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可溶性环氧化物水解酶抑制剂可抑制小鼠巨噬细胞泡沫化
目的 观察可溶性环氧化物水解酶抑制剂t-AUCB对小鼠巨噬细胞泡沫化及胆固醇流出率的影响,明确t-AUCB是否可抑制泡沫细胞的形成.方法 培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7,分组为空白对照组、不同浓度t-AUCB干预组、100 μmol/L t-AUCB+ GW9662组.t-AUCB干预组再分为4个亚组,分别用不同浓度t-AUCB(1,10,50,100 μmol/L)干预24h.100 μnol/L t-AUCB+ GW9662组为在t-AUCB前1h加入过氧化物酶增殖体激活型受体γ(PPARγ)拮抗剂GW9662 5μmol/L.采用油红O染色鉴定泡沫细胞的形成,液体闪烁计数器检测各组细胞3氚标记胆固醇(3 H-Cholesterol)的流出率.实时PCR和免疫印迹法分别测定巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运子A1( ABCAl) mRNA和蛋白的表达.结果 油红O染色24h后,空白对照组细胞大量红染,t-AUCB组细胞红染明显少于空白对照组(P＜0.05).100 μmol/L t-AUCB+GW9662组细胞大量红染,显著多于100 μmol/Lt-AUCB组(P＜0.05).空白对照组胆固醇流出率为(5.91±0.18)％.1、10、50和100 μmol/Lt-AUCB干预组胆固醇流出率分别为(7.03±0.33)％、(8.05±0.32)％、(9.04 ±0.14)％和(10.06±0.85)％,均明显高于空白对照组(P均＜0.05).100 μmol/L t-AUCB+ GW9662组胆固醇流出率为(6.33±0.15)％,明显低于100 μmol/L t-AUCB组,P＜0.05.各浓度t-AUCB干预组小鼠巨噬细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达均明显高于空白对照组,P均＜0.05,100 μmol/L t-AUCB+ GW9662组ABCA1 mRNA和蛋白表达显著低于100 μmol/L t-AUCB组,P＜0.05.结论 t-AUCB可通过PPARγ-ABCA1途径改善巨噬细胞胆固醇流出,抑制巨噬细胞内胆固醇过度蓄积,从而抑制泡沫细胞的形成.
关键词： 动脉粥样硬化 巨噬细胞 可溶性环氧化物水解酶抑制剂 -
可溶性环氧化物水解酶抑制剂对CHD患者内皮祖细胞功能产生的影响
目的：探讨可溶性环氧化物水解酶抑制剂（sEHi）tAUCB对冠心病（CHD）患者内皮祖细胞（EPCs）功能产生的影响。方法：随机选取2013年7月-2014年12月于本院心内科住院治疗的38例CHD患者作为观察组，另择同期健康体检的38例健康者作为对照组。分析新型sEHi tAUCB对两组EPCs功能和血管内皮生长因子（VEGF）表达等产生的影响。结果：观察组EPCs迁移和血管生成能力均明显低于对照组，比较差异均有统计学意义（P<0.05）。此外，tAUCB呈浓度依赖性增加，CHD患者EPCs迁移和血管生成能力对其EPCs表达VEGF具有促进作用。结论：sEHi对CHD患者的EPCs功能具有良好的调节作用。
关键词： 可溶性环氧化物水解酶抑制剂 CHD 内皮祖细胞 -
可溶性环氧化物水解酶抑制剂对心脑血管系统疾病的影响
花生四烯酸（arachidonic acid，AA）可被细胞色素P450代谢为环氧花生四烯酸（epoxyeicosatrienoic acids，EETs），EETs具有促进血管生成、抑制炎症过程及血小板聚集等多种生理活性。EETs被可溶性环氧化物水解酶（soluble epoxide hydrolase，sEH）迅速降解，生物活性降低，因此，抑制sEH可作为治疗心脑血管疾病的靶点。该文就sEH抑制剂对高血压、动脉粥样硬化及缺血性脑卒中、心肌梗死、慢性心力衰竭等疾病的作用及机制做一综述。
关键词： 可溶性环氧化物水解酶抑制剂 环氧花生四烯酸 心脑血管疾病 -
sEHi对颈动脉狭窄患者晚期内皮祖细胞功能的影响
目的 研究不同浓度可溶性环氧化物水解酶抑制剂(soluble epoxide hydrolase inhibitor,sEHi) AUDA 对颈动脉狭窄(carotid stenosis,CS)患者外周血来源的晚期内皮祖细胞(late endothelial progenitor cell,late EPC)的影响.方法 入选研究对象60例,分成颈动脉狭窄组(n=35)和对照组(n=25).密度梯度离心法,从外周血获取单个核细胞培养至21 d后鉴定内皮祖细胞;以不同浓度AUDA(0,0.1,1,10 μmol/L)和晚期EPC共培养24h,分别采用MTT法,黏附能力测定实验和Transwell小室来观察其增殖,黏附,迁移能力.同时采用Western blot法观察AUDA处理后其VEGF的表达.结果 体外培养21 d时,细胞呈典型长梭形,21 d时,呈铺路石样,并可摄取FITC UEA-I和Dil-acLDL.与对照组相比,CS患者late EPC的增殖,黏附和迁移能力均显著下降(P＜0.05);与处理前(0umol/L)相比,AUDA呈剂量依赖性地增强CS患者late EPC增殖,黏附和迁移能力并促进CS患者late EPC表达VEGF.结论 sEHi具有促进late EPC增殖,黏附和迁移等功能的作用,其有望成为一类治疗CS的新型药物.
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可溶性环氧化物水解酶抑制剂对内皮祖细胞迁移功能的影响
目的 研究不同浓度可溶性环氧化物水解酶抑制剂t-AUCB对内皮祖细胞(EPCs)迁移功能的影响.方法 密度梯度离心法分离培养小鼠骨髓来源EPCs,不同浓度t-AUCB预干预EPCs,检测干预后EPCs体外迁移情况.结果 从0～100μmol/L,随着浓度增加,t-AUCB可呈浓度依赖性增强EPCs体外迁移能力.结论 可溶性环氧化物水解酶抑制剂t-AUCB参与正向调控EPCs迁移功能.
关键词： 可溶性环氧化物水解酶抑制剂 t-AUCB 内皮祖细胞 迁移 -
可溶性环氧化物水解酶抑制剂在TGF-β1诱导的人脐静脉内皮细胞内皮-间质转化中的作用
目的:观察可溶性环氧化物水解酶抑制剂t-AUCB对TGF-β1诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)内皮-间质转化(EndMT)的影响.方法:采用t-AUCB(50μmol/L)预处理HUVEC 40 min后,用TGF-β1(10μg/L)诱导HUVEC 24 h,采用Western blot法检测Smad2/3的磷酸化水平;诱导72 h后,光镜观察细胞形态的变化,采用CCK-8试剂盒检测细胞活性,采用实时荧光定量PCR检测内皮细胞标记物(CD31)、间质细胞标记物(collagenⅠ、collagenⅢ、vimentin)及EndMT中重要的下游转录因子(snail1、twist1、twist2、ZEB1)mRNA的表达.同时设TGF-β1和t-AUCB单独作用组.结果:光镜下,TGF-β1组细胞转变为狭长形,细胞间隙疏松,TGF-β1+t-AUCB组、t-AUCB组细胞形态正常.TGF-β1组细胞CD31 mRNA表达下调,collagenⅠ、collagenⅢ、vimentin mRNA表达上调,snail1、twist1、twist2、ZEB1 mRNA表达上调,Smad2及Smad3蛋白磷酸化水平升高(P<0.05).与TGF-β1组比较,TGF-β1+t-AUCB组、t-AUCB组上述指标的表达均有一定程度的逆转(P<0.05).结论:t-AUCB可通过抑制内皮细胞的EndMT而发挥抗纤维化作用.
关键词： 可溶性环氧化物水解酶抑制剂 内皮-间质转化 脐静脉内皮细胞 心肌纤维化 -
sEHi对颈动脉狭窄患者内皮祖细胞增殖及PI3K/Akt信号通路的影响
目的 探讨可溶性环氧化物水解酶抑制剂(sEHi) AUDA调控颈动脉狭窄(CS)患者外周血内皮祖细胞(EPCs)增殖的分子机制.方法 从CS患者外周血分离、培养内皮祖细胞,收集培养至第7d的细胞,分为未处理组、AUDA组、PI3K抑制剂(LY294002)组和AUDA+LY294002组,取无颈动脉狭窄患者的EPCs作为对照组,MTT法检测EPCs的增殖能力,Western blot法检测EPCs Akt磷酸化的水平.结果 对照组EPCs增殖能力较未处理组增强,AUDA组较未处理组、AUDA+LY294002组、LY294002组EPCs增殖能力增强,未处理组、AUDA+LY294002组较LY294002组内皮祖细胞增殖能力增强;Western blot结果显示AUDA可以促进EPCs P-Akt蛋白的表达,而LY294002可以抑制上述作用.结论 AUDA可能通过活化PI3K/Akt信号通路来促进内皮祖细胞的增殖.
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可溶性环氧化物水解酶抑制剂通过过氧化体增殖物激活型受体γ调节内皮祖细胞功能
目的 研究可溶性环氧化物水解酶抑制剂t-AUCB对小鼠来源内皮祖细胞(EPC)功能的调节及相关机制.方法 密度梯度离心法分离培养小鼠骨髓来源EPC,不同浓度t-AUCB及过氧化体增殖物激活型受体γ(PPARγ)阻断剂GW9662预干预EPC,检测上述EPC体外增殖、黏附、迁移、血管生成情况.结果 在1～100μmol/L范围内,t-AUCB呈浓度依赖性增强EPC体外增殖、黏附、迁移、血管生成能力,而5μmol/L PPARγ阻断剂GW9662可抑制EPC上述功能.结论 可溶性环氧化物水解酶抑制剂t-AUCB参与EPC增殖、黏附、迁移、血管生成等功能的调控,其机制可能与激活PPARγ通路有关.
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可溶性环氧化物水解酶抑制剂对压力负荷增加所致小鼠心肌肥厚的影响
目的观察可溶性环氧化物水解酶抑制剂对心肌肥厚小鼠心脏及心肌肥厚标志基因的影响,并探讨该类药物影响心肌肥厚的可能机制.方法观察压力负荷增加及用可溶性环氧化物水解酶抑制剂干预后心脏的病理学改变,并用半定量逆转录聚合酶链反应法检测心肌肥厚基因(心房钠尿肽基因、α肌凝蛋白重链基因、β肌凝蛋白重链基因和骨骼肌α肌纤蛋白基因)表达的差异,用Western检测核因子κB的活化情况.结果可溶性环氧化物水解酶抑制剂可以明显使心脏重与体重的比值、左心室短轴缩短率和左心室收缩期末腔径明显改善,并减少压力负荷增加引起的小鼠心肌肥厚基因的表达,抑制核因子κB的表达.结论可溶性环氧化物水解酶抑制剂能抑制压力负荷增加所致的心肌肥厚,这一作用有可能通过抑制核因子κB途径来实现.
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sEHi对颈动脉狭窄患者外周血早期内皮祖细胞血管内皮生长因子表达的影响
目的 探讨可溶性环氧化物水解酶抑制剂(sEHi) AUDA对颈动脉狭窄(CS)患者外周血来源的早期内皮祖细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 采用密度梯度离心法,从CS患者外周血获取单个核细胞,培养至7天,收集贴壁细胞,采用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪进行早期内皮祖细胞鉴定.分别用不同浓度(0、0.1、1、10 μmol/L) AUDA干预24 h,采用免疫印迹法观察AUDA处理后其VEGF的表达.取年龄性别匹配的健康体检者的早期内皮祖细胞作为对照组.结果 与对照组相比,CS患者早期内皮祖细胞VEGF表达显著下降;与处理前(0 μmol/L AUDA)相比,AUDA呈剂量依赖性地增强CS患者早期内皮祖细胞VEGF表达.结论 sEHi通过环氧二十碳三烯酸介导上调早期内皮祖细胞VEGF的表达,并呈浓度依赖性,其有望成为一类治疗CS的新型药物.
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可溶性环氧化物水解酶抑制剂在心血管领域中的研究进展
在哺乳动物系统中的可溶性环氧化物水解酶属于α/β水解酶类折叠家族的一个成员,它对环氧脂肪酸具有高度的选择性.环氧花生四烯酸或环氧二十碳三烯酸是其特异性底物.环氧二十碳三烯酸是内皮衍生超极化因子的主要组成成分.因此,环氧二十碳三烯酸具有舒张血管及降低血压作用,同时还具有抗炎、促进纤溶、调节血管生长等多种强大生物学效应,其水解酶的抑制剂-可溶性环氧化物水解酶抑制剂可以通过减少环氧二十碳三烯酸降解、增加环氧二十碳三烯酸水平从而模拟这些作用.因此,可溶性环氧化物水解酶抑制剂作为具有治疗高血压、动脉粥样硬化和炎症性疾病可能性的药物被广泛研究.
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可溶性环氧化物水解酶抑制剂t-AUCB对巨噬细胞脂质代谢的影响
目的 观察可溶性环氧化物水解酶抑制剂t-AUCB对小鼠巨噬细胞脂质摄取及降解的影响,并探明其可能机制.方法 培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,分别用不同浓度t-AUCB(1、10、50及100 μmol/L)干预24 h,或在100 μmol/L t-AUCB干预前1h加入PPARγ拮抗剂GW9662 5 μmol/L,采用t-AUCB 0 μmol/L干预组作为空白对照.采用125 Ⅰ -ox-LDL放射配基法测定小鼠巨噬细胞对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的摄取及降解,实时荧光定量PCR和Western blot分别测定小鼠巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白表达.结果 t-AUCB呈剂量依赖性地增加巨噬细胞125Ⅰ -ox-LDL摄取量和降解量,0、1、10、50和100 μmol/L t-AUCB干预时,摄取量分别为414.96±46.71μg/g、519.54±47.7μg/g、629.04±37.97 μg/g、720.66±48.58 μg/g和881.57±68.44μg/g,降解量分别为16180.23±967.28 μg/g、17369.62±478.34 μg/g、21794.85±689.36μg/g、27883.03±712.25 μg/g和30194.61±635.71μg/g,与空白对照组比较差异显著(P＜0.05),加入GW9662后100 μmol/L组摄取量降至467.80±51.98μg/g,降解量降至16326.19±735.95 μg/g,与单独加入t-AUCB组比较差异具有显著性(P ＜0.05)；t-AUCB可呈剂量依赖性的增加小鼠巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白的表达,而加入GW9662后明显抑制上述作用.结论 t-AUCB可通过上调PPARγ-CD36信号通路分子表达增加小鼠巨噬细胞摄取和降解ox-LDL.
关键词： 巨噬细胞 可溶性环氧化物水解酶抑制剂 氧化型低密度脂蛋白 CD36
