首页 > 文献资料
-
LC-MS/MS法测定大鼠知母皂苷B-Ⅱ的血药浓度
目的 建立LC-MS/MS法测定知母皂苷B-Ⅱ在大鼠血浆中的浓度.方法 以人参皂苷Rg2为内标,血浆样品用固相萃取法处理,色谱柱为Agilent XDB-C8柱(2.1 mm× 150 mm,5μm)；流动相为乙腈-2 mmol·L-1乙酸铵(55:45)；流速250 μL·min-1,用电喷雾离子化和负离子多离子反应监测(MRM)方式检测知母皂苷B-Ⅱ.结果 该方法知母皂苷B-Ⅱ的线性范围为3～ 3000ng·mL-1,LLOQ为3 ng·mL-1,批内、批间相对标准偏差均≤9.1％,提取回收率为(89.33 ±5.09)％ ～ (96.85±6.62)％.结论 该方法准确、灵敏、特异、简便,适用于血浆知母皂苷B-Ⅱ浓度测定.
-
知母皂苷B-Ⅱ纳米纤维膜制备及体外抗肿瘤活性的初步研究
目的：探索知母皂苷B-Ⅱ纳米纤维膜的制备方法，为后续进行体内相关研究打好基础。方法：将知母皂苷B-Ⅱ与聚乳酸（PLLA）按照不同比例制成知母皂苷B-Ⅱ纳米纤维膜；分别采用扫描电镜、红外光谱分析、LC-MS/MS检测方法对纤维膜理化性质表征、生物相容性、缓释性能等进行测试；采用CCK-8法检测载药纳米膜缓释药物抑制胃癌细胞的增殖情况。结果：12%的知母皂苷B-Ⅱ浓度为佳载药浓度；在制备载知母皂苷B-Ⅱ纳米纤维的过程中，静电纺丝技术能保持两种组分各自的化学特征及物理性质；知母皂苷B-Ⅱ对纤维膜的热稳定性影响不大，两者相容性较好；知母皂苷B-Ⅱ纳米纤维膜可有效释放知母皂苷B-Ⅱ，明显抑制BGC-823细胞的增殖活性，在48 h、72 h与对照组细胞相比较，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：知母皂苷B-Ⅱ纳米纤维膜通过缓释药物可有效抑制BGC-823细胞的增殖能力。
-
知母产地加工与饮片炮制一体化工艺研究
目的 优选知母Anemarrhenae Rhizoma产地加工与饮片炮制一体化工艺,为实现知母产地加工与饮片炮制一体化提供科学依据.方法 采用单因素实验结合正交试验法对一体化加工工艺中鲜药的烘制温度、切制时药材含水量、切片厚度、饮片烘干温度4个影响因素进行考察,以知母中指标性成分知母皂苷B-Ⅱ、芒果苷含量及饮片外观性状为考察指标,采用综合评分法进行评价,优选知母产地加工工艺.以酵母致热大鼠模型体温变化为指标,比较2种工艺所得饮片的解热作用;以链脲佐菌素(STZ)致糖尿病大鼠模型的血糖值、胰岛素含量、糖化血清蛋白含量为指标,比较2种工艺所得饮片的降糖作用.结果 知母于50℃条件烘制11h(药材含水量45％～50％),于滚筒中撞去毛,脱毛时间30 min,切4mm厚片,于50℃条件下烘干为佳加工工艺;一体化工艺饮片指标性成分含量及降糖作用与《中国药典》2015年版传统工艺饮片相比无显著性差异,解热作用略优于传统饮片.结论 本实验所优选的知母产地加工与饮片炮制一体化工艺切实可行,适合产业化生产.
-
知母皂苷Ⅱ对老龄大鼠学习记忆行为及海马区神经元的影响
目的 本实验研究知母皂苷BⅡ(Timosaponin B-Ⅱ,TB-Ⅱ)对自然衰老大鼠学习记忆能力的改善及海马区神经元的保护作用.方法 SD大鼠老年对照组(15只)、青年大鼠对照组(15只)、TB-II 1 mg/kg组(15只)、TB-II 2 mg/kg组(15只)和TB-II 4 mg/kg组(15只).Morris水迷宫实验测量动物逃避潜伏时间;Elisa法测定脑脊液IL-6和TNF-α含量;TUNEL法检测海马区凋亡神经元;HPLC法检测多巴胺、去甲肾上腺素和5-羟色胺含量.结果 水迷宫实验显示老龄对照组逃避潜伏时间比青年对照组增加,差异有统计学意义(P<0.05);给药组与老年对照组相比逃避潜伏时间明显缩短,差异有统计学意义(P<0.05);给药组脑脊液IL-6和TNF-α浓度下降(P<0.05);给药组海马区神经元凋亡减少(P<0.05);给药组DA、NE和5-HT含量增加(P<0.05).结论 知母皂苷BⅡ通过抑制大脑炎症介质生成和抑制海马区神经元凋亡,提高神经递质含量,明显改善自然衰老大鼠的学习和记忆能力.
-
知母皂苷B-Ⅱ抑制人胃癌细胞增殖和迁移的作用机制
目的 研究知母皂苷B-Ⅱ抑制人胃癌细胞株BGC-823和MGC-803增殖及迁移的作用机制.方法 使用终浓度为50 ng/mL的知母皂苷B-Ⅱ处理BGC-823和MGC-803细胞48 h,用qPCR和蛋白质印迹实验分别检测细胞内清道夫受体A5(SCARA5)的mRNA含量及蛋白表达;采用生物信息学方法预测hsa-miRNA-766-3p与SCARA53′UTR区的结合位点,并通过荧光素酶报告基因实验进行验证;转染hsa-miRNA-766-3p mimic或siRNA-SCARA5至BGC-823、MGC-803细胞,24 h后使用50 ng/mL知母皂苷B-Ⅱ处理细胞48 h,用qPCR和蛋白质印迹实验检测细胞内hsa-miRNA-766-3p相对含量和SCARA5蛋白表达,MTT法检测细胞的增殖活性及迁移能力.结果 50 ng/mL知母皂苷B-Ⅱ处理BGC-823、MGC-803细胞48 h能增强肿瘤细胞中SCARA5蛋白表达(P<0.01),而SCARA5 mRNA相对含量变化差异无统计学意义(P>0.05).与报告基因表达载体单独转染比较,hsa-miRNA-766-3p mimic和hsa-miRNA-766-3p inhibitor与野生型荧光素酶报告基因共转染可分别抑制和增强细胞内荧光素酶活性(P<0.05,P<0.01);hsa-miRNA-766-3p mimic和hsa-miRNA-766-3p inhibitor转染对突变型荧光素酶报告基因载体荧光素酶活性无明显影响(P>0.05).50 ng/mL知母皂苷B-Ⅱ处理BGC-823、MGC-803细胞48 h,细胞内hsa-miRNA-766-3p含量均降低,SCARA5蛋白表达则升高(P<0.01);hsa-miRNA-766-3p mimic转染+皂苷处理与单纯皂苷处理比较,细胞内hsa-miRNA-766-3p含量上升(P<0.01)、SCARA5蛋白表达降低(P<0.01);siRNA-SCARA5转染+皂苷处理与单纯皂苷处理比较,细胞内hsa-miRNA-766-3p含量无明显变化(P>0.05),但SCARA5蛋白表达降低(P<0.01).细胞增殖及迁移实验检测结果表明,与细胞对照或溶媒对照比较,经知母皂苷B-Ⅱ处理的胃癌细胞BGC-823和MGC-803增殖活性及迁移能力均降低(P<0.01),siRNA-SCARA5转染+皂苷处理的细胞增殖活性和迁移能力与单纯皂苷处理的细胞相比增强(P<0.01).结论知母皂苷B-Ⅱ能够抑制hsa-miRNA-766-3p的表达,进而上调其靶基因SCARA5的表达,终抑制胃癌细胞BGC-823和MGC-803的增殖和迁移.
-
HPLC法分析比较亳州知母须根和主根中芒果苷和知母皂苷B-Ⅱ的含量
目的:分析比较毫州地区知母须根和主根中芒果苷和知母皂苷B-Ⅱ的含量.方法:采用HPLC-DAD法测定芒果苷的含量,HPLC-ELSD法测定知母皂苷B-Ⅱ的含量.结果:知母须根中芒果苷和知母皂苷B-Ⅱ的平均含量分别为3.23％,1.77％,知母主根中芒果苷和知母皂苷B-Ⅱ的平均含量分别为1.59％,3.29％.结论:芒果苷和知母皂苷B-Ⅱ为知母须根主要化学成分,实验结果可为知母须根的综合开发利用提供科学依据.
-
知母皂苷B-Ⅱ在比格犬体内的药代动力学研究
目的 建立比格犬血浆中知母皂苷B-Ⅱ的LC-MS/MS测定方法,并应用于知母皂苷B-Ⅱ的药代动力学研究.方法 液相色谱分离采用ODS柱(150 mm×2.1 mm,5μm),以乙腈-0.05％甲酸溶液(35∶65)为流动相,质谱检测采用ESI离子源,MRM负离子模式.将6只比格犬随机分成2组,单剂量交叉静注或口服知母皂苷B-Ⅱ,剂量分别为2,30 mg·kg-1,定时采集血样,测定比格犬体内的血药浓度,并计算药代动力学参数.结果 比格犬静注和口服知母皂苷B-Ⅱ后的主要药代动力学参数如下:Cmax分别为(21507±7307)、(313±149)ng·mL-1；AUCo-t分别为(19177±5692)、(1879±738)ng·h·mL-1；AUC0-∞分别为(19770±5879)、(2153±695)ng·h·mL-1；t1/2分别为(7.8l±2.61)、(6.01±5.28)h；MRT0-t分别为(2.89±0.39)、(6.27±1.80)h；MRT0-∞分别为(3.88±0.39)、(8.59±3.18)h.结论 该法可用于比格犬血浆中知母皂苷B-Ⅱ的检测及其体内药代动力学研究,比格犬口服知母皂苷B-Ⅱ后的绝对生物利用度为(0.72±0.29)％.
关键词： 知母皂苷B-Ⅱ 药物动力学 生物利用度 液相色谱-串联质谱法 -
知母皂苷B-Ⅱ抑制人肺癌A549细胞增殖和迁移的机制研究
目的:研究知母皂苷B-Ⅱ(TB-Ⅱ)抑制人肺癌A549细胞增殖和迁移的机制.方法:使用0(空白对照)、1、10、100μg/ml的TB-Ⅱ处理A549细胞48 h后,分别提取细胞总RNA及总蛋白,采用实时定量荧光-聚合酶链反应和Western blot法分别检测细胞内白细胞介素18(IL-18)mRNA及蛋白表达;通过转染沉默A549细胞内IL-18基因,比较未转染组、阴性对照组和转染组细胞内IL-18 mRNA及蛋白表达,然后用10μg/ml的TB-Ⅱ处理转染后的细胞24、48、72 h,采用CCK-8法检测细胞增殖活性,划线法观察细胞迁移能力变化.结果:与空白对照比较,TB-Ⅱ处理后A549细胞内IL-18 mRNA及蛋白表达均增加(P<0.05或P<0.01),且与浓度呈正相关.与未转染组比较,转染组细胞内IL-18 mRNA及蛋白表达均降低(P<0.01);与TB-Ⅱ处理的未转染细胞比较,TB-Ⅱ处理72 h后的转染细胞增殖活性和迁移能力均增强(P<0.01).结论:TB-Ⅱ可通过上调IL-18基因的表达来抑制A549细胞的增殖和迁移.
