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基因编码钙指示剂在药物反应性细胞核钙信号实时动态检测中的应用
目的 探讨新型基因编码钙指示剂(genetically-encoded calcium indicators, GeCIs)在药物反应性细胞核钙信号实时动态检测中的应用.方法 将常用的GeCI变体--GCaMP6s用核定位序列(nuclear localization sequence,NLS)标记以用于细胞核钙的检测;同时在其C端与红色荧光蛋白tdTomato融合作为分子内的定量参照.将构建的质粒分别转染至HeLa细胞和U87MG细胞中,利用活细胞共聚焦显微成像技术对核钙信号的实时变化进行动态监测.结果 蕈青霉素(Paxilline)能够引起在40 min连续记录中核钙水平的持续增加,并且增加的动力学模式在不同的细胞系中差异存在统计学意义;同时在药物处理后细胞反应的筛选中显示,青蒿素可以引起细胞核钙浓度的明显改变,其变化的幅度与持续情况与蕈青霉素及过氧化氢的作用有所不同.此外,笔者还发现利用核钙的变化指标可以对细胞在接受应激性刺激后的异质性表现进行统计聚类分析.结论 在非兴奋细胞中,不同药物刺激可以引起细胞核钙离子浓度的升高.
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以BAPTA为基础的荧光钙指示剂
钙信号测定方法包括荧光成像、电生理记录、分子技术等,以及用可穿透细胞测定细胞内钙代谢.在钙信号测定中,荧光钙指示剂是必不可少的.应用荧光钙指示剂研究细胞内钙调节已有20多年的历史.
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EDTA容量法测定钙方法的优化研究
对EDTA测定Ca2+的不同方法进行了实验比较,并从溶液配制、所用指示剂、氢氧化钠加入量等方面进行了深入讨论,完善和优化了EDTA测定Ca2+的实验测定方法.该法适用于锂钙质量比≤1的天然水、地下水和卤水样品中钙的容量法测定.
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测定水中Ca2+含量方法中钙指示剂的改进
在水质分析中,通常需要测定水中的Ca2+、Mg2+含量,在常规容量法测定水中的Ca2+时,若选用紫脲酸铵作指示剂,在滴定到终点时,颜色变化不明显,从而影响滴定终点的判断;若选用饮用天然矿泉水检验方法中的钙试剂作指示剂时[1],则在水中显色极浅,滴定至终点时颜色变化很难观察.本文在传统钙试剂配制基础上作了些改进,可克服上述缺点,滴定至终点时,颜色变化非常明显,测定结果准确、可靠.现报道如下.
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应用Fura-2/AM荧光双波长法研究抑肽酶对血小板活化的保护作用
目的探讨抑肽酶对血小板活化的保护机制.方法用钙荧光指示剂Fura-2/AM负载人洗涤血小板,用荧光双波长分光光度计比值法测定静息血小板胞浆游离钙浓度([Ca2+]i)及凝血酶、抑肽酶对[Ca2+]i的影响.结果在生理胞外Ca2+浓度时,正常人血小板[Ca2+]i静息水平为(151.840±28.719)nmol/L,凝血酶可引起血小板[Ca2+]i的明显增加(P<0.01),抑肽酶呈剂量依赖性地抑制由凝血酶引起的[Ca2+]i的增加(P<0.01).结论抑肽酶的保护血小板机制与其抑制血小板内[Ca2+]i动员等信息传递过程有关.
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KMnO4-钙指示剂-罗丹明B化学发光法测定对乙酰氨基酚的含量
目的 建立快速、准确测定对乙酰氨基酚的流动注射化学发光新方法 .方法 酸性条件下,KMnO4可氧化钙指示剂产生化学发光,罗丹明B对此发光有较强的增敏,对乙酰氨基酚的存在抑制体系发光,基于此结合流动注射技术建立了一种新的测定对乙酰氨基酚含量的化学发光法.结果 在优化的实验条件下,在5.0×10-7-1.0×10-5g/mL范围内,对乙酰氨基酚的质量浓度与化学发光信号的降低值有较好的线性关系,检出限(S/N=3)为7.0×10-8g/mL,对1.0×10-8g/mL对乙酰氨基酚进行11次平行测定,其相对标准偏差为2.2%.结论 本方法 简便、快速、准确,用于片剂中对乙酰氨基酚含星的测定,得到较满意的结果 .