达,定位于细胞核。观察组ER、PR表达较对照组强,差异均有统计学意义( P<0．05)。种植窗期子宫内膜整合素ανβ3呈阳性表达,定位于细胞浆。观察组整合素ανβ3免疫组化H-score 积分值较对照组低,差异有统计学意义(P<0．01)。 LUFS 患者种植窗期血清P 水平与子宫内膜整合素ανβ3的免疫组化H-Score 积分值具有相似变化趋势。经相关性检验,两者之间具有显著相关性(r=0．77,P<0．01)。结论LUFS 患者整合素ανβ3表达低下,说明LUFS 患者种植窗期的子宫内膜容受性下降,而这可能是由于LUFS 患者黄体中期外周血P水平低下,导致子宫内膜的ER、PR 降调失败所致,而子宫内膜容受性异常是导致冻融胚胎移植失败的重要因素之一。
关键词： 未破裂卵泡黄素化综合征 子宫内膜容受性 雌激素受体 孕激素受体 整合素ανβ3 -
子宫内膜骨桥蛋白和整合素ανβ3表达与IVF-ET反复种植失败的关系
目的:检测骨桥蛋白(OPN)和整合素ανβ3在人子宫内膜的表达,并探讨它们与体外受精一胚胎移植(IVF-ET)反复种植失败的相关性.方法:采用免疫组织化学法检测35例反复种植失败患者(研究组)及35例正常妇女(对照组)各时期子宫内膜组织中OPN和整合素ανβ3的表达.结果:OPN在增殖晚期开始表达,整合素ανβ3则在分泌中期开始出现并表现为强表达,两者在分泌中、晚期的表达水平均较其余各期明显增加(P<0.05).与对照组相比,两者在研究组种植窗期内膜的表达均明显减弱(P<0.05).结论:OPN和整合素ανβ3在正常子宫内膜中协调表达且呈现明显周期依赖性,参与子宫内膜客受性的建立;两者在反复种植失败患者种植窗期内膜中的表达明显减弱.可能是引起种植失败的原因之一.
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整合素ανβ3在肿瘤中的研究进展
整合素是细胞表面重要的黏附分子,介导细胞与胞外基质的相互作用,在肿瘤的发生、侵袭、转移以及肿瘤血管的形成过程中发挥重要的作用.随着对整合素的深入了解,很多整合素分子在肿瘤中的作用也被逐渐地认识,目前采用针对整合素不同分子的克隆抗体、整合素靶向用药及多种方法联合治疗等,通过调节整合素的生物学作用,促进肿瘤细胞凋亡,阻断肿瘤细胞侵袭迁移,抑制肿瘤血管的生成,从而达到治疗肿瘤的目的 .这些研究发现对开拓肿瘤治疗新方案有着重要的意义.
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构建预设CDR3基因噬菌体抗体库筛选抗人整合素ανβ3 mAb的人源化Fab
目的:构建预设CDR3基因的噬菌体抗体库, 通过抗原表位导向选择方法筛选抗人整合素ανβ3单克隆抗体(mAb)人源化Fab.方法:将鼠mAb LCDR3重组到人轻链可变区文库中并与人/鼠嵌合重链Fd基因配对构建杂合噬菌体抗体库, 用固相人整合素ανβ3抗原筛选人源化轻链基因.再用所获人轻链基因与移植有鼠mAb HCDR3的人重链Fd基因配对构建人源噬菌体抗体库, 筛选人源化Fab.结果:分别构建了库容为2.1×106和2×107的杂合噬菌体抗体库和人源噬菌体抗体库, 筛选到3株人源Fab克隆.经间接ELISA及竞争抑制ELISA证实, 能特异结合整合素ανβ3抗原, 其中人源D5株Fab克隆的基因序列表明, 人轻链可变区基因属VKIII亚群, 人重链可变区基因属VH1亚群.结论:利用噬菌体抗体库技术, 成功地进行了鼠抗人整合素ανβ3 mAb E10人源化的改造, 为进一步临床应用奠定了基础.
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抗人整合素ανβ3单链抗体的构建和表达
目的:利用基因工程抗体技术构建抗人整合素ανβ3单链抗体(scFv).方法:从分泌抗人整合素ανβ3单抗(mAb)的杂交瘤细胞E10总RNA中,用RT-PCR扩增VH和VL基因,对其核苷酸序列分析后,通过PCR在VH和VL基因间插入柔性连接子(Gly4Ser)3,组装成scFv基因,并克隆至原核表达载体pTIG-TRX中.以重组子转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导目的基因表达.结果:转化菌可表达相对分子质量(Mr)为31 000的scFv.Western blot证实,具有His6标签蛋白的表达.经低剂量的IPTG诱导和较低温度培养,scFv获得了可溶性形式表达.表达产物经Ni-NTA琼脂糖层析纯化后纯度达91%以上.ELISA鉴定证实,scFv具有良好的抗原结合活性.结论:成功地构建并表达抗人整合素ανβ3的scFv,为进一步临床研究奠定了基础.
