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仿生体系中评价磷灰石结合肽的矿化调控活性
目的:评价碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)控释的仿生矿化体系中磷灰石结合肽对钙磷成核及早期晶体生长的影响.方法:固相合成环肽(NH2-CLPLWYPSC-COOH,CLP).构建AP控释的仿生矿化系统.监测磷酸根离子的释放速率及OD820 nm的变化并于扫描电子显微镜(SEM)下观察产物形貌.比较牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)和CLP添加剂对钙磷成核及早期晶体生长的影响.结果:磷酸根离子在矿化起始的0～30 min内持续释放;所观测时间范围内,BSA促进矿化发生且OD820 nm明显高于空白组和CLP组(P<0.05),而CLP抑制矿化反应的发生.SEM结果提示,CLP与矿化前驱体发生相互作用并改变其形貌.结论:AP控释的溶液矿化体系有利于监测CLP对晶体成核及生长的影响,BSA是矿化促进剂而CLP作用于矿化前体,抑制早期的晶体形成并影响其生长方式.
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体外矿化体系中磷灰石结合肽介导的钙磷微粒自组装
目的 在体外矿化体系中探讨磷灰石结合肽NH2-CLPLWYPSC-COOH(CLP)和NH2-CYENLRSTC-COOH (CYE)介导的钙磷微粒的自组装.方法 固相法合成环状肽CYE和CLP.构建碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,AP)控释的溶液仿生矿化体系,将添加剂CYE、CLP和牛血清白蛋白(BSA)以100 μg/mL浓度预溶于体系中,以不含添加剂的体系为阴性对照.监测体系90 min内每5 min A820 nm值的变化情况.扫描电子显微镜(scanning electron microscopy, SEM)和透射电子显微镜(transmission electron microscopy,TEM)观察沉积物形貌及组装模式.结果 BSA促进矿化反应的发生,CLP和CYE则表现为对矿化的抑制.环状肽(特别是CYE)作用于矿化前体并使其形成特殊的片层状结构.陈化28 h和96 h后,CLP和CYE组中的片状钙磷微晶组装形成多孔的纳米颗粒,而阴性对照和BSA组中的矿化球则长至微米级.TEM和选区电子衍射(selected area electron diffraction,SAED)结果证实,添加剂可诱导不同的微晶自组装模式,并延迟非晶相向磷灰石相的转变.结论 磷灰石结合肽CLP、CYE抑制磷酸钙成核,延迟晶体变相,其中CYE可诱导片状微晶自组装成特殊的纳米螺旋管状结构.
