首页 > 文献资料
-
假复型技术在Aβ寡聚体电镜检测中的应用研究
目的 探讨改进假复型技术用于电镜直接观察Aβ寡聚体特定成分ADDLs的效果.方法 利用假复型技术原理,对ADDLs进行分次点样于琼脂糖凝胶,逐步富集,之后再进行负染制样.结果 在透射电镜下观察到大小从5～10nm左右球形、颗粒状结构,以及20～30nm的卷曲结构.结论 假复型技术用于ADDLs的浓缩与电镜制样是快捷、有效的,为进一步开展Aβ寡聚体的电镜观察和超微结构研究奠定了基础.
-
Aβ寡聚体预处理的BV2细胞对PC12细胞损伤的影响及其机制
目的 研究Aβ寡聚体预处理的BV2细胞对PC12细胞损伤的影响及机制,为阿尔茨海默病(AD)的抗炎治疗提供体外实验依据.方法 分别用不同浓度Aβ1-42寡聚体(0、10 μmol/L)作用于PC12细胞作为对照组(Aβ+PC12);用相应浓度的Aβ1-42寡聚体预处理BV2细胞24 h后与PC12细胞共育作为实验组1(Aβ+BV2+PC12);不同浓度IL-1β处理PC12细胞24 h作为实验组2(IL-1β+PC12);预先用IL-1ra(50 ng/ml)孵育PC12细胞1 h后,进行实验组1的细胞培养作为实验组3[(Aβ+ BV2)+(PC12+IL-1ra)].用ELISA法检测细胞培养上清液中IL-1β水平/浓度,用Western印迹法检测tau(pS396)、tau蛋白表达情况.结果 Aβ寡聚体预处理的BV2细胞培养液中可检测出IL-1β,Aβ寡聚体浓度的增加与IL-1β含量增加呈现一定的量效关系.PC12细胞与Aβ寡聚体预处理24 h的BV2细胞共育后(实验组1),可见PC12细胞tau(pS396)蛋白表达较对照组进一步增多(P＜0.05),此作用可被IL-1ra部分抑制(P＜0.05).结论 BV2细胞可加重Aβ寡聚体对PC12细胞损伤过程;Aβ寡聚体可诱导BV2细胞产生IL-1β,IL-1β通过tau异常磷酸化通路参与的胶质炎症反应可能是PC12细胞损伤的机制之一.
-
不同形式Aβ对老年痴呆细胞模型中炎性因子和神经型尼古丁乙酰胆碱受体表达的影响
目的 研究Aβ寡聚体(Amyloid-beta oligomers,Aβoligomers,AβOs)在阿尔茨海默氏病(Alzheimer Disease,AD)患者中的表达情况,用不同聚集形式的Aβ处理拟老年痴呆细胞模型中肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosjs factor-α,TNF-α)、炎性趋化因子单核细胞趋化蛋白1(Monocyte chemoattractant protein 1,MCP-1/CCL-2),巨噬细胞炎性蛋白-1α(Macrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α/CCL-3)及神经型尼古丁乙酰胆碱受体(Neuronal nicotinic acetylcholine receptors,nAChRs)的表达.探讨炎性因子及nAChRs与Aβ寡聚体在阿尔茨海默氏病发病机制中的作用.方法 应用免疫组织化学方法检测AD患者(海马结构、颞叶及额叶皮质)Aβ寡聚体的表达.Elisa检测拟老年痴呆细胞模型中各组细胞TNF-α、MCP-1、MIP-lα的表达.Western blotting检测拟老年痴呆细胞模型中各组细胞α3、α7nAChRs的表达.结果 AβOs主要在神经细胞内表达,齿状回颗粒细胞、海马CA1-CA4锥体细胞及内嗅区皮质各层神经元胞体及突起内均见棕黄色粒状阳性表达,此外,小血管壁也见AβOs阳性表达.与老龄对照者相比,AD患者海马各区锥体细胞及内嗅区皮质各层神经元AβOs表达明显增强,半定量分析显示平均灰度值显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).采用1mol/L浓度的Aβ1-42单体、纤丝体及寡聚体处理SH-SY5Y细胞48h后与对照组相比,Aβ寡聚体处理组α3、α7nAChRs蛋白表达水平明显降低,炎性因子明显升高(P＜0.05).结论 Aβ寡聚体能升高TNF-α、MCP-I、MIP-Iα,加速Aβ沉积,形成恶性循环的慢性炎症过程,降低神经型尼古丁乙酰胆碱受体α3、α7nAChRs的表达,说明AD发病机制中可溶性、呈寡聚状态的AβOs可能是引起AD神经元功能失调的主要神经毒性形式.
关键词： 阿尔茨海默氏病 β-淀粉样蛋白 Aβ寡聚体 炎性因子 神经型尼古丁乙酰胆碱受体 -
Aβ聚集结构变化的研究进展
β－淀粉样蛋白（β－amyloid protein ，Aβ）在脑内的异常聚集在阿尔茨海默病（Alzheimer disease ，AD）的发生、发展中扮演着重要的角色。AD患者脑内Aβ代谢失衡，过量的Aβ蛋白会自发形成聚集体，引起神经细胞功能障碍、死亡，终导致痴呆。目前研究显示Aβ聚集体主要为寡聚体，原纤维及纤维3种聚集形式，这3种聚集形式的构象不尽相同，对神经细胞造成的损伤方式也有所不同。进一步了解Aβ聚集体的分子结构，有助于对Aβ致病分子机制的认识，为以Aβ为靶点的AD抑制剂开发提供理论基础，本文针对近关于Aβ聚集体分子结构的研究的前沿进展作一综述。
-
Aβ寡聚体与阿尔采末病及其靶点药物研究进展
Aβ在阿尔采末病(AD)中起着重要的作用,寡聚化的Aβ分子被认为是AD发病的原发性因子,能够通过不同的机制发挥神经毒性作用,引发记忆损伤和神经元丢失,以Aβ为作用靶点的药物开发和应用也已初露端倪.该文对Aβ寡聚体在AD中的毒性作用和以Aβ为作用靶点的药物开发现状作一综述.
-
海风藤提取物对Aβ寡聚体激活的小胶质细胞释放炎性因子的抑制作用
目的 探讨Aβ寡聚体(Aβo)激活小胶质细胞释放相关炎性因子的作用及海风藤提取物对该过程的影响.方法 取Wistar乳鼠的大脑皮层,进行小胶质细胞原代培养、分离、纯化并鉴定；采用醇提取法制备海风藤提取物,将提取物与DMSO按4:1混合后加生理盐水并用0.22 μm微孔滤膜过滤；将纯化后的小胶质细胞按相同密度种植于48孔板,分为空白对照组、Aβo组、Aβo+海风藤提取物组和Aβo+ DMSO组；采用酶联免疫吸附法(ELISA)分别测定培养基上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的浓度.结果 与空白组对照相比,经Aβo处理的小胶质细胞产生的炎性因子明显增加；Aβo+海风藤提取物组的炎性因子浓度低于Aβo组(P＜0.05).结论 Aβo能激活小胶质细胞并导致其释放大量炎性因子,而海风藤醇提取物能抑制该过程中炎性因子的释放.
-
Aβ寡聚体与阿尔茨海默病的研究进展
阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是老年性痴呆的主要类型,老年斑和神经原纤维缠结是AD的主要病理特征.随着近年来对AD研究的深入,越来越多的证据显示Aβ可能是AD发生的原发性病理因子,Aβ寡聚体比Aβ纤维具有更大的神经毒性.由于Aβ产生和清除之间的平衡逐渐改变,聚集态的Aβ累积引发连串的复杂反应,终导致神经元死亡和认知功能障碍.结合近年来的研究成果,综述了Aβ寡聚体(Aβ-derived diffusible ligands,ADDLs)和阿尔茨海默病新的研究进展.
-
原子力显微镜在Alzheimer病发病机制研究中的应用
原子力显微镜(AFM)是一种新型的纳米显微技术,具有标本制备简单、分辨率高等优点,并能够在生理条件下对生物样品进行观察,成为神经生物学研究的有力工具.β淀粉样蛋白(Aβ)溶解性的转变在Alzheimer病发病机制中起重要作用.国内外大量研究表明,AFM已成功地应用于Aβ纤维化各阶段的研究中,从而使药物治疗干预Aβ纤维化成为可能.我们综述了AFM的原理及其在生物结构研究中的技术要点,举例说明了它在Alzheimer病(AD)发病机制,尤其是在Aβ及Aβ寡聚体研究中的作用.
关键词： Alzheimer病 原子力显微镜 β-淀粉样蛋白 Aβ寡聚体 -
洛伐他汀对抗AβOs引起的SH-SY5Y细胞毒性作用
目的:观察洛伐他汀对抗Aβ寡聚体(AβOs)引起的SH-SY5Y细胞毒性作用.方法:生长至80％～90％并用无血清培养基培养12 h的SH-SY5Y细胞分为对照组、洛伐他汀处理组(0.1μmol/L洛伐他汀处理24h)、AβOs处理组(0.5μmol/L AβOs处理48 h)和洛伐他汀加AβOs处理组(0.1μmol/L洛伐他汀处理24h,再加入0.5μmol/L AβOs继续处理48 h),采用CCK-8法检测各组细胞活性,使用相应的试剂盒检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)含量.结果:0.5 μmol/L AβOs处理SH-SY5Y细胞48 h后,与对照组相比,SH-SY5Y细胞活性、SOD及GSH-Px活性显著降低,MDA含量明显增加(P＜0.05);在0.5 μmol/L ApOs处理SH-SY5Y细胞前,预先用0.1μmol/L洛伐他汀处理细胞24 h,可减弱AβOs引起的细胞活性、SOD和GSH-Px活性及MDA含量的改变(P＜0.05).结论:洛伐他汀可对抗AβOs引起的SH-SY5Y细胞毒性作用,其保护机制可能与抑制氧化应激有关.
-
Aβ1-42寡聚体与阿尔茨海默病研究综述
阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）是一种多发于老年人的神经系统退行性疾病。临床上表现为记忆障碍、认知障碍、丧失语言能力、丧失认知能力、不能学习新事物及人格和行为等改变的全面性痴呆。在病理方面以神经细胞内的神经元纤维缠结（ neurofibrillary tangles，NFTs ）、神经细胞间的神经炎性斑（ senile plaque，SP）、神经细胞丧失与突触改变为特征。目前，其发病机制仍不甚明了，大多认为是遗传、老化和环境等多种因素的共同结果。其中以β-淀粉样蛋白（ amy-loid β-protein ，Aβ）级联假说受关注，该假说认为大量的β-淀粉样蛋白在脑内沉积形成老年斑是AD具特征的病理改变，与 AD 的认知功能障碍和病理变化有关。随着世界人口老龄化的加剧，其发病率逐年增高，成功建立AD模型无疑是研究该疾病的关键步骤，故选用合适的诱导剂更加重要。 Aβ主要有 Aβ1-40、Aβ1-42、Aβ1-433种类型，其中Aβ1-42寡聚体对神经细胞产生的毒性作用较强，更能促使Aβ纤维的聚集，形成老年斑，也更能模拟AD的发展过程。
