首页 > 文献资料
-
药物晶体化学的理论与方法
本文结合晶体化学近年来的新研究进展,对晶体化学的理论和方法在药物研究中的应用,进行了初步的探讨和综述.
-
尿中骨桥蛋白的初步分离与鉴定
骨桥蛋白(osteopontin,OPN)是一种富含唾液酸的磷酸化糖蛋白, 近来的研究发现,在体外OPN具有抑制草酸钙晶体生长的活性.
-
连接蛋白43在晶体上皮细胞增殖过程中表达变化的研究
缝隙连接是晶体细胞膜的特征化结构［1］，使细胞间形成了高度发达的通讯网络，以使得晶体内的离子和代谢产物得以交换，从而维持晶体内渗透压和代谢稳态以及晶体的透明。晶体上皮细胞（LEC）是晶体代谢活跃的部分，担负着晶体生长、分化和损伤修复等任务。后发性白内障从白内障囊外摘除术一开始就存在，其中LEC的增殖起重要作用［2］。因此，我们通过检测兔晶体皮质吸出术后不同时期LEC连接蛋白43（Cx43）的变化与核增殖指标增殖细胞核抗原（PCNA）对比，探讨Cx43在LEC增殖过程中的变化规律，为进一步研究Cx43在后发性白内障发生过程中所起的作用奠定理论基础，为选择性抑制Cx43从而预防后发性白内障提供实验依据。
-
细胞因子人脂联素全序列蛋白的真核表达及晶体生长
目的:找寻适用于脂联素全序列蛋白的结晶条件,为解析其空间结构奠定基础,从而研究脂联素聚合体的内在构成模式,为开发高活性脂联素类衍生细胞因子提供参考.方法:首先构建脂联素全序列蛋白的真核表达载体,对其进行诱导表达,然后通过经亲和层析和凝胶过滤分离纯化后,得到高纯度的脂联素全序列蛋白,后尝试使用坐滴法和悬滴法以及多种温度环境和结晶液条件,从而找寻适于脂联素全序列蛋白质的结晶条件.结果:通过纯化后的脂联素蛋白纯度可以达到91.3％,在溶液中的粒径分布于2nm到4nm.在线性变温条件下(24 h内,由277 K线性升温至313K,再线性降温至277 K),通过悬滴法于48 h可获得脂联素全序列蛋白的针状晶体.结论:本研究选择真核载体,以亲和层析和凝胶过滤为分离纯化手段,得到了纯度高,粒径均一的脂联素全序列蛋白.随后通过尝试多种结晶方法、条件和环境,初步确定获得脂联素全序列蛋白晶体的条件,为后续获得高质量单晶提供了参考.
-
人源Fank1蛋白质FN3结构域多肽的原核表达,纯化及晶体筛选
目的 纯化人源Fank 1(fibronectin typeⅢ and ankyrin repeat domain 1)蛋白质N端FN3(fibronectin typeⅢ,Ⅲ型纤黏连蛋白)结构域蛋白,用于晶体生长的三维结构分析.方法 将FN3结构域基因片段克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,将菌落PCR和测序鉴定正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3)后获得表达菌株.该菌株经IPTG诱导高效表达出带有GST标签的可溶性的融合蛋白,经过Glutathione SepharoseTM4B亲和层析、Hiload 16/60 superdex200分子筛层析纯化后,蛋白纯度达到95 %以上.结果 纯化蛋白采用悬滴气相扩散法得到棒状晶体.结论 成功制备了高纯度FN3蛋白,获得FN3蛋白质晶体,为进一步的三维结构解析及Fank 1功能研究奠定了基础.
-
有机基质诱导牙齿再矿化研究进展
牙齿在正常状态下存在脱矿和再矿化的动态平衡过程,抑制牙齿脱矿并促进其再矿化是治疗龋病的一个重要途径.牙齿的再矿化是典型的生物矿化过程,有机基质可以作为模板诱导无机矿物在有机—无机界面上定向组装,改变晶体生长的过程及其终形貌,因此是矿化成核过程中关键的调控因素.研究有机基质诱导矿化的机理和开发能促进牙齿再矿化的有机高分子材料对于龋病的治疗意义重大.20世纪80年代以来,有机模板调控、诱导生物矿化的研究越发活跃,本文将对近年来不同类型有机基质诱导牙齿再矿化的国内外相关研究作一综述.
-
仿生体系中评价磷灰石结合肽的矿化调控活性
目的:评价碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)控释的仿生矿化体系中磷灰石结合肽对钙磷成核及早期晶体生长的影响.方法:固相合成环肽(NH2-CLPLWYPSC-COOH,CLP).构建AP控释的仿生矿化系统.监测磷酸根离子的释放速率及OD820 nm的变化并于扫描电子显微镜(SEM)下观察产物形貌.比较牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)和CLP添加剂对钙磷成核及早期晶体生长的影响.结果:磷酸根离子在矿化起始的0～30 min内持续释放;所观测时间范围内,BSA促进矿化发生且OD820 nm明显高于空白组和CLP组(P<0.05),而CLP抑制矿化反应的发生.SEM结果提示,CLP与矿化前驱体发生相互作用并改变其形貌.结论:AP控释的溶液矿化体系有利于监测CLP对晶体成核及生长的影响,BSA是矿化促进剂而CLP作用于矿化前体,抑制早期的晶体形成并影响其生长方式.
-
二磷酸盐对一水草酸钙晶体体外生长与聚集的影响
应用Blomen建立的体外一水草酸钙结晶动力学研究方法,研究了新近合成的二磷酸盐PPD和PPC对一水草酸钙晶体生长与聚集的影响.实验结果表明:低浓度PPD、PPC (≤10 μmol/L)对草酸钙晶体生长的抑制程度分别为95.4%和6 8.6%,显著高于EHDP(51.7%)和PPI(21.6%) (P<0.01),并具有抑制一水草酸钙晶体聚集的作用(Tmi/Tmc>1),而EHDP促进晶体聚集(Tmi/Tmc＜1).据此推测:PPD、PPC有可能成为一类更有效防治结石复发的药物.
-
幽门螺杆菌黏附素HpaA重组蛋白的表达、纯化及晶体生长
目的 构建幽门螺杆菌黏附素HpaA的原核表达载体,并用纯化的重组HpaA蛋白进行晶体培养,为其三维结构解析、基于结构的HpaA抗原表位分析和黏附拮抗剂研究奠定基础.方法 用生物信息学方法分析HpaA蛋白序列二级结构并预测跨膜区,利用PCR技术扩增幽门螺杆菌标准株NCTC 26695编码HpaA蛋白的hp0797基因非跨膜区片段,构建重组质粒并pET22b(+)-rHpaA,在大肠杆菌BL21(DE3)中IPTG诱导表达重组蛋白,经Ni离子亲和层析、阴离子交换层析、凝胶过滤层析纯化蛋白并分析其聚集状态.用Hampton Research结晶试剂盒搜索结晶条件,并系统优化,在上海同步辐射光源进行衍射实验.结果 成功构建了重组质粒pET22b(+)-rHpaA,并在大肠杆菌BL21(DE3)中可溶性表达;重组HpaA蛋白在溶液中以二聚体形式存在,SDS-PAGE分析单体相对分子质量约24000,HPLC分析纯度达95％;培养出晶形较好的重组HpaA蛋白单晶,大小约70 μm×30 μm× 20 μm,衍射分辨率2.03 A.结论 利用经典的蛋白质表达、纯化技术和晶体培养技术,获得了衍射能力较强的重组HpaA蛋白单晶,为其三维结构解析和基于结构的幽门螺杆菌疫苗研究提供了重要基础.
