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基于代谢组学的心肌缺血药理学研究进展
心肌缺血会导致心肌缺氧,心脏功能减弱,是危害人类健康的头号大敌.心肌缺血时由于供氧供血不足,机体内相关代谢物也会发生变化.而代谢组学作为一门可系统性分析生物体因病理生理改变或外源性干预所引起代谢物差异的学科,已渐渐被应用到心肌缺血的相关研究中.笔者综合近几年国内外的研究文献,就代谢组学在心肌缺血药理学研究中的应用进行归纳,整理出以糖代谢、能量代谢、氨基酸代谢、嘌呤代谢及P450表氧化酶-可溶性环氧化物水解酶代谢5种代谢途径为主的相关药理学研究,为心肌缺血疾病发生机制及药物作用机制的研究提供依据.
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环氧二十碳三烯酸在心血管系统疾病、炎症和损伤中的作用
环氧二十碳三烯酸是通过细胞色素P450代谢花生四烯酸生成的，可被可溶性环氧化物水解酶水解为二氢环氧二十碳三烯酸。抑制可溶性环氧化物水解酶可增加生物体内环氧二十碳三烯酸的浓度。环氧二十碳三烯酸具有重要的生物学功能，在心血管系统疾病、炎症及损伤等疾病中发挥着重要的作用。
关键词： 环氧二十碳三烯酸 可溶性环氧化物水解酶 心血管系统疾病 炎症 损伤 -
RNA干扰技术抑制可溶性环氧化物水解酶对急性心肌缺血坏死的影响
目的 应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术下调可溶性环氧化物水解酶(soluble Epoxide Hydrolase,sEH)的表达,观察其对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导的急性缺血小鼠心肌的凋亡相关基因和心功能的影响.方法 采用ISO注射液20 mg/(kg·d)连续腹腔注射 3 d,建立小鼠急性心肌缺血模型,分为正常对照组(C组)、心肌缺血组(MI组)、缺血加阴性质粒组(PCN组)和缺血加EH-2质粒组(EH-2组).利用构建好的靶向sEH基因的特异性小干扰RNA质粒EH-2,下调小鼠sEH基因的表达,用心脏超声观察各组左室舒张末期内径(LVEDd)、左室射血分数(EF)、左室短轴缩短率(FS)等变化.Western blotting法检测各组Bcl-2、Bax和sEH的表达变化.结果 与对照组相比,心肌缺血组EF和FS值降低,LVEDd增加;心肌Bax表达升高,而Bcl-2表达降低(P<0.01).而缺血加EH-2质粒组sEH的表达降低,并且与MI组和PCN组相比,EF和FS值增加,LVEDd减小;心肌Bax表达降低,Bcl-2表达升高(P<0.01).结论 用RNA干扰技术可下调小鼠体内sEH的表达,从而增加抑凋亡基因Bcl-2的表达,改善ISO诱导的急性心肌缺血和心功能不全.
关键词： 异丙肾上腺素 可溶性环氧化物水解酶 RNA干扰 -
活性氧调控可溶性环氧化物水解酶表达增高在门静脉高压症大鼠体内的实验研究
目的 明确活性氧(reactive oxygen species,ROS)是否可在肝硬化门静脉高压症大鼠肝外环境中调控可溶性环氧化物水解酶(soluble epoxide hydrolase,sEH)表达,验证sEH对这一疾病模型肠系膜血管中肌源性反应的影响.方法 利用多道生物分析仪分别测定正常对照组大鼠、实验对照组大鼠(四氯化碳处理)及NAPDH抑制剂夹竹桃麻素(apocynin,Apo)干预的处理组大鼠门静脉压力;免疫印迹分析3组大鼠肠系膜动脉组织sEH、ROCK及p-moesin蛋白表达水平的变化;血管灌流系统测定各组大鼠肠系膜动脉血管的肌源性反应.多组间均数比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验.结果 (1)正常对照组、实验对照组和Apo处理组大鼠平均门静脉压力分别为(6.5±0.9)mmHg(1mm Hg=0.133 kPa)、(15.9±1.6)mmHg和(10.6±1.2)mm Hg,肝硬化门静脉高压症大鼠经Apo处理后,门静脉压力显著降低(P＜0.05).(2)与正常对照组比较,实验对照组大鼠肠系膜组织sEH蛋白表达水平明显增高(P＜0.05),p-moesin表达显著降低(P＜0.01),但Apo处理组sEH蛋白表达水平显著降低(P＜0.05),p-moesin表达回复,但仍与正常对照组存在显著差异(P＜0.05).(3)肌源性收缩在实验对照组大鼠显著降低(P＜0.05),经过Apo干预后,肌源性收缩改善,血管恢复收缩活性.结论 四氯化碳致肝硬化门静脉高压症大鼠肝外环境sEH表达增高,与活性氧含量相关.使用NAPDH特异性抑制剂去除活性氧后,sEH表达减低,血管肌源性反应恢复,提示在肝硬化门静脉高压症中限制sEH作用可作为缓解氧化应激外的另一治疗方向.
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可溶性环氧化物水解酶基因多态性与冠心病的相关性
目的:研究中国浙江籍汉族人群中可溶性环氧化物水解酶(EPHX2)基因rs2271001位点单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与冠心病的相关性.方法:176例冠心病患者(至少1支冠状动脉血管内径狭窄≥50％)为冠心病组,选取同期179例冠脉造影正常者作为对照组.采用PCR和基因测序方法,检测rs2271001位点的SNP.结果:在rs2271001位点上检测到3种基因型,其基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡定律.冠心病组EPHX2基因rs2271001位点的AG、GG、AA基因型及G、A等位基因分布频率均高于对照组(均P＜0.05).结论:EPHX2基因rs2271001位点A/G多态性与冠心病发病存在相关性,G等位基因可能是中国浙江籍汉族人群冠心病患者患病的危险等位基因.
关键词： 冠心病 多态性 单核苷酸 可溶性环氧化物水解酶 相关性 -
原花青素对人肝癌细胞株sEH表达及活性的影响
目的 观察原花青素(PC)对人肝癌细胞株可溶性环氧化物水解酶(sEH)表达及活性的影响,为研发sEH抑制剂提供依据.方法 取对数生长期人肝癌细胞株Huh7,分别予0.1％的DMSO、10 μmol/L的sEH抑制剂12-(3-金刚烷-脲基)月桂酸衍生物(AUDA)及25 ～ 100 μmol/L的PC处理,培养30 min和24 h后分别采用酶活性测定试剂盒测定细胞内sEH活性;培养后24 h,采用RT-PCR检测sEH mRNA表达,Western blot检测sEH蛋白表达.结果 25～ 100 μmol/L的PC处理后24 h,sEH活性明显受抑,且呈浓度依赖性;100 μmol/L的PC处理后30 min,sEH活性无明显受抑;100 μmol/L的PC处理后24h,sEH mRNA及蛋白表达均明显受抑.结论 PC对sEH的直接活性无明显影响,其可能主要通过抑制sEH表达、降低细胞sEH的酶量发挥作用;本实验为从天然药物中开发sEH抑制剂提供了新线索.
关键词： 原花青素 可溶性环氧化物水解酶 抑制剂 人肝癌细胞株 -
可溶性环氧化物水解酶在肝硬化大鼠的肝内变化
目的 探讨可溶性环氧化物水解酶(sEH)在肝硬化门静脉高压症大鼠肝纤维化病理过程中发挥的作用.方法 利用多道生物分析仪测定鼠门静脉压力;Western blot和免疫组织化学法证实大鼠肝脏组织sEH蛋白表达水平的变化;Western blot法检测大鼠肝纤维化蛋白标志表达;液相-质谱/质谱法分析各组大鼠肝内环-二十碳三烯酸含量.结果 各组大鼠平均门静脉压力分别为(6.65±0.82)、(5.94±0.91)、(16.54±1.42)、(12.62±1.31) mmHg(1 mmHg =0.133 kPa). sEH抑制剂t-AUCB处理可使sEH、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及Ⅰ型胶原蛋白(COL Ⅰ)蛋白表达水平显著降低.门高压大鼠环氧二十碳三烯酸(EET)/二羟基二十碳三烯酸(Dhet)比值显著升高经过t-AUCB处理后降低.结论 四氯化碳致肝硬化门静脉高压症大鼠肝内sEH含量增高,促进抗肝纤维化物质EET降解,抑制sEH可恢复肝内EET含量,α-SMA及COL Ⅰ蛋白表达水平明显减少,门静脉压力降低.
关键词： 肝硬化 门静脉高压症 可溶性环氧化物水解酶 环-二十碳三烯酸 -
可溶性环氧化物水解酶与心血管疾病
可溶性环氧化合物水解酶(soluble epoxide hydrolase,sEH)是哺乳动物体内广泛存在的一种酶.sEH通过水解环氧二十碳三烯酸(epoxyeicosatrienoic acids,EETs)发挥作用.近来研究发现sEH与高血压、终末器官损伤、心肌肥厚及缺血/再灌注损伤关系密切,极有可能成为一种预防和治疗心血管疾病的新靶点.
关键词： 可溶性环氧化物水解酶 环氧二十碳三烯酸 心血管疾病 -
RNA干扰下调小鼠心肌细胞可溶性环氧化物水解酶的表达
目的 构建含有可溶性环氧化物水解酶基因特异性的RNA干扰序列pSUPER retro neo质粒栽体,选择性下调小鼠心肌细胞可溶性环氧化物水解酶的表达,筛选出抑制效果明显的表达质粒.方法 构建2条靶向可溶性环氧化物水解酶基因的特异性小干扰RNA质粒栽体(EH-1和EH-2),以含非特异性小干扰RNA编码序列的质粒栽体为阴性时照(pCN组),用FuGENE HD将质粒特染入原代培养的小鼠心肌细胞,并设空白对照组,转染后通过半定量RT-PCR和Western Blotting法,检测可溶性环氧化物水解酶的mRNA和蛋白表达情况.结果 与空白对照组、阴性对照组和EH-1组相比,质粒EH-2使心肌细胞可溶性环氧化物水解酶mRNA和蛋白的相对表达量明显下调(分别为0.202±0.017和0.212±0.029,P<0.01).结论 构建了特异性小干扰RNA质粒表达栽体,利用RNA干扰技术成功下调了原代培养的心肌细胞中可溶性环氧化物水解酶的表达,为进一步进行心肌细胞的RNA干扰研究奠定了基础.
关键词： 心肌细胞 可溶性环氧化物水解酶 RNA干扰 -
可溶性环氧化物水解酶抑制剂在心血管领域中的研究进展
在哺乳动物系统中的可溶性环氧化物水解酶属于α/β水解酶类折叠家族的一个成员,它对环氧脂肪酸具有高度的选择性.环氧花生四烯酸或环氧二十碳三烯酸是其特异性底物.环氧二十碳三烯酸是内皮衍生超极化因子的主要组成成分.因此,环氧二十碳三烯酸具有舒张血管及降低血压作用,同时还具有抗炎、促进纤溶、调节血管生长等多种强大生物学效应,其水解酶的抑制剂-可溶性环氧化物水解酶抑制剂可以通过减少环氧二十碳三烯酸降解、增加环氧二十碳三烯酸水平从而模拟这些作用.因此,可溶性环氧化物水解酶抑制剂作为具有治疗高血压、动脉粥样硬化和炎症性疾病可能性的药物被广泛研究.
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AUDA抑制NFkappaB炎症通路改善阿霉素诱导的小鼠心肌细胞损伤
目的:探讨可溶性环氧化物水解酶(sEH)抑制剂AUDA对阿霉素诱导的小鼠心肌细胞损伤的作用及机制.方法:培养C57BL/6J小鼠乳鼠心肌细胞,采用阿霉素诱导离体心肌细胞损伤.实验分组如下:对照组(Control);模型组:阿霉素(DOX);AUDA组;DOX+AUDA组(先予以AUDA预处理30 min,再加入DOX处理24小时).后检测细胞活性、WB检测NFkappaB通路活性、Elisa检测炎症因子TNF-a水平.结果:阿霉素可诱导小鼠心肌细胞活性下降,加入AUDA预处理抑制阿霉素诱导的心肌细胞损伤,同时抑制NFkappaB通路的激活及炎症因子TNF-a的表达.结论:AUDA可抑制阿霉素诱导的心肌细胞损伤,机制可能通过抑制NFkappaB炎症通路.
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EPHX2基因rs 751141位点的单核苷酸多态性分布与冠心病的相关性
目的 研究可溶性环氧化物水解酶(EPHX2)基因rs 751141单核苷酸多态性(SNP)与冠心病的相关性.方法 选择108例冠脉造影结果阳性(至少1支主要冠脉内径狭窄≥50.00％)住院患者为观察组,同期住院冠脉造影结果正常者112例作为对照组,通过聚合酶链反应(PCR)和基因测序方法,对EPHX2基因rs751141位点的基因型频率进行对比分析.结果 在EPHX2基因rs751141位点上可检测到3种基因型,冠心病组EPHX2基因rs751141位点的基因型频率及C等位基因频率与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 EPHX2基因rs751141位点SNP和冠心病发病有相关性,携带C等位基因可能是冠心病发病的易感因素之一.
关键词： 冠心病 可溶性环氧化物水解酶 聚合酶链反应 单核苷酸多态性 -
可溶性环氧化物水解酶抑制剂与心血管疾病
环氧二十碳三烯酸已被证明通过减少缺血再灌注损伤、抗炎、扩张血管等机制发挥心血管保护作用.可溶性环氧化物水解酶是使环氧二十碳三烯酸代谢和失活的主要酶类.因此可溶性环氧化物水解酶抑制剂抑制可溶性环氧化物水解酶,将提高环氧二十碳三烯酸的有益特性,成为治疗心血管疾病的有效措施.
关键词： 可溶性环氧化物水解酶 环氧二十碳三烯酸 心血管疾病
