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低剂量X射线对小鼠树突状细胞与T淋巴细胞之间免疫反应的影响
低剂量辐射(low dose radiation,LDR)兴奋效应机制的研究,涉及了基因调控、信号转导、细胞功能和整体调节等方面,但电离辐射对免疫细胞间反应影响及机制研究的报道不多,特别是在体外采用两种免疫细胞共培养体系,探讨LDR对其细胞间反应的研究尚少见报道.树突状细胞( dendriticcells,DC)作为体内功能强大的专职性抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC),在启动适应性免疫应答中起着独特的作用.本研究从体外DC与T淋巴细胞共培养体系着手,着重观察低剂量电离辐射对DC与T淋巴细胞表面共刺激分子CD80/CD28及其IL-12、IFN-γ、 TGF-β1细胞因子含量的影响,探讨DC和T淋巴细胞免疫细胞间反应的变化.
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转化生长因子β1基因修饰的小鼠树突状细胞在移植体内的迁移与生存(摘要)
目的观察β型转化生长因子(TGFβ1)基因修饰的B10小鼠骨髓树突状细胞(DC)在C3H小鼠体内的迁移和存活,以探讨DC生物学特性与移植耐受性的关系。方法从B10小鼠骨髓分离DC前体细胞,在粒细胞?巨噬细胞集落刺激因子+β型转化生长因子(GM-CSF+TGFβ)条件下培养增殖(DC1),并转导Ad-LacZ(DC2)或Ad-TGFβ1 (DC3)。每组5×105个细胞注入C3H小鼠后掌皮下,分别于第1、2、7及14天取淋巴器官,以免疫组织化学方法检测Ⅰ-Ab阳性细胞的分布及数量。结果各组DC在C3H小鼠体内的迁移及分布均相似,即Ⅰ-Ab阳性细胞首先出现在腘窝淋巴结被膜下,继而迁入脾的T细胞依赖区和边缘区,第7天脾内阳性细胞数达顶峰。与DC1组相比,DC2在脾内的阳性细胞数减少,DC3阳性细胞数在各时间点都为高。结论DC经转导Ad-LacZ,可增加其免疫活性,使宿主加速排斥反应;而转导Ad?TGFβ1可使TGFβDC表达TGFβ1,维持DC于功能不成熟状态,从而提高宿主的耐受性。
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磷脂酶C分子在结核分枝杆菌触发树突状细胞细胞骨架重排中的作用
目的:研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)侵入小鼠树突状细胞株(DC2.4)时细胞骨架微丝、微管变化及其与磷脂酶C(PLC)分子的关系.方法:建立人结核分枝杆菌H37Rv株DC2.4细胞混合培养模型.采用罗丹明标记的鬼笔环肽(Palloidin-TRITC)染细胞F-actin,用抗微管蛋白β亚单位的小鼠一抗和荧光素标记的兔抗小鼠二抗染细胞微管,检测H37Rv株侵入DC2.4细胞时细胞骨架的变化情况,并计算F-actin重排率.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测DC2.4细胞浆和细胞膜中PLC分子的表达.采用PLC分子抑制剂U73122预处理DC2.4细胞,观察H37Rv株侵入率变化以及对细胞骨架变化的影响.结果:结核分枝杆菌H37Rv株与DC2.4细胞共育2h,即见有细菌侵入,共育4、6、8、10、12 h后,H37Rv侵入率分别为(26.1±4.5)%、(39.9±5.6)%、(51.2±5.9)%、(57.9±6.1)%和(63.9±6.8)%;H37Rv侵入2、4、6、8、10、12 h时,F-actin重排百分率分别为(26.9±1.5)%、(59.3±2.8)%、(72.7±4.8)%、(78.2±5.9)%、(63.3±2.9)%和(43.2±2.6)%,而PLC信号分子阻断后,DC2.4细胞的侵入率则分别为(13.6±3.1)%、(14.2±3.9)%、(15.1±4.3)%、(16.8±4.0)%和(18.3±5.2)%,F-actin重排率也分别为(18.5±1.2)%、(22.3±1.7)%、(23.6±2.5)%、(24.8±2.3)%、(22.3±1.3)%和(23.8±1.8)%,而微管变化不大;混合培养4、6、8、10 h,PLC信号通路阻断前的侵入率和F-actin重排率明显高于PLC分子阻断后(P<0.05).侵入2h后,DC2.4细胞膜中的PLC分子表达即开始升高,至8h时达高;U73122可抑制DC2.4细胞膜中PLC分子的表达,而对细胞浆中的PLC分子影响不大.结论:结核分枝杆菌可通过激活DC2.4细胞PLC分子触发F-actin细胞骨架重排,从而侵入DC2.4细胞,且PLC分子的表达主要存在于DC2.4细胞膜上.
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HCV C-Fc基因转染的小鼠树突状细胞促进混合淋巴细胞反应的作用
目的: 观察HCV C-Fc基因电穿孔法转染的小鼠树突状细胞(DC)功能的改变.方法: 分离小鼠骨髓单个核细胞与rmGM-CSF和rmIL- 4培养1 wk, 对培养的细胞进行形态学观察, 并用FACS检测细胞表面DEC205的表达.以通过质粒pcDNA3HCV C-Fc电穿孔法转染培养的DC, 用间接免疫荧光染色测定转染细胞中HCV C-Fc的水平; 用混合淋巴细胞反应检测电穿孔法转染细胞的功能.结果: 培养1 wk后, 得到具有典型DC形态的细胞, 以质粒pcDNA3HCV C-Fc为载体电穿孔法转染DC后, 转染细胞中可检测到较高水平的HCV C-Fc. 与对照组相比较以电穿孔法转染的细胞能明显刺激混合淋巴细胞反应.结论: 小鼠骨髓单个核细胞加GM-CSF和IL- 4培养1 wk, 可生成大量的DC. 质粒pcDNA3HCV C-Fc转染培养的DC对T细胞刺激作用显著增强.
关键词: 小鼠树突状细胞 电转染 混合淋巴细胞反应 HCV C-Fc基因 -
HCV C-Fc基因转染的小鼠树突状细胞促进混合淋巴细胞反应的作用