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以兔自体结膜成纤维细胞为饲养细胞构建上皮细胞植片
近年来用以组织工程技术制备的角膜上皮或口腔黏膜上皮细胞植片成为一种目前治疗角膜缘干细胞缺乏性疾病的新技术[1-2],能够改善角膜缘的功能,恢复角膜表面的完整性.目前的构建体系常用小鼠胚胎组织来源的3T3成纤维细胞作为饲养细胞,但这种含异种细胞的植片可成为异种病原向人体传播的潜在渠道,也存在异种排斥反应的可能性[3].因此寻找更安全的饲养细胞成为完善现有技术的一个关键.本研究观察以兔自体结膜成纤维细胞为饲养细胞、兔口腔黏膜上皮细胞为种子细胞构建上皮细胞植片的可行性.
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人类白细胞抗原G1转染猪内皮细胞降低异种细胞排斥反应的研究
目的研究转染人类白细胞抗原G1(human leukocyte antigen G1,HLA-G1)基因后的猪内皮细胞系(porcine endothelial cells,PECs)细胞,对人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)和自然杀伤细胞92(nature killer cell 92,NK-92)细胞介导的杀伤作用的改变. 方法利用脂质体包裹的方法,将携带HLA-G1基因的真核表达载体pcDNA3.0转染PECs细胞,在蛋白质水平通过间接免疫荧光法、在RNA水平通过RT-PCR,检测HLA-G1的表达;取6名健康志愿者,每人5 ml静脉血,分离出单个核细胞和NK-92作为效应细胞,利用51Cr释放试验来检测其杀伤作用的改变. 结果转染HLA-G1基因后,在转染的内皮细胞中蛋白质水平和RNA水平均检测到HLA-G1基因的表达;PBMC和NK-92细胞介导的对PECs细胞的杀伤作用均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05). 结论转染HLA-G1后的PECs,可有效地降低由人NK细胞介导的杀伤作用,从而为抑制异种细胞排斥反应提供了新的思路.