首页 > 文献资料
-
大鼠结膜成纤维细胞中血管内皮生长因子和受体的表达
目的 观察培养的大鼠结膜成纤维细胞中是否表达血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(VEGFR).方法 实验研究.健康Sprague Dawley大鼠5只,分别施行麻醉处死后,剪取球结膜组织,以组织块法接种并培养成纤维细胞.通过荧光倒置显微镜观察细胞培养情况,以间接免疫荧光法检测波形蛋白、角蛋白表达水平,对所培养的成纤维细胞进行鉴定;设计VEGF164、VEGFR-1(Flt-1)、VEGFR-2( Flk-1)3种基因的RNA引物序列,以Trizol法提取成纤维细胞中mRNA,对目的片断进行逆转录PCR扩增及凝胶电泳.扩增产物进行回收及测序,同时采用间接免疫荧光法检测VEGFR-1的表达情况.利用荧光定量PCR法观察培养的成纤维细胞中3种基因的熔解曲线和扩增曲线,同时采用间接免疫荧光法检测VEGFR-1的表达情况.结果 大鼠结膜成纤维细胞中波形蛋白表达阳性,角蛋白表达阴性.逆转录PCR扩增后分别显示VEGF164、Flt-1、Flk-1条带,测序结果符合VEGF164、VEGFR-1(Flt-1)、VEGFR-2( Flk-1)基因序列.荧光定量PCR法检测结果显示上述基因均有陡直的扩增曲线,未见杂峰,指数扩增期均在30个循环内.免疫荧光法检测VECFR-1蛋白表达阳性.结论 大鼠结膜成纤维细胞存在VEGF及其受体的基因表达,有VEGFR-1的蛋白表达,抗VEGF类药物可能对大鼠的结膜成纤维细胞产生影响.
-
青光眼结膜成纤维细胞增生与TGF-β的表达
目的 探讨接受药物治疗的原发性开角型青光眼患者结膜成纤维细胞(human Tenon's fibroblast,HTF)的增殖能力以及与转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)表达的关系.方法 药物治疗的原发性开角型青光眼患者,在抗青光眼手术中取结膜Tenon囊组织并在体外培养到含有不同浓度胎牛血清(FBS)培养基中,检测HTF的增殖情况,用RT-PCR方法检测TGF-β 3种异形体的mRNA表达水平,并与对照组进行对照.结果 实验组的HTF细胞增生明显高于对照组(P=0.001 3).3种TGF-β异形体在mRNA水平均被HTF表达,且实验组的TGF-β2和TGF-β3在mRNA水平的表达显著高于对照组.结论 实验组HTF中增高的TGF-β可能促进细胞增殖,而二者也可能与本研究中至少1 a的抗青光眼滴眼液的持续使用有关.且细胞增生与TGF-β表达提高都促进了抗青光眼滤过术后的切口愈合,从而对手术效果起到负面影响.
-
几丁聚糖对兔结膜上皮细胞和结膜成纤维细胞增殖的影响
目的研究几丁聚糖对兔结膜上皮细胞和结膜成纤维细胞增殖的影响.方法采用消化法培养结膜上皮细胞,组织块法培养结膜成纤维细胞.通过MTT比色法和细胞计数法测定几丁聚糖对两种细胞增殖的影响.结果几丁聚糖在浓度＞0.03%时能促进结膜上皮细胞的增殖,浓度为0.12%时促进作用明显.结膜成纤维细胞在几丁聚糖浓度＞0.03%时其增殖即受到抑制,抑制作用呈浓度依赖性.结论几丁聚糖有望用于预防睑球粘连.
-
以兔自体结膜成纤维细胞为饲养细胞构建上皮细胞植片
近年来用以组织工程技术制备的角膜上皮或口腔黏膜上皮细胞植片成为一种目前治疗角膜缘干细胞缺乏性疾病的新技术[1-2],能够改善角膜缘的功能,恢复角膜表面的完整性.目前的构建体系常用小鼠胚胎组织来源的3T3成纤维细胞作为饲养细胞,但这种含异种细胞的植片可成为异种病原向人体传播的潜在渠道,也存在异种排斥反应的可能性[3].因此寻找更安全的饲养细胞成为完善现有技术的一个关键.本研究观察以兔自体结膜成纤维细胞为饲养细胞、兔口腔黏膜上皮细胞为种子细胞构建上皮细胞植片的可行性.
-
抗青光眼眼表药物与人结膜成纤维细胞TGF-β、MMP的表达
目的:评估抗青光眼眼表药物对原发性开角型青光眼患者结膜成纤维细胞培养中转化生长因子β及基质金属蛋白酶表达水平的影响.方法:用逆转录-聚合酶链式扩增方法(RT-PCR)评估TGF-β的三种异形体(TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3)以及MMP的三种异形体(MMP-2、MMP-3、MMP-9)在POAG患者的HTF中在mRNA水平上的表达;用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法测定经体内、体外抗青光眼眼表药物处理后的POAG患者的HTF细胞培养基中TGF-β1在蛋白水平上的表达.所有实验均以健康组作为对照.结果:TGF-β1、TGF-β2及TGF-β3在mRNA水平上均被HTF表达,且青光眼组在TGF-β2和TGF-β3的mRNA水平上的表达均显著高于对照组.正常对照组在蛋白水平上未测定出转化生长因子β1的表达,青光眼组中转化生长因子β1的表达显著(P＜0.01).青光眼组与对照组的结膜成纤维细胞培养经过体外拉坦前列素滴眼液的处理后,条件培养基中的转化生长因子β1的表达水平相比较未被处理过的培养基中的表达水平显著提高约4倍(P＜0.01),青光眼组与对照组相比较组间无差异.MMP-2和MMP-9在结膜成纤维细胞中均有表达,其中,青光眼组MMP-9的扩增产物中mRNA含量显著低于对照组,约为对照组的1/1 000.结论:体内及体外实验中,青光眼组HTF细胞培养中在mRNA及蛋白水平上增高的TGF-β三种异形体的表达可能导致青光眼组HTF细胞增殖的提高;青光眼组HTF细胞培养中在mRNA水平上缺失的MMP-3和降低的MMP-9的表达可能导致POAG患者结膜下胶原增生,结膜瘢痕化;细胞增殖的提高以及变异的TGF-β与MMP的表达均可能与本研究中POAG患者至少1a的抗青光眼眼表药物的持续使用有关;而三者均会促进抗青光眼滤过术后的切口愈合,从而影响手术效果.
