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Apaf-1、Caspase-9及凋亡体调节的研究进展
细胞凋亡(apoptosis),早是由kerr[1]等人于1972年首次提出,指生物体内绝大多数细胞在一定发育阶段由基因控制的、自主的、有序的死亡过程,它对于自身稳定的维持、组织的进化、器官的发育等起着重要的作用.细胞凋亡可能不是细胞死亡的唯一形式,但它却是目前由在结构、生化及基因水平已知非常详细的蛋白质构成的死亡通路唯一形式.细胞凋亡是一种古老的范式,可以追溯到早的多细胞动物,但并不存在于植物、简单真核生物和微生物[2].细胞凋亡机制主要有外源性和内源性途径两种.
关键词： 凋亡蛋白酶活化因子-1 细胞凋亡蛋白酶-9 细胞凋亡 凋亡复合体 -
活血清下中药对大鼠缺血-再灌注小肠凋亡蛋白酶活化因子-1表达的影响
目的:利用小肠缺血-再灌注动物模型,观察中药对小肠黏膜细胞凋亡的干预作用及对肠屏障的影响.方法:选用健康Wistar大鼠,随机分为正常对照组、模型组、承气合剂治疗组、复方丹参合剂治疗组、活血承气合剂(承气合剂+复方丹参合剂)治疗组.对动物模型再灌注6 h、24 h、72 h时血浆内毒素、小肠黏膜上皮细胞凋亡情况、凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)的表达分别进行检测和观察.结果:与模型组比较,各治疗组对于肠黏膜上皮细胞凋亡均有不同程度的抑制作用,其中活血承气治疗组各观察指标降低明显(P<0.01),效果佳.结论:小肠缺血-再灌注早期肠黏膜上皮细胞凋亡是造成血中内毒素明显升高、肠屏障功能损伤的主要原因之一.活血清下法可以通过抑制Apaf-1表达来减弱肠黏膜上皮细胞的凋亡,从而达到降低内毒素水平,保护肠屏障功能的作用.
关键词： 活血清下法 细胞凋亡 凋亡蛋白酶活化因子-1 肠屏障 -
凋亡蛋白酶活化因子-1与细胞凋亡
细胞凋亡(apoptosis)即细胞编程性死亡(programmed cell death),它是一种高度有序的细胞死亡.凋亡不仅在多细胞动物的生长发育、形态构建与维护中扮演重要角色,而且在外伤后细胞的演变过程中起关键作用.越来越多的证据表明,外伤所致的脑损伤后,神经细胞的死亡有两种形式,即细胞的直接损伤坏死和迟发性的细胞死亡即凋亡[1,2].1977年,Yang的研究小组和Kluck的研究小组同时证明Bcl-2通过阻止细胞色素C,从线粒体上释放发挥其抑制凋亡的作用,Zou等在此基础上,分离纯化得到了凋亡蛋白酶活化因子-1(apoptotic protease-activating factor-1,Apaf-1)这一促进凋亡的重要的因子之一,并发现其中CED-4的同源物[3].本文对Apaf-1和细胞凋亡的关系综述如下.
关键词： 细胞凋亡 凋亡蛋白酶活化因子-1 -
X连锁凋亡抑制蛋白和线粒体第二激活因子在锰诱导 大鼠生精细胞凋亡蛋白酶表达中的调节作用
目的:研究氯化锰导致的大鼠生精细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)及凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)表达中X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和线粒体第二激活因子(Smac)的调节机制,探讨锰导致的雄性不育机制.方法:雄性SD大鼠随机分为对照组、低剂量(15 mg/kg MnCl2)和高剂量(30 mg/kg MnCl2)组,腹腔注射MnCl24周和6周,免疫组织化学检测生精细胞caspase-9、Apaf-1、XIAP和Smac表达.结果:与对照组相比较,各组生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达均显著升高,XIAP表达降低.同时间的高剂量组与低剂量组比较,同剂量的6周组与4周组比较,生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达均显著升高,XIAP表达降低.各组caspase-9与Apaf-1表达呈正相关,XIAP与Smac表达呈负相关.结论:锰可促进生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达,抑制XIAP表达,导致细胞凋亡,产生雄性生殖毒性效应.
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染锰大鼠生精细胞凋亡中caspase-3 mRNA、凋亡蛋白酶活化因子-1及多聚ADP核糖聚合酶的表达变化
目的:研究染锰诱导的大鼠生精细胞凋亡过程中,天冬氨酸特异性半胱氨酸酶-3 (caspase-3) mRNA和凋亡蛋白酶活化因子-1 (Apaf-1)、多聚ADP核糖聚合酶(PARP)的表达及其关系,探讨它们在生精细胞凋亡过程中的作用.方法:雄性SD大鼠,设立空白对照组、低剂量(15 mg/kg MnCl2)和高剂量(30 mg/kg MnCl2)组.实验组分别染锰4周和6周,空白对照组给予等容生理盐水,给药途径均为腹腔注射,TUNEL法检测生精细胞凋亡,原位杂交法和免疫组织化学法检测生精细胞caspase-3 mRNA、Apaf-1和PARP的表达.结果:与空白对照组比较,各染锰组生精细胞凋亡指数(AI)和caspase-3mRNA阳性细胞率均显著升高,Apaf-1和PARP阳性细胞率均显著降低.染锰剂量相同,6周与4周组比较,以及染锰时间相同,高剂量组与低剂量组比较,生精细胞A1和caspase-3 mRNA阳性细胞率均显著升高,Apabl和PARP阳性细胞率均显著降低.各组大鼠生精细胞AI与caspase-3 mRNA阳性细胞率呈正相关,与Apaf-1和PARP阳性细胞率呈负相关.结论:锰可影响大鼠生精细胞caspase-3 mRNA表达,促进Apaf-1和PARP分解,导致生精细胞凋亡,产生生殖毒性效应.
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Apaf-1和 AEG-1在结肠癌中的表达及意义
目的：检测结肠癌组织中凋亡蛋白酶活化因子-1（ Apaf-1）和星形细胞上调基因-1（AEG-1）的表达情况，并探讨其与临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学法检测63例结肠癌和30例癌旁正常组织中 Apaf-1和 AEG-1的蛋白表达，分析其与结肠癌临床特征的关系。结果结肠癌组织中 Apaf-1和 AEG-1表达阳性率分别为23.81％（15/63）和68.25％（43/63），正常结肠组织中表达阳性率分别为76.67％（23/30）和26.67％（8/30）。AEG-1在癌组织中表达高于癌旁正常组织（χ2＝14.192，P ＝0.000），而 Apaf-1的表达明显低于癌旁正常组织（χ2＝23.497，P ＝0.000），两者表达呈负相关（r ＝-0.339，P ＝0.007）。AEG-1和 Apaf-1的表达与结肠癌组织分化程度（χ2＝4.643，P ＝0.031；χ2＝12.034，P ＝0.001）和临床分期（χ2＝6.628，P ＝0.010；χ2＝8.246，P ＝0.004）相关，而与患者年龄（χ2＝1.462，P ＝0.227；χ2＝2.401，P ＝0.121）及肿瘤大小（χ2＝0.333，P ＝0.564；χ2＝0.590，P ＝0.442）无相关性。结论 AEG-1在结肠癌中表达明显上调，而 Apaf-1表达下调，二者呈负相关。Apaf-1和AEG-1可能与结肠癌的发生、发展密切相关，联合检测二者可能对结肠癌的预后判断更具价值。
关键词： 结肠肿瘤 星形细胞上调基因-1 凋亡蛋白酶活化因子-1 -
肠缺血-再灌注大鼠模型肠黏膜上皮细胞凋亡的观察
健康Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组(Cont.)及缺血-再灌注6h模型组(M1)、24h模型组(M2)、72h模型组(M3),每组10只,对血浆内毒素、小肠黏膜上皮细胞凋亡情况、Apaf-1的表达以及Bcl-2的表达分别进行检测和观察.与Cont.组比较,各模型组血浆内毒素水平、凋亡指数、Apaf-1阳性细胞表达率明显增高(P＜0.05),并随再灌注时间延长逐渐下降;而各模型组Bcl-2阳性细胞表达率明显低于Cont.组(P＜0.05),并随再灌注时间延长逐渐上升.认为在缺血-再灌注早期,通过Apaf-1和Bcl-2等凋亡因子作用肠黏膜上皮细胞产生大量病理性凋亡,造成肠道机械屏障的破坏,使肠道细菌和内毒素发生易位.
关键词： 肠缺血-再灌注 细胞凋亡 凋亡蛋白酶活化因子-1 B淋巴细胞瘤基因-2 -
前列腺素E1对大鼠脑缺血再灌注损伤后Apaf-1及TLR4表达的影响
目的 探讨前列腺素E1(prostaglandin E1,PGE1)对大鼠脑缺血再灌注损伤后凋亡蛋白酶活化因子-1(apoptotic protease activating factor-1,Apaf-1)及Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)表达的影响.方法 选取健康成年雄性Wistar大鼠32只,随机分为4组:假手术组、脑缺血再灌模型组、PGE1高、低剂量组(24 μg·kg-1,12 μg·kg-1);利用双侧颈总动脉结扎法建立大鼠全脑缺血再灌注模型,采用免疫组化染色方法检测海马和小脑Apaf-1及TLR4的表达.结果 缺血20 min,再灌注24 h后,脑缺血再灌模型组大鼠海马和小脑Apaf-1[海马(11.83±2.26)个;小脑(5.80±1.30)个]及TLR4[海马(16.90±2.86)个;小脑(12.90±2.66)个]的阳性细胞数均高于假手术组[Apaf-1:海马(0.87±0.78)个,小脑(0.67±0.43)个;TLR4:海马(2.43±1.17)个,小脑(1.97±1.03)个](P＜0.05);与脑缺血再灌模型组比较,PGE1处理各组海马和小脑Apaf-1[海马:低剂量组(9.83±2.12)个,高剂量组(5.50±1.17)个;小脑:低剂量组(4.87±1.38)个,高剂量组(2.73±1.17)个]及TLR4[海马:低剂量组(11.53±2.40)个,高剂量组(9.13±2.54)个;小脑:低剂量组(9.07±2.07)个,高剂量组(4.47±1.68)个]的阳性细胞数均低于脑缺血再灌注模型组(P＜ 0.05).结论 PGE1具有抑制脑缺血再灌注损伤大鼠海马和小脑Apaf-1及TLR4表达作用.
关键词： 前列腺素E1 大鼠 脑缺血再灌注 凋亡蛋白酶活化因子-1 Toll样受体4 -
凋亡蛋白酶活化因子-1基因甲基化在骨肉瘤细胞株中的作用
目的 检测骨肉瘤细胞株中凋亡蛋白酶活化因子(APAF)-1基因启动子区域甲基化状态及该基因mRNA表达,观察APAF-1基因对骨肉瘤形成的影响.方法 以骨肉瘤细胞株MG63和Hs888T为研究对象,提取DNA,经重亚硫酸钠处理后,采用限制性酶切图谱分析(COBRA)检测APAF-1基因CpG岛的甲基化情况,使用不同浓度(0、1×10~(-7)、3×10~(-7)mol/L)的DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理骨肉瘤细胞株4、10、20d,采用实时定量聚合酶链反应(QT-PCR)检测Apaf-1 mRNA表达水平的变化.结果 在Hs888T细胞株中APAF-1基因存在CpG岛甲基化并且随着5-Aza-CdR浓度的增加Apaf-1 mRNA表达水平也在增加.3×10~(-7)mol/L的5-Aza-CdR处理Hs888T细胞株20 d与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 Hs888T细胞株中APAF-1基因异常表达与APAF-1基因启动子区域CpG岛甲基化有关,提示APAF-1基因甲基化可能参与某些骨肉瘤的发生.
关键词： 骨肉瘤 凋亡蛋白酶活化因子-1 甲基化 -
Caspase-9与Apaf-1在锰中毒大鼠生精细胞表达及XIAP与Smac的调控作用
目的 研究氯化锰导致的大鼠生精细胞caspase-9及Apaf-1表达中XIAP和Smac的调节机制,探讨锰导致的雄性不育机制.方法 雄性SD大鼠随机分为对照组,低剂量(15 mg/kg MnCl2)和高剂量(30 mg/kg MnCl2)组,腹腔注射MnCl2 4周和6周,免疫组织化学检测生精细胞caspase-9、Apaf-1、XIAP和Smac表达.结果 各组生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达均显著升高,XIAP表达降低;同时间的高剂量组与低剂量组比较,同剂量的6周组与4周组比较,生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达均显著升高,XIAP表达降低;各组caspase-9与Apaf-1表达正相关,XIAP与Smac表达成负相关.结论 锰可促进生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达,抑制XIAP表达,导致细胞凋亡,产生雄性生殖毒性效应.
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亚低温对大鼠弥漫性脑损伤后海马CA1区Apaf-1蛋白表达和学习记忆功能的影响
目的 探讨亚低温对大鼠弥漫性脑损伤(DBI)后海马CA1区Apaf-1蛋白表达及大鼠学习记忆功能的影响.方法 选择雄性Wistar大鼠48只,按照完全随机数字表法分为正常组、假手术组、脑损伤组和亚低温组,每组12只.正常组不做任何处理;假手术组仅给予麻醉及头皮切开、缝合,但不致伤;脑损伤组和亚低温组根据Marmarou方法制作DBI模型,亚低温组大鼠损伤后用冰毯及冰袋物理降温,使大鼠肛温在15 min内控制至30.0～31.0℃,维持2 h.14 d后比较各组大鼠Morris水迷宫实验成绩,同时比较各组大鼠海马CA1区Apaf-1蛋白的表达.结果 正常组、假手术组、脑损伤组和亚低温组大鼠搜索安全岛的次数分别为(10.1±1.9)次、(10.3±1.8)次、(3.8±2.3)次和(6.9±1.1)次,差异有统计学意义(P<0.05).脑损伤组及亚低温组海马CA1区Apaf-1蛋白含量高于正常组及假手术组,其中脑损伤组Apaf-1蛋白含量明显高于亚低温组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 亚低温可能通过抑制神经细胞凋亡对脑组织产生保护作用,从而改善大鼠脑损伤后学习记忆障碍.
关键词： 颅脑损伤 海马 凋亡蛋白酶活化因子-1 亚低温 -
Apaf －1、Mfn2、Caspase －10在慢性阻塞性肺疾病小鼠模型肺组织中的表达
目的：观察小鼠慢性阻塞性肺疾病（ COPD）动物模型肺组织中的凋亡蛋白：凋亡蛋白酶活化因子－1（Apaf－1）、线粒体融合蛋白2（Mfn2）、半胱氨酸蛋白酶－10（Caspase－10）的表达，探讨COPD细胞凋亡的机制。方法健康SPF级、6周龄C57BL／6J雄性小鼠30只，适应性饲养2周后，按照随机数字表法分为两组：COPD组采用自制香烟烟雾暴露箱行香烟（含尼古丁0.9 mg，焦油12 mg）烟雾暴露；健康对照组放入另一相同的烟雾发生器中，不燃烧香烟，自由呼吸新鲜空气，自由饮食饮水。两组小鼠均于第91天处死。取肺组织行常规石蜡包埋，运用HE染色、电镜对肺组织形态学进行观察；用免疫组化检测两组小鼠肺组织Apaf－1、Mfn2、Caspase－10蛋白表达水平；用原位检测法测定两组小鼠肺组织内细胞凋亡率。结果 COPD组小鼠形态学结果符合COPD临床病理形态学改变，肺功能提示存在气流受限；COPD组凋亡蛋白Apaf－1、Mfn2、Caspase－10均较健康对照组升高，差异有统计学意义（ P＜0.05）；COPD组肺组织内皮细胞凋亡率较健康对照组升高，差异有统计学意义（ P＜0.05）。结论凋亡蛋白Apaf－1、Mfn2、Caspase－10可能通过多种凋亡途径共同促进了COPD细胞凋亡的发生。
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塞来昔布下调Apaf-1蛋白表达促进大鼠颅脑损伤后学习记忆功能恢复的研究
目的 探讨塞来昔布对大鼠创伤性脑损伤后学习记忆功能和环氧化酶(COX-2)及凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)蛋白表达的影响.方法 将72只成年雄性Wistar大鼠等量分为对照组、假手术组、损伤组和治疗组,术后72 h灌注取脑,应用免疫组化法和Western blot法分别检测COX-2及Apaf-1蛋白表达变化;术前5d和术后72 h采用Morris水迷宫实验观察大鼠学习记忆功能.结果 损伤组COX-2和Apaf-1蛋白表达明显高于其他组,治疗组与损伤组比较蛋白表达均下降(P＜0.05),但仍高于假手术组和对照组(P＜0.05);Morris水迷宫实验中,损伤组逃避潜伏期时间延长为4组之(P＜0.05),治疗组较损伤组时间有所缩短(P＜0.05).结论 COX-2抑制剂塞来昔布可下调COX-2和Apaf-1蛋白表达,抑制炎性反应、细胞凋亡,改善脑损伤后的学习、记忆障碍.
关键词： 脑损伤 环氧化酶-2 凋亡蛋白酶活化因子-1 学习 记忆 -
兔抗凋亡蛋白酶活化因子-1多克隆抗体的制备、纯化与鉴定
1997年,Zou等[1]首次从HeLa细胞胞质内纯化和克隆出凋亡蛋白酶活化因子-1(apoptotie protease activating factor-1,Apaf-1)的cDNA,该蛋白质的相对分子质量(Mr)为130.近来研究发现在细胞色素C和dATP存在的情况下,Apaf-1可聚集成凋亡体(apoptosome)[2],凋亡体负责将半胱天冬酶-9酶原蛋白(pmcaspase-9)裂解成半胱天冬酶-9(easpase-9),以及维持caspase-9的酶活性,进一步激活caspase-3而诱导细胞凋亡[2],因此Apaf-1可被认为是凋亡体的真正核心.
关键词： 凋亡蛋白酶活化因子-1 多克隆抗体
