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小鼠视网膜下注射淀粉样蛋白β(1-42)后视网膜组织的变化
目的 探讨小鼠视网膜下注射淀粉样蛋白β(1-42)寡聚体(OAβ1-42)后视网膜组织的变化.方法 实验研究.120只8周龄C57BL/6N小鼠单纯随机抽样法分为双蒸水组和OAβ(1-42)组,分别在视网膜下腔注射双蒸水和浓度为0.312 5mmol/L的OAβ(1-42).注射后于不同时间点对实验眼进行观察,包括眼底照相及自发荧光成像、视网膜电图检查、视网膜组织切片HE染色、神经视网膜铺片β-半乳糖苷酶染色、视网膜色素上皮/脉络膜铺片老化标志物免疫荧光染色、视网膜组织中老化相关因子的免疫印迹法及荧光定量PCR检测.实验数据采用独立样本t检验进行统计学分析.结果 与对照组比较,注射后1周时实验组小鼠眼底照相可见视网膜组织萎缩伴自发荧光增强;暗适应视网膜电图显示a波振幅均值下降为(39.94±7.75)μV[对照组(225.27±28.94)μV,t=12.45,P＜0.001],b波振幅均值下降为(185.55±4.62)μV[对照组(873.78±43.80)μV,t=27.06, P＜0.001];HE染色可见视网膜色素上皮细胞色素分布紊乱,视网膜厚度显著变薄(t=75.13,P＜0.001);β半乳糖苷酶染色及免疫荧光染色老化标志物表达明显增高;以上表现持续到注射后8周.同时分子生物学检测提示,注射后1周时实验组小鼠视网膜组织老化相关因子较对照组表达显著增高.结论 OAβ(1-42)在小鼠视网膜下聚集后可导致视网膜组织老化,使其视觉功能下降,该表现与AMD临床表现类似.
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阿尔茨海默病与白内障相关性的研究进展
阿尔茨海默病(AD)是一种发生于老年和老年前期的进行性神经系统退行性疾病.AD早期患者机体已发生病理学改变,但临床症状轻微,故AD的早期诊断存在困难.寻找无创性早期诊断AD的方法,对AD的预先诊断和治疗至关重要.研究发现β淀粉样蛋白与白内障和AD均有关.本文对AD及其可能存在于晶状体的相关标记物、AD可能合并的相关白内障进行综述和讨论,以期为AD的早期诊断提供依据.
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阿尔茨海默病的可能药物靶点和临床治疗研究进展
阿尔茨海默病(AD)是高发于65岁以上人群的神经退行性疾病,其病理特征是大脑中β淀粉样蛋白(Aβ)聚集形成的老年斑、过度磷酸化的tau蛋白聚集而成的神经元纤维缠结、长期炎症反应以及神经元死亡等.因此,除了衰老之外,Aβ聚集、tau过度磷酸化、慢性炎症及神经元死亡被认为是AD的主要发病假说之一.本文介绍了基于以上假说的AD治疗靶点的研究及药物研发进展.目前进展快的药物都基于神经保护假说,全部5个小分子AD药物都是通过调节兴奋性神经递质传递通路而改善AD患者认知障碍的,但是它们的疗效非常有限.基于这一机制的新药研发也主要集中在抑制兴奋性递质受体这一方向,然而进展有限.基于tau假说的药物主要是通过抑制tau的磷酸化、异常聚集及病理扩散.然而,由于无法特异性抑制tau的磷酸化,目前进展较快的是tau疫苗.目前处于临床试验中的4个tau相关药物有2个是tau的主动免疫疫苗,均处于Ⅰ期临床中.在Aβ假说方面,药物研发思路主要集中在抑制Aβ合成/聚集、促进Aβ清除上.由于γ-分泌酶抑制剂的临床试验因严重不良反应而失败,目前的热点是β-分泌酶(BACE1)抑制剂以及Aβ疫苗.另外,通过抗炎药物抑制患者脑内的长期慢性炎症也被认为是AD治疗的可能手段之一.虽然,非甾体类抗炎药物尚无成功案例,但仍有以其他炎症因子为靶点的药物,如沙利度胺,处于临床试验中,进展良好,值得期待.总之,目前AD药物研发的主要障碍是药物缺乏临床应用指标,特异性不强,而临床试验多由于不良反应以及疗效不足等原因而失败.虽然如此,目前仍有82种AD药物处于临床阶段,其中18种进入了Ⅲ/Ⅳ期临床.同时,计算机设计靶向药物及CRISPR/Cas9等新技术的发展为AD的治疗带来了希望.
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现代电子技术在阿尔茨海默病检测中的应用
阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是为了纪念德国医生阿洛依斯·阿尔茨海默(Alois Alzheimer)而命名的,它是人类的一种不可逆、退行性脑病,患者出现严重的记忆障碍、认知功能障碍、行为和心理症状,如抑郁、应激、焦虑和情绪障碍[1]。另外,AD 患者容易并发感染其他致命性疾病,如人类免疫缺陷病毒感染(艾滋病病毒)、癌症、帕金森等。世界卫生组织将AD 作为一个超过6000亿美元花费的全球范围的社会经济问题。世界卫生组织确认3700万人患痴呆症,其中1700万人为AD 患者。近研究表明,在2050年前,老龄化人口的 AD 发病率将稳定增长至目前的3倍以上[2]。目前的科学技术和水平尚不能治愈AD,因此连续检测 AD 进展成为患者选择治疗和管理疾病的关键。目前,尚不清楚AD 的具体发病机制,存在许多假说,如基因突变、氧化应激、炎症、病毒感染等[3]。当今普遍接受的是淀粉样级联假说。临床研究表明,AD 患者脑和创伤性脑损伤表现出淀粉样肽积累的相似性,主要是β-淀粉样蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)和 Tau 蛋白。患者的脑脊液检测Aβ和Tau 蛋白有望成为生物标志物[4]。Aβ是AD 发病过程中的核心病理,其在脑内的聚集引发系列分子级联作用,造成炎症损伤,对神经元和突触产生毒性作用,引起AD 发生发展。本综述集中于使用现代电子技术检测 Aβ,作为AD 的检测方法。
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衰老模型联合β-淀粉样蛋白1-42建立大鼠阿尔茨海默病模型研究
目的 以3月龄大鼠用D-半乳糖制作衰老模型后联合β-淀粉样蛋白1-42 (Aβ 1-42)制作模拟程度更高、更理想的阿尔茨海默病(AD)大鼠模型.方法 2013年3月-2014年3月选取SD清洁级雄性3月龄大鼠60只,12月龄大鼠40只,通过Morris水迷宫实验后,采用随机数字表法分为5组:3月龄假手术组20只、3月龄对照组20只、3月龄造模组20只、12月龄对照组20只、12月龄造模组20只.3月龄造模组大鼠采用D-半乳糖皮下注射制作衰老模型,观察一般状态、体质量变化,检测血中超氧化物歧化酶(SOD)及脂质过氧化物(MDA)表达水平.3月龄造模组与12月龄造模组大鼠采用Aβ 1-42脑内海马区注射制作AD模型,Morris水迷宫实验测试各组大鼠逃避潜伏期和航行距离,观察各组大鼠海马区神经元形态改变,对比3月龄对照组、3月龄造模组与12月龄造模组大鼠胸腺指数及脾脏指数.结果 大鼠体质量比较,造模与时间有交互作用(P＜0.05);3月龄对照组与3月龄造模组大鼠组间体质量比较,差异有统计学意义(P＜0.05);时间间比较,差异有统计学意义(P＜0.05).3月龄对照组与3月龄造模组大鼠第4、5周体质量比较,差异有统计学意义(P＜0.05);3月龄对照组大鼠不同时间体质量比较,差异有统计学意义(F=85.302,P＜0.05);3月龄造模组大鼠不同时间体质量比较,差异无统计学意义(F=1.371,P＞0.05).3月龄造模组和12月龄对照组大鼠血清SOD水平较3月龄对照组降低,MDA水平较3月龄对照组升高(P＜0.05);3月龄造模组与12月龄对照组大鼠血清SOD、MDA水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05).3月龄造模组、12月龄造模组大鼠逃避潜伏期和航行距离较3月龄假手术组、3月龄对照组和12月龄对照组延长(P＜0.05).组织病理学检查示,各造模组海马CA1区可见神经元受损,呈现退行性改变,细胞核形态不规则,细胞结构被破坏,线粒体、内质网肿胀,线粒体塉消失.3月龄造模组和12月龄造模组大鼠胸腺指数和脾脏指数较3月龄对照组降低(P＜0.05);3月龄造模组与12月龄造模组大鼠胸腺指数和脾脏指数比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 以3月龄大鼠通过皮下注射D-半乳糖制作衰老模型的基础上,在大鼠双侧海马区注射Aβ l-42制备的AD模型,更能耐受后续抗AD药物的干预实验.
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帕金森病痴呆患者外周血血小板β淀粉样前体蛋白表达水平研究
目的：通过观察帕金森病痴呆（ PDD ）患者外周血血小板β淀粉样前体蛋白免疫反应片段之比（βAPPr）的变化，分析βAPPr与PDD的关系，为PDD诊断提供思路。方法收集2011年4月—2014年4月在郑州大学附属洛阳中心医院神经内科就诊的帕金森病（ PD）患者124例，按是否合并痴呆分为PDD组59例和对照组65例。评价简易智能量表（ MMSE）评分、蒙特利尔认知评估量表（ MoCA）评分、临床痴呆评定量表（ CDR）评分、统一帕金森病评定量表（ UPDRS）评分；采用Western blotting法检测外周血血小板βAPPr。结果 PDD组患者受教育年限、MMSE评分、 MoCA评分低于对照组， CDR评分、 UPDRSⅠ评分高于对照组（ P＜0.05）。 PDD组患者外周血血小板βAPPr （5.43±0.92）低于对照组的（7.88±1.32）（ t＝6.28， P＜0.001）。 PDD组患者βAPPr与MoCA评分中视空间与执行能力、命名能力、注意能力、延迟回忆能力、定向力得分均呈正相关（ P＜0.05）。结论 PDD患者血小板βAPPr较PD患者下降，血小板βAPPr有可能成为PDD诊断的外周血生物学指标之一，外周血血小板淀粉样前体蛋白（βAPP）表达水平有可能为研究PDD的发病机制和治疗提供线索。
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何首乌二苯乙烯苷对拟痴呆大鼠学习记忆和海马组织 CA1区脑啡肽酶及低密度脂蛋白相关受体1表达的影响
目的：探讨何首乌二苯乙烯苷（ TSG）对拟痴呆大鼠学习记忆能力及海马组织 CA1区脑啡肽酶（NEP）及低密度脂蛋白相关受体（LRP）-1表达的影响。方法采用随机数字表法将60只大鼠分为 A ~ F 组，每组10只。A 组为对照，背部皮下注射0.9％氯化钠溶液300 mg/ kg，连续6周，1次/ d。B ~ F 组背部皮下注射 D -半乳糖300 mg/ kg 拟阿尔茨海默病（AD）模型，连续6周，1次/ d。造模同时，C 组采用盐酸多奈哌齐0.9 mg/ kg 灌胃，D ~F 组分别给予 TSG 0.05、0.10和0.20 g/ kg 灌胃，连续12周，1次/ d。采用 Morris 水迷宫实验观察大鼠空间记忆能力，前5 d 进行定位航行实验，训练大鼠学习能力，第6天进行空间探索实验，记录大鼠入水角度及穿越平台次数。采用避暗实验观察大鼠被动回避记忆功能，第1天进行训练，24 h 后进行测试，记录5 min 内大鼠进入暗室的次数和潜伏期。大鼠麻醉后眼眶取血，采用放射免疫法检测血清β淀粉样蛋白（Aβ）1-42水平。大鼠处死取脑，采用免疫组化染色，以累计光密度反映海马 CA1区 NEP 和 LRP -1的表达水平。结果各组大鼠入水角度和穿越平台次数比较，差异均有统计学意义（P ﹤0.05）。其中，B 组大鼠入水角度大于 A 组及 C ~ F 组（P ﹤0.05）；B 组穿越平台次数低于 A 组及 C ~ F 组（P ﹤0.05）。各组大鼠潜伏期及遭电击次数比较，差异均有统计学意义（P ﹤0.05）。其中，B 组大鼠潜伏期短于 A 组及 C ~ F 组（P ﹤0.05）；B 组大鼠遭电击次数多于 A、E 组（P ﹤0.05）。各组大鼠血清 Aβ1-42水平及海马 CA1区 NEP、LRP -1累计光密度比较，差异均有统计学意义（P ﹤0.05）。其中，B 组血清 Aβ1-42水平高于 A、E、F 组（P ﹤0.05）；B 组 NEP 累计光密度低于 A 组及 D ~ F 组（P ﹤0.05）；B 组 LRP -1累计光密度低于 A、E 组（P ﹤0.05）。结论何首乌 TSG 可改善拟痴呆大鼠的学习记忆能力，提高大鼠海马组织 CA1区 NEP、LRP -1的表达，增强对 Aβ的降解和转运。
关键词： 阿尔茨海默病 二苯乙烯苷 淀粉样β肽类 脑啡肽酶 低密度脂蛋白受体相关蛋白-1 -
六味地黄丸含药血清对β-淀粉样蛋白损伤大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞的保护作用研究
目的 研究六味地黄丸含药血清(MSLDP)对β-淀粉样蛋白(Aβ) 25-35损伤大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)的保护作用,探讨六味地黄丸在防治阿尔茨海默病(AD)中的作用机制.方法 2012年3月-2013年4月选取SPF级雄性SD大鼠20只,按照随机数字表法将20只雄性SD大鼠分为对照组、给药组,每组10只.制备MSLDP及Aβ25-35母液备用.根据Aβ25-35、MSLDP不同干预浓度将处于对数生长期PC12细胞分为0、10、20、40 μmol/LAβ25-35组和0％、2.5％、5.0％、10.0％、20.0％、30.0％ MSLDP组,另取处于对数生长期PC12细胞分为正常对照组(不加Aβ25-35和MSLDP)、模型组(加入20 μmol/L Aβ25-35制备AD模型)、MSLDP干预组(加入20％ MSLDP+ 20 μmol/L Aβ25-35),显微镜下观察0％、2.5％、5.0％、10.0％、20.0％、30.0％MSLDP组及正常对照组、模型组、MSLDP干预组PC12细胞形态.采用MTF法检测PC12细胞存活率,同上分组方法及步骤采用Western blotting法检测PC12细胞血管内皮生长因子B(VEGF-B)蛋白表达水平.结果 0μmol/L Aβ25-35组PC12细胞存活率高于10、20、40 μmol/L Aβ25-35组(P＜0.05);10 μmol/L Aβ25-35组PC12细胞存活率高于20、40 μmol/L Aβ25-35组(P＜0.05);20 μmol/L Aβ25-35组PC12细胞存活率高于40 μmol/L Aβ25-35组(P＜0.05).0、10 μmol/L Aβ25-35组VEGF-B蛋白表达水平高于20、40 μmol/L Aβ25-35组(P＜0.05);20μmol/L Aβ25-35组VEGF-B蛋白表达水平高于40 μmol/L Aβ25-35组(P＜0.05).0％ MSLDP组PC12细胞存活率低于2.5％、5.0％、10.0％、20.0％、30.0％ MSLDP组(P＜0.05);2.5％ MSLDP组PC12细胞存活率低于5.0％、10.0％、20.0％、30.0％ MSLDP组(P＜0.05);5.0％ MSLDP组PC12细胞存活率低于10.0％、20.0％、30.0％MSLDP组(P＜0.05);10.0％ MSLDP组PC12细胞存活率低于20.0％、30.0％ MSLDP组(P＜0.05).20.0％ MSLDP组PC12细胞存活率低于30.0％ MSLDP组(P＜0.05).显微镜下示0％ MSLDP组PC12细胞形态规则,大小均一;2.5％、5.0％ MSLDP组PC12细胞数目增多,形态正常;10.0％ MSLDP组PC12细胞聚集成片状生长;20.0％、30.O％MSLDP组PC12细胞聚集成片状生长,边缘长出小的棘突,具有分化趋势.0％、2.5％、5.0％ MSLDP组VEGF-B蛋白表达水平低于10.O％、20.0％、30.0％ MSLDP组(P＜0.05);10.0％ MSLDP组VEGF-B蛋白表达水平低于20.0％MSLDP组(P＜0.05);20.0％ MSLDP组VEGF-B蛋白表达水平高于30.0％ MSLDP组(P＜0.05).正常对照组、MSLDP干预组PC12细胞存活率高于模型组(P＜0.05).显微镜观察示正常对照组细胞形态规则,大小均一;模型组细胞数量减少,形态不规则,呈凋亡或死亡的萎缩状,有细胞碎片;MSLDP干预组细胞数量明显增多,部分细胞呈拉伸状有棘突.正常对照组VEGF-B蛋白表达水平高于模型组和MSLDP干预组(P＜0.05);模型组VEGF-B蛋白表达水平低于MSLDP干预组(P＜0.05).结论 MSLDP可增加Aβ25-35损伤的PC12细胞的活性,并对PC12细胞具有保护作用,其机制可能与其可增加VEGF-B蛋白表达水平有关.
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脑部转运体参与β-淀粉样蛋白脑内转运的研究进展
β-淀粉样蛋白(Aβ)的产生及清除异常会影响其脑内的动态平衡.研究表明,位于脑实质及血脑屏障上的转运体在Aβ的产生及清除过程中都发挥重要作用.因此,影响转运体在脑内的表达及活性可能改变Aβ在脑内累积量的变化,进而影响阿尔采末病的病理学过程.本文从ATP结合盒转运体、晚期糖基化终产物受体和低密度脂蛋白受体相关蛋白-1在脑内的分布及对Aβ的产生和清除的影响等方面进行综述.
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阿尔茨海默病的防治研究进展
阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是以进行性记忆和认知功能障碍为主要临床表现的神经系统退行性疾病.全球已有AD患者近3 500万,我国约有600万,已成为威胁老年人生命健康的主要疾病.目前临床上采用胆碱酯酶抑制剂、乙酰胆碱受体激动剂、谷氨酸受体拮抗剂和脑代谢激活剂等来治疗AD,但本质上是对症治疗,不能有效预防或延缓疾病进展.现将AD治疗领域的研究现状和进展进行综述,并对如何有效防治AD作一展望.
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右美托咪定对老年病人术后认知功能及外周血IGF-1和Aβ水平的影响
目的 探讨右美托咪定对老年病人术后认知功能及外周血胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和β样淀粉蛋白(Aβ)水平的影响.方法 择期全身麻醉下行腹腔镜胃癌根治术病人60例,年龄65～80岁,ASAⅡ～Ⅲ级.随机分为对照组(C组)和右美托咪定组(D组),各30例.病人人室麻醉诱导结束后,D组静脉泵注右美托咪定负荷剂量1.0μg/kg,泵注时间15 min,然后以0.5 μg/(kg·h)的速率静脉泵注至术毕前30 min;C组给予等容量生理盐水.分别于麻醉诱导前(T0)、术后1 d(T1)、术后3 d(T2)和术后7 d(T3)采集病人外周静脉血,采用ELISA法测定血清中IGF-1和Aβ水平.两组分别于术前1d、术后7d和1个月时采用简易精神状态量表(MMSE)评价认知功能.结果 与T0比较,两组病人T1～T3时血清Aβ浓度升高,IGF-1浓度降低,差异有显著性(F=75.89、26.60,P＜0.05).与C组比较,D组病人T1～T3时血清Aβ水平降低,IGF-1浓度升高,差异有显著意义(t=2.20～16.33,P＜0.05).C组和D组术后7d术后认知功能障碍(POCD)发生率分别为36.7％和10.0％,两组比较差异有显著性(x2 =4.57,P＜0.05).两组病人术后7d时MMSE评分较术前1d降低(t=2.14、5.42,P＜0.05);D组术后7d的MMSE评分较C组升高(t=7.02,P＜0.05);术后1个月两组病人MMSE评分升高至术前水平(P＞0.05).结论 右美托咪定可以降低病人POCD近期发生率,其机制可能与改变血清中IGF-1和Aβ浓度有关.
