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proBDNF-p75NTR通路抑制C6细胞增殖
目的 proBDNF和成熟BDNF分别通过p75NTR受体和TrkB受体介导相反的生物学作用.微环境变化时,proBD-NF-p75信号通路和成熟BDNF-TrkB通路不平衡可能对细胞生长和增殖产生不同影响.本研究拟探讨不同培养条件下,C6细胞表达proBDNF及其受体p75NTR的变化,对C6细胞生长和增殖的作用.方法 用细胞免疫荧光双标和Western blot方法,检测在含不同浓度血清培养液中培养的C6细胞proBDNF及其受体p75NTR表达.分别用特异性的proBDNF抗体阻断内源性proBDNF,用p75NTR-ECD-Fc阻断p75NTR,用MTT法和Brdu法分别测定内源性proBDNF及其受体p75 NTR对C6细胞生长和增殖的作用.结果 proBDNF和p75NTR在无血清培养的C6细胞中共表达明显上调,加入proBDNF抗体(10μg/ml)处理细胞后,C6细胞的生长和增殖明显增加.p75 NTR的作用取决于其在不同环境下结合的配体.结论 proBDNF-p75NTR通路起到平衡成熟BDNF-TrkB通路的作用,一定环境下,二者平衡打破,可能对细胞生长或增殖产生不同影响.
关键词： 脑源性神经营养因子前体 p75神经营养因子受体 C6细胞 -
脑源性神经营养因子前体对阿尔茨海默病大鼠海马齿状回神经元增殖和分化的影响
目的 观察脑源性神经营养因子前体(pmBDNF)对阿尔茨海默病(AD)大鼠模型海马齿状回神经元增殖和分化的影响.方法 成功建立AD大鼠模型后,采用微量渗透泵连续14 d向右侧海马注射proBDNF、羊抗proBDNF抗体或正常羊血清,浓度均为1μg/μl,速度0.5μ/h,同时给予5-溴-2'-脱氧尿核苷(BrdU)50 ms/kg·体重腹腔注射,每日 2次,持续14 d.免疫组化染色并统计新生细胞数量;应用BrdU与微管相关蛋白Doublecortin抗体/抗胶质纤维酸性蛋白抗体免疫三标记法,鉴别BrdU阳性细胞的细胞类型.结果 proBDNF组BrdU阳性细胞数明显低于正常羊血清对照组,而抗proBDNF组则明显高于对照组.proBDNF组、抗proBDNF组以及对照组中各细胞类型的百分比差异无统计学意义.结论 proBDNF能够抑制AD大鼠海马齿状回的细胞增殖,而采用特异性抗proBDNF以拮抗内源性pwBDNF能够促进海马齿状回的细胞增殖,这一功能对于AD的治疗可能有重要的意义.
关键词： 脑源性神经营养因子前体 阿尔茨海默病 海马齿状回 细胞增殖 细胞分化 -
长期运动对幼龄大鼠下丘脑脑源性神经营养因子表达的影响
目的:探讨下丘脑脑源性神经营养因子(BDNF)与幼龄大鼠长期运动中摄食调节活动的关系.方法:3周龄断乳SD大鼠随机分为运动组(E)和对照组(C),运动组进行9周的游泳运动(每天1次,每周6d),运动时间由开始每次30min逐渐增加到每次90 min.12周龄时用ELISA法测试血清BDNF含量,RT-PCR和Westemblot方法检测下丘脑中BDNF mRNA、pro-BDNF和BDFN蛋白表达水平.结果:与C组比较,E组大鼠在运动第1周、第9周以及整个实验期间摄食量无变化.12周龄时与C组相比,E组血清BDNF含量和下丘脑BDNF mRNA表达水平无变化,但下丘脑pro-BDNF和BDNF蛋白表达水平升高(P＜0.05).结论:长期运动使幼龄大鼠下丘脑BDNF和pro-BDNF蛋白表达水平同时升高.
关键词： 运动 下丘脑 脑源性神经营养因子 脑源性神经营养因子前体 -
脊髓损伤新生小鼠脑源性神经营养因子前体对少突胶质细胞存活及生长的影响
目的 研究脊髓损伤新生小鼠脑源性神经营养因子前体对少突胶质细胞存活及生长的影响.方法 分离新生小鼠大脑皮层少突胶质细胞前体细胞,进行体外原代培养;采用WB法观察脑源性神经营养因子前体及其受体分拣蛋白与神经营养素受体的表达水平.将浓度为1 μg·L-1脑源性神经营养因子前体设置为A组,10 μg·L-1脑源性神经营养因子前体设置为B组,100 μg·L-1脑源性神经营养因子前体设置为C组,空白对照组为100 μg·L-1牛血清白蛋白;每组设置6个平行副孔.采用β-tublin和结晶紫进行染色,观察少突胶质细胞前体细胞的细胞形态,评估不同浓度的脑源性神经营养因子前体对少突胶质细胞前体细胞的生产情况的影响.结果 脑源性神经营养因子前体及其受体分拣蛋白与神经营养素受体在少突胶质细胞前体细胞中的表达均呈现阳性;A组、B组、C组中的少突胶质细胞前体细胞的数量显著低于对照组,且随着浓度的增加,少突胶质细胞前体细胞数量逐渐下降,各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,A组、B组、C组少突胶质细胞前体细胞突起显著减少,且面积显著缩小,各组间比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 少突胶质细胞前体细胞可以内源性的表达脑源性神经营养因子前体F以及其受体,而脑源性神经营养因子前体的浓度对少突胶质细胞前体细胞的生长和存活具有显著的抑制作用,且这一作用机制可能与神经营养素受体-分拣蛋白通路相关.
关键词： 新生小鼠 脊髓损伤 脑源性神经营养因子 脑源性神经营养因子前体 少突胶质细胞 -
proBDNF对培养鼠小脑颗粒细胞增殖和凋亡的影响
目的 观察脑源性神经营养因子前体(proBDNF)对培养的小鼠小脑颗粒细胞(CGCs)的增殖和凋亡的影响,探讨p75神经营养因子受体(p75NTR)和VPS10P-结构域家族成员sortilin的介导机制.方法 采用出生后7 d(P7)的129SV转基因小鼠(p75 NTR+/+和p75 NTR-/-)进行CGCs的原代培养.分为BSA组(10 ng/mL)、proBDNF干预组(10 ng/mL)和proBDNF(10 ng/mL)+ sortilin-Fc(20 ng/mL)干预组.免疫荧光染色法观察p75 NTR和sortilin在培养细胞的表达,BrdU标记阳性增殖细胞以及TUNEL法检测凋亡细胞.结果 成功培养出高纯度的原代小脑颗粒细胞.免疫荧光显示p75 NTR和sortilin共同表达于野生型小鼠培养的小脑神经元胞膜和突起上.给予proBDNF干预后,p75NTR+/+型CGCs的BrdU阳性细胞比例较对照组明显减少(P＜0.01),而TUNEL阳性细胞比例较对照组明显增加(P＜0.01),且这两种效应都可被sortilin-Fc竞争性抑制并中和;p75 NTR-/-型CGCs中各组之间BrdU阳性细胞以及TUNEL阳性细胞比例均无显著性差异(P＞0.05).结论 proBDNF可能通过与p75 NTR、sortilin结合形成功能三聚体抑制神经细胞的增殖、促进细胞凋亡,proBDNF具有神经毒性作用.
关键词： 脑源性神经营养因子前体 小脑颗粒细胞 增殖 凋亡 -
AAV-proBDNF对阿尔茨海默病鼠海马DCX阳性细胞数及PSD-95表达的影响
目的 探讨侧脑室注射携带抗裂解脑源性神经营养因子前体(proBDNF)基因的腺相关病毒基因整合载体(AAV-proBDNF)对阿尔茨海默病小鼠(AD鼠)海马神经形成与生长的影响.方法 取5 月龄APP/PS1转基因AD鼠15只,采用抛硬币法随机分为正常对照组(n=5)、空载体对照组(n=5)和AAV-proBDNF组(n=5),AAV-proBDNF组右侧侧脑室注射AAV-proBDNF(4 μL,2×1013 v.g./mL),空载体对照组右侧侧脑室注射等量空病毒载体,正常对照组右侧侧脑室注射生理盐水(4μL).于侧脑室注射后4周采用ELISA检测海马proBDNF含量,免疫组化检测海马齿状回DCX阳性细胞数,Western blot检测海马突触后致密物-95(PSD-95)表达.结果 侧脑室注射后4周,AAV-proBDNF组脑内proBDNF表达水平较正常对照组明显增加,且显著高于空载体对照组,差异均具有统计学意义(P＜0.05);AAV-proBDNF组海马DCX阳性细胞数为(202.46±24.27),明显低于正常对照组(382.26 ±37.58,P＜0.05)和空载体对照组(365.48±32.68,P＜0.05);AAV-proBDNF组海马PSD-95相对含量为(0.62±0.05),明显低于正常对照组(0.82±0.02,P＜0.05)和空载体对照组(0.86±0.07,P＜0.05).结论 侧脑室注射AAV-proBDNF能够在AD鼠脑内成功表达proBDNF,并可降低AD鼠海马区新生神经元数量及突触可塑性.
关键词： 脑源性神经营养因子前体 阿尔茨海默病 突触后致密物-95 -
不同形态脑源性神经营养因子与阿尔茨海默病关系研究进展
阿尔茨海默病(AD)是一种常见的中枢神经系统变性疾病,是老年痴呆人群的主要病因.脑源性神经营养因子(BDNF)是神经营养蛋白家族的重要成员.BDNF及其前体蛋白脑源性神经营养因子前体(proBDNF)、脑源性神经营养因子前肽(pBDNF)在AD发病机制中起着重要作用.现对BDNF、proBDNF及pBDN F的表达、功能及其与AD之间的关系进行综述如下.
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神经营养因子假说与抑郁症发病机制的研究进展
目前关于抑郁症发病机制的神经营养因子假说研究尚不明确,当前研究多聚焦于脑源性神经营养因子(BDNF)及其前体(proBDNF)和成熟体(mBDNF)在抑郁症中的作用.多个研究显示抑郁症患者proBDNF蛋白水平升高,而mBDNF蛋白水平降低.随着对神经营养因子假说研究的深入,有研究发现组织型纤溶酶原激活剂(tPA)可通过促使proBDNF向mBDNF转化而缓解抑郁症状,纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)可抑制tPA的表达,PAI-1在抑郁症患者中的表达增加.本文对BDNF、proBDNF、mBDNF、tPA及PAI-1与抑郁症之间的关系进行综述,以期为抑郁症的发生机制及诊疗提供参考.
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Pro-BDNF及其受体在实验性变态反应性脑脊髓炎小鼠中枢神经系统的表达变化
目的:探讨实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)的小鼠模型中枢神经系统中脑源神经营养因子前体(pro-BDNF)及其受体(Sortilin)的表达变化.方法:小鼠随机分为正常对照组和实验组,实验组小鼠上、下背部左右两侧及左、右侧尾根部分2次予以MOG35-55抗原多肽进行免疫,建立EAE模型.EAE组又分为发病前期(9 d)、发病初期(17 d)、发病高峰期(25 d)和发病缓解期(32 d)四组.采用免疫组织化学和Western Blot方法检测pro-BDNF及Sortilin在中枢神经系统(CNS)的表达变化.结果:pro-BDNF在EAE模型小鼠的皮质、胼胝体、海马、脊髓的表达与对照组相比,第9d、第17 d出现下降,在发病高峰期即第25 d表达增加,在发病缓解期即第32 d时表达恢复至正常水平.Sortilin在EAE模型小鼠的皮质、胼胝体、海马、脊髓的表达与对照组相比,第9d出现下降,在发病高峰期即第25 d表达增加,其他时间点与对照组相比差异无显著性.结论:pro-BDNF与Sortilin在EAE小鼠模型中枢神经系统的表达与其病情密切相关,提示它们可能参与EAE病理的发生发展.
关键词： 脑源性神经营养因子前体 实验性变态反应性脑脊髓炎 多发性硬化 小鼠 -
BDNF前体蛋白在成年恒河猴中枢神经系统中的分布
采用免疫组织化学方法探讨脑源性神经营养因子前体蛋白(proBDNF)在成年恒河猴中枢神经系统(CNS)内的定位分布.结果显示:不同染色强度的proBDNF免疫阳性反应产物广泛分布于大脑皮质、海马、丘脑、小脑、中脑、脑桥、延髓和脊髓.神经元和胶质细胞的核染色明显,胞浆淡染,突起无染色.本研究结果表明在CNS的各个部位均存在proBDNF,提示proBDNF在猴的CNS广泛发挥作用.通过与文献报道的proBDNF在大鼠CNS的分布比较,发现proBDNF在不同物种之间的表达模式和作用可能存在差异;而与BDNF在成年猴脑中的分布进行比较,发现proBDNF在猴小脑的Purkinje细胞层及动眼神经核单独表达,提示proBDNF在这些部位可能发挥重要作用.本研究结果为探讨proBDNF在成年猴的分布及作用提供了重要的形态学资料.
关键词： 脑源性神经营养因子前体 免疫组织化学 中枢神经系统 猴 -
mBDNF、proBDNF水平及两者比值对伴与不伴抑郁症状的首发精神分裂症病人的诊断价值
目的 通过比较伴与不伴抑郁症状的精神分裂症病人血清中脑源性神经营养因子(mBDNF)、脑源性神经营养因子前体(proBDNF)水平及两者比值差异,探讨三者对伴与不伴抑郁症状的首发精神分裂症病人的诊断价值.方法 采用ELISA法测定30例伴抑郁症状的精神分裂症病人(抑郁组)、30例不伴抑郁症状的精神分裂症病人(非抑郁组)及30例健康对照者(对照组)血清中mBDNF、proBDNF含量,并计算mBDNF/proBDNF(M/P)比值.结果 抑郁组和非抑郁组病人血清中mBDNF水平显著低于对照组(P＜0.01),抑郁组mBDNF水平明显低于非抑郁组,差异有统计学意义(P＜0.05);三组proBDNF水平无统计学差异(P＞0.05);抑郁组M/P值低于非抑郁组及对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);非抑郁组M/P值与对照组比较差异无显著性(P＞0.05).结论 检测血清中mBDNF水平和M/P比值有助于鉴别伴与不伴抑郁症状的精神分裂症病人.
关键词： 精神分裂症 抑郁 脑源性神经营养因子 脑源性神经营养因子前体
