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槲皮素对转化生长因子诱导人脐静脉内皮细胞内皮-间质转化的影响
目的：观察槲皮素对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）-12内皮-间质转化的影响，探讨其作用机制。方法 CCK-8法检测不同浓度槲皮素和/或TGF-β1干预HUVEC-1272 h后细胞活力；RT-PCR和免疫荧光双染检测内皮及间质标记物的转变；Western blot检测信号通路；RT-PCR检测在转变过程中发挥关键调节作用的转录因子。结果 RT-PCR和免疫荧光双染结果均提示，TGF-β1（10 ng/mL）连续刺激HUVEC-1272 h可诱导其转化为成纤维细胞表型，表现出更多的间质标记物升高，内皮标记物降低；Western blot和RT-PCR结果显示，槲皮素呈浓度依赖性抑制smad2/3的磷酸化；TGF-β1刺激后，下游调控内皮-间质转化的重要转录因子snail1、twist1、twist2、ZEB1、ZEB2均明显升高，而100μmol/L槲皮素则可显著下调下游的5种转录因子。结论槲皮素可抑制TGF-β1诱导的HUVEC-12发生内皮-间质转化而发挥抗纤维化的作用。
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内皮-间质转化的研究进展
内皮-间质转化(EndMT)是内皮细胞受到外界刺激失去内皮细胞特征,获得间质细胞或肌成纤维细胞表型,表达间质细胞产物的一种生物过程.EndMT不仅在心脏和血管生长发育中发挥重要作用,其在纤维化疾病和肿瘤中也广泛研究.文章对EndMT的信号调节机制及其近期在纤维化和肿瘤发生中的研究进行总结,为临床疾病的治疗提供新的靶点.
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可溶性环氧化物水解酶抑制剂在TGF-β1诱导的人脐静脉内皮细胞内皮-间质转化中的作用
目的:观察可溶性环氧化物水解酶抑制剂t-AUCB对TGF-β1诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)内皮-间质转化(EndMT)的影响.方法:采用t-AUCB(50μmol/L)预处理HUVEC 40 min后,用TGF-β1(10μg/L)诱导HUVEC 24 h,采用Western blot法检测Smad2/3的磷酸化水平;诱导72 h后,光镜观察细胞形态的变化,采用CCK-8试剂盒检测细胞活性,采用实时荧光定量PCR检测内皮细胞标记物(CD31)、间质细胞标记物(collagenⅠ、collagenⅢ、vimentin)及EndMT中重要的下游转录因子(snail1、twist1、twist2、ZEB1)mRNA的表达.同时设TGF-β1和t-AUCB单独作用组.结果:光镜下,TGF-β1组细胞转变为狭长形,细胞间隙疏松,TGF-β1+t-AUCB组、t-AUCB组细胞形态正常.TGF-β1组细胞CD31 mRNA表达下调,collagenⅠ、collagenⅢ、vimentin mRNA表达上调,snail1、twist1、twist2、ZEB1 mRNA表达上调,Smad2及Smad3蛋白磷酸化水平升高(P<0.05).与TGF-β1组比较,TGF-β1+t-AUCB组、t-AUCB组上述指标的表达均有一定程度的逆转(P<0.05).结论:t-AUCB可通过抑制内皮细胞的EndMT而发挥抗纤维化作用.
关键词： 可溶性环氧化物水解酶抑制剂 内皮-间质转化 脐静脉内皮细胞 心肌纤维化 -
内皮-间质转化与动脉粥样硬化的研究进展
内皮-间质转化(EndMT)是内皮细胞在多种刺激因素作用下向间充质细胞转化的动态过程,适当 的干预可以减缓甚至逆转该过程.近来研究发现,EndMT在动脉粥样硬化(AS)的多个病理阶段均起到重要作用,提示其在AS防治方面具有重要的研究意义.本文对EndMT的特点、发生机制及其在AS病程中的作用做一综述,以期为AS的防治提供新的思路和理论基础.
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微小RNA-126抑制间质转化中内皮祖细胞的增殖与迁移
目的 探讨微小RNA-126(miR-126)对间质转化中的血管内皮祖细胞(EPC)增殖与迁移的影响.方法 分离大鼠骨髓源内皮祖细胞,转化生长因子β1(TGF-β1)诱导EPC的间质转化,慢病毒转染建立miR-126过表达EPC,通过MMT法检测EPC的增殖,细胞划痕实验与Transwell法检测细胞迁移能力.结果 TGF-β1成功诱导EPC间质转化,miR-126抑制间质转化中EPC损伤细胞间距的缩短,抑制Transwell小室膜下单位面积的细胞数量.结论 miR-126过表达抑制间质转化中EPC的增殖与迁移.
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基于内皮细胞的内皮-间质转化筛选肾康丸活性成分
目的 基于ALK5靶点,通过分子对接技术对肾康丸的有效成分进行筛选,并验证各分子在高糖模型中的作用,从而筛选出肾康丸影响内皮细胞内皮-间质转化活性的有效成分,优化组方配伍.方法 对初步筛选的9个分子进行活力测定后选定毛蕊异黄酮、刺芒柄花苷、豆甾醇3个分子;通过设置正常细胞组、高糖损伤组、高糖损伤组+毛蕊异黄酮、高糖损伤组+刺芒柄花苷、高糖损伤组+豆甾醇组,并用实时荧光定量PCR检测3个分子的α-SMA,vimentin的mRNA表达水平;用Western blot法检测SMAD2/3磷酸化情况.结果 与正常细胞组活力比较,毛蕊异黄酮、刺芒柄花苷、豆甾醇3个分子细胞毒性弱,与正常细胞组活力比较差异无统计学意义(P>0.05).其中,高糖加毛蕊异黄酮组的α-SMA、vimentin的mRNA水平显著下降(P<0.05),SMAD2/3磷酸化受到抑制.其他两组差异无统计学意义.结论 高糖对内皮细胞会产生损伤,可通过黄芪单体毛蕊异黄酮来抑制α-SMA、vimentin上调,抑制SMAD2/3参与调节内皮细胞内皮-间质转化从而改善糖尿病肾病.
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低氧诱导猪肺动脉内皮细胞间质转化的鉴定及其生物学意义
目的 原代培养猪肺动脉内皮细胞,探讨缺氧环境对肺动脉内皮细胞的影响,为肺部疾病提供体外研究模型.方法 将猪原代肺动脉内皮细胞分为两组分别置于常氧和低氧环境中培养1、4和7d,采用免疫荧光法、Western blot及RT-PCR检测各组细胞内皮细胞和间质细胞特异性标志蛋白及mRNA表达.结果 常氧组肺动脉内皮细胞呈现典型的鹅卵石样排列,低氧培养的内皮细胞出现长梭形外观.免疫荧光法观察发现低氧培养的内皮细胞开始表达间质细胞抗原α-SMA,且随着低氧时间的延长,α-SMA表达量逐渐增多(P＜0.01).Western blot结果显示与常氧组相比,低氧组内皮细胞VE-cadhrein蛋白表达逐渐下降,α-SMA蛋白表达逐渐上升,RT-PCR结果与此一致.结论 低氧促进内皮细胞向间质细胞转化,可能参与体内多种疾病的发生.
